Экспертиза рыб и рыбных продуктов. Химический анализ (стр. 2 из 9)

5. В тигли насыпать примерно по 1…5 г воздушно-сухого вещества анализируемой пробы, а затем взвесить их по отдельности на аналитических весах.

При проведении количественного определения общего содержания минеральных веществ непосредственно в сырых пробах ход определения остается тот же, что и при анализе воздушно-сухого вещества. Исключение составляет лишь навеска, которая берется для озоления сырого материала, она должна быть около 3…15 г.

6. Определить в каждом тигле величину взятой на анализ навески исследуемого материала, что легко можно установить по разности между массой тигля с содержимым и массой пустого тигля.

7. Поставить тигли с содержимым в муфельную печь. Нагрев печи в первые 20…40 мин сжигания не должен быть сильным; затем ее постепенно доводят до темно-красного каления.

8. Спустя 10…15 мин после того, как прекратится выделение дыма и материал обуглится, вынуть тигли из муфельной печи и охладить их на воздухе.

9. Для ускорения сжигания органических веществ надо в каждый тигель прибавить 4…6 капель концентрированной азотной кислоты, а затем их вновь поставить в муфельную печь, температура в которой первоначально должна быть около 80…100°С.

10. Закончив выпаривание окислителя, которое продолжается в течение 10…15 мин, усилить нагрев муфельной печи до темно-красного каления. При таком нагреве муфеля органические вещества, как правило, полностью сгорают в течение 30…40 мин.

11. Вынуть тигли с полученной золой из муфельной печи и поставить их для охлаждения в эксикатор.

12. Взвесить на аналитических весах охлажденные тигли.

13. По разности между массой тигля с оставшимися в нем минеральными веществами и массой пустого тигля определить массу золы.

14. Определить процент золы в воздушно-сухом веществе анализируемой пробы по формуле:

а х 100

Х_{о‗ = ---------------- , где}

Р₂

Х_{о –} процент золы в воздушно-сухом веществе;

а – масса золы в сожженной навеске воздушно-сухого вещества;

Р_{2 -} навеска воздушно-сухого вещества, взятая на озоление.

15. Сравнить полученную величину процента золы в воздушно-сухом веществе анализируемой пробы с величиной процента параллельного определения. Их разница не должна превышать 0,15%.

16. Принять среднеарифметическую величину двух параллельных определений за окончательный процент золы в воздушно-сухом веществе анализируемой пробы.

17. Установить путем пересчета процент золы в абсолютно сухом веществе анализируемой пробы по формуле:

Х_{о х 100}

Х = ¾¾¾ , где

100- В₁

Х _- процент золы в абсолютно сухом веществе;

Х_{о – процент} золы в воздушно-сухом веществе;

В_{1 – процент гигроскопической влаги в воздушно-сухом веществе.}

18. Установить путем пересчета процент золы в сыром материале анализируемой пробы по формуле:

Х_{о х А} Х х А

Х_{1═ ¾¾¾¾} или Х_{1 ═ ¾¾¾¾¾ , где}

100 100

Х_{1 –} процент золы в сыром материале;

Х_{о –} процент золы в воздушно-сухом веществе;

А_{1 –} процент воздушно-сухого вещества в сырой пробе;

Х - процент золы в абсолютно сухом веществе;

А – процент абсолютно сухого вещества в сырой пробе.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОТЕИНА

Наличие протеина в том или ином исследуемом материале устанавливают на основе количественного определения общего азота. Содержание же последнего можно установить методом Къельдаля. Этот метод заключается в том, что органические вещества при нагревании с концентрированной серной (Н_2SО4) кислотой разрушаются, а весь аммиак улавливается кислотой, образуя с ней сернокислый аммоний. Из полученной соли аммиак вытесняется крепкой щелочью и поступает под действием водяного пара в титрованный раствор серной кислоты, где он вновь образует сернокислый аммоний. Затем оставшуюся в этом растворе свободную серную кислоту нейтрализуют титрованным раствором NaOH или КаОН, что дает возможность узнать, сколько азота заключено в аммиаке, прореагировавшем с кислотой. Установив количество азота в навеске исследуемого материала, вычисляют количество протеина, принимая при этом среднее содержание в нем азота 16%.

Ход определения

1. Насыпать в пробирку около 200…300 мг исследуемого материала, находящегося в воздушно-сухом состоянии, и взвесить ее на аналитических весах.

Если определение протеина проводится непосредственно в сырой пробе, то берут на анализ 1…1,5 г исследуемого материала.

2. Перенести содержимое пробирки на дно колбы Къельдаля, предназначенной для сжигания органических веществ.

3. Взвесить пустую пробирку, а затем по разности между массой пробирки с содержимым и массой опорожненной пробирки установить величину навески, помещенной в колбу.

4. Отмерить в цилиндре 5…10 см3 концентрированной серной кислоты и облить ею помещенную в колбу навеску.

5. На кончике шпателя добавить в колбу в качестве катализатора около 100 мг медного купороса, а затем прикрыть ее стеклянной пробкой (втулкой).

6. Колбу вместе с содержимым поставить на нагревательный прибор (электроплитку или газовую горелку) в вытяжной шкаф и приступить к сжиганию органических веществ сначала на слабом огне, а затем, усилив огонь, довести содержимое колбы до полного осветления. Обычно сжигание продолжается несколько часов.

7. Выключить нагревательный прибор и дать колбе остыть.

8. Очень осторожно маленькими порциями прилить в колбу по ее стенкам небольшое количество дистиллированной воды и вновь перемешать.

9. Перелить содержимое колбы Къельдаля в мерную колбу емкостью 100…250 мл.

10. Колбу Къельдаля несколько раз промыть дистиллированной водой, которую слить в ту же мерную колбу.

11. В мерную колбу долить до метки дистиллированной воды.

12. Закрыть мерную колбу пробкой и сделать несколько вертикальных перемешиваний ее содержимого.

13. Налить из микробюретки в сто- , двухсотмиллиметровую коническую узкогорлую приемную колбу 5…15 мл 0,01 – нормального раствора серной кислоты, добавить две капли двухцветного индикатора и поставить колбу под холодильник аппарата Къельдаля. Проследить за тем, чтобы конец трубки холодильника был погружен в отмеренное количество 0,01-нормального раствора серной кислоты.

14. Взять пипеткой из мерной колбы 10…25 мл анализируемой жидкой пробы и перелить ее в отгонную колбу, вмонтированную в аппарат Къельдаля при помощи шлифа, соединяющего ее с насадкой.

15. Налить через воронку 6 (см. рис.1) в парообразователь аппарата Къельдаля дистиллированной воды не больше 2/3 объема колбы и включить нагревательный прибор.

16. После того как вода в парообразователе закипит, открыть кран воронки 15 и влить через нее в отгонную колбу 5…10 мл 33-процентного раствора едкого натра.

17. Не дожидаясь того момента, когда вся щелочь пройдет по трубке в отгонную колбу, промыть дистиллированной водой воронку и закрыть ее кран.

18. Отгонку аммиака продолжать 10…20 мин. За это время аммиак, как правило, переходит из отгонной