Для проведения сравнительного анализа 24 пациентам было изготовлено 30 пластиночных протезов с базисами из различных видов акриловых пластмасс (11 при полном отсутствии зубов и 19 - при частичном отсутствии зубов), из которых 15 женщин и 9 мужчин. У наблюдаемых пациентов исследовали особенности микробной колонизации протезов, изготовленных из акриловых пластмасс, полученных в результате применения горячего метода полимеризации (Стомакрил, Фторакс). Также в исследованиях изучали микробную колонизацию к участкам съемных зубных протезов, подвергшихся починкам акриловыми материалами холодной полимеризации (Редонт, Протакрил). Они составили группу сравнения (контрольную).
В соответствии с существующими рекомендациями, бактериологические исследования при оценке адгезии бактерий и грибов к различным видам базисных пластмасс осуществляли в отношении двух групп микроорганизмов полости рта:
резидентной группы, которая играет стабилизирующую роль в микро-биоценозе полости рта (микроаэрофильные стрептококки S. sanguis, S. salivarius, P. anaerobius, E. faecialis и бактероиды Prevotella oralis);
пародонтопатогеннной группы, которая обладает факторами вирулентности и может поддерживать развитие различных гнойно-воспалительных процессов в полости рта (актиномицеты A. naeslundii, A. israeli, бактероиды Prevotella melaninogenica, Prevotella gingivalis, Fusobacterium spp).
Забор материала для микробиологического исследования выполняли после припасовки и наложения протезов посредством соскоба с внутренней поверхности протезов на верхнюю челюсть в области резцового сосочка и в области альвеолярного отростка с внутренней поверхности протезов на нижнюю челюсть. Забор материала проводили на следующие сутки, на 7-е сутки, через 1 месяц, через 3 и 6 месяцев пользования протезами с целью количественного и качественного исследования флоры биоплёнки, покрывающей протез в разные сроки после его установки (протезной биоплёнки).
Качественное или видовое изучение микрофлоры полости рта проводили с использованием техники аэробного и анаэробного культивирования. Во всех случаях культивирование проводили при 37° С. После выделения изолированных колоний получали чистые культуры бактерий и грибов на сердечно-мозговом агаре или полужидкой среде АС и осуществляли их идентификацию по комплексу морфологических, культуральных и биохимических признаков с использованием "ключа" для идентификации микроорганизмов полости рта.
Для количественного изучения микрофлоры и оценки колонизации на основании числа колоний, выросших в первичном посеве, определяли содержание каждого вида бактерий из расчёта на 1 см2 адгезивной плёнки для взятия материала (CFU/см2). Для удобства построения диаграмм на рисунках значения микробной обсеменённости переводили в десятичные логарифмы (lg CFU/см2).
Далее производили количественный секторальный высев бактериальной взвеси из транспортной среды. Вид питательной среды и время последующей инкубации определялось задачей качественного исследования микрофлоры.
В наших исследованиях при ортопедическом лечении больных для изготовления съемных зубных протезов использовали базисные материалы из акриловых пластмасс, полученных в результате применения различных методов полимеризации (холодной или горячей), а также материал на основе полиуретана (табл.1).
Таблица 1
Распределение базисных пластмасс на группы по способу их полимеризации
| Полимеризация | Материал на основе полиуретана | |
| Холодная | Горячая | |
| Редонт (Украина) | Фторакс (Украина) | Денталур (Россия) |
| Протакрил (Украина) | СтомАкрил (Россия) | |
При проведении микробиологических исследований in vitro и in vivo мы стремились дать ответ на следующие принципиальные вопросы:
как зависит адгезия и колонизация микробами полости рта от характера материала, используемого для ортопедического лечения и типа полимеризации пластмасс (холодная, горячая, материал на основе полиуретана)?
оказывает ли влияние ортопедическое лечение с применением конструкций из материала на основе полиуретана на характер микрофлоры полости рта?
каковы динамика состава и количества стабилизирующей и вирулентной флоры после комплексного ортопедического лечения пациентов?
Для обоснования прогностических тенденций колонизации базисных материалов теми или иными представителями микробной флоры, в том числе, выявления возможности развития дисбиоза после наложения протезов, обострения пародонтита или повышения риска стоматита в зависимости от степени выраженности адгезии, мы проводили оценку первичной адгезии тест-штаммов анаэробных бактерий и грибов к стандартным образцам исследуемых материалов.
Для проведения исследования по изучению адгезии представителей бактериальной и грибковой флоры полости рта к различным ортопедическим пластмассам в настоящей работе использовали тест-культуры следующих видов микроорганизмов: Streptococcus sanguis, Streptococcus mutans, Peptostreptococcus spp, Prevotella oralis, Prevotella melaninogenica, Fusobacterium spp, Enterococcus faecalis, Actinomyces naeslundii и Candida albicans.
Все штаммы представляли собой клинические изоляты, выделенные из зубодесневой борозды у здоровых людей (стрептококки и бактероиды) или у больных пародонтитом (превотеллы, фузобактерии и грибы кандида).
Штаммы стрептококков Streptococcus sanguis и бактероидов Prevotella oralis были взяты в качестве представителей так называемой "стабилизирующей флоры" в составе микробиоценоза полости рта, так как от их присутствия зависит стабильность и соотношение других компонентов слизистой оболочки полости рта, десневой борозды и зубного налета. В норме содержание этих бактерий в материале находится в пределах 5-6 lg CFU/ml.
Вместе с тем увеличение количества бактерий этих видов в пределах 7-9 lg CFU/ml наблюдается при различных воспалительных процессах слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта.
Штаммы грамотрицательных палочек Fusobacterium spp и Prevotella melaninogenica были взяты для эксперимента в качестве наиболее агрессивных представителей анаэробной микрофлоры, имеющих гистологические ферменты и эндотоксины. Оба вида относятся к пародонтогенной группе, так как количество их резко возрастает при обострениях хронического генерализованного пародонтита. В норме и в период ремиссии пародонтита представители этого вида не выделяются или выделяются в незначительном количестве(2-4 lg CFU/ml).
Штаммы грибов Candida albicans были взяты для проведения исследований, так как грибы являются важнейшим фактором развития протезных стоматитов и дисбактериоза полости рта при снижении механизмов неспецифической резистентности организма.
Методы статистической обработки и анализа данных.
Результаты исследований разработанных материалов обрабатывали методами вариационной статистики с расчетом средних величин (М), среднего квадратичного отклонения (d) и ошибки средней величины (m). Достоверность различий в показателях соответствующих методов исследования определяли с помощью критерия " t " Стьюдента. Статистически достоверным считалось значение, которому в таблице соответствовало значение p £ 0,05, т.е. вероятность равная 95% и более.
Результаты собственных исследований и их обсуждение.
Оценка результатов адгезии данных представителей бактериальной и грибковой флоры полости рта в эксперименте in vitro позволила нам сделать выводы о вероятной дестабилизации микрофлоры полости рта и повышения риска развития заболеваний слизистой оболочки полости рта воспалительного характера в зависимости от степени выраженности адгезии микроорганизмов к различным видам базисных материалов.
Установлено, что съемные протезы с базисами из акриловых пластмасс быстро колонизируются представителями резистентных и вирулентных видов микробов уже на первые сутки, причём, в последующем уровень колонизации прогрессирующе нарастает. Микробная колонизация вирулентных видов бактерий и грибов Candida на базисах из акриловых пластмасс составляла на первые сутки: Стомакрил - 108 КОЕ, Фторакс - 107 КОЕ, Протакрил - 107 КОЕ, Редонт - 106 КОЕ.
Напротив, на съемных протезах с базисами из полиуретана колонизация вирулентных видов бактерий и грибов рода Candida гораздо ниже, чем на протезах с базисами из различных видов базисных пластмасс. Средний уровень колонизации в первые сутки - 102 КОЕ (P<0,05).
Максимальный показатель уровня колонизации съемных протезов был отмечен на 7-е сутки после наложения протезов и составлял соответственно: на полиуретане – 103 КОЕ, Стомакриле и Фтораксе – 105 КОЕ, Протакриле и Редонте – 109 КОЕ. Таким образом, уровень колонизации на полиуретановые конструкции на 7-ые сутки был достоверно ниже (P<0,05).
Заслуживает внимания тот факт, что важнейшие стабилизирующие виды микробной флоры полости рта обладают способностью к колонизации протезов с базисами из полиуретана примерно в той же степени, что и к акриловым протезам. Такие представители стабилизирующей флоры, как S. Sanguis, Corynebacterium spp., Veillonella spp., по-видимому, являются гарантией стабильности микробиоценоза и способствуют благоприятному течению периода адаптации к протезу. Уровень адгезии стабилизирующих видов микроорганизмов к базисам из полиуретана 105-106 КОЕ, по сравнению с акриловыми 108 КОЕ.
Дальнейшее изучение динамики адгезии микроорганизмов (через 1, 3, 6 месяцев после наложения протезов) к базисам из полиуретана и различным видам базисных пластмасс позволило выявить тенденцию количественной и видовой стабилизации представителей микрофлоры полости рта на зубных протезах.
Сравнительный результат анализов первичной адгезии к разным базисным пластмассам позволил рекомендовать для клинического применения базисный материал на основе полиуретана, который не давал столь выраженной адгезии микробов, как акриловые пластмассы (в частности акриловые пластмассы холодной полимеризации).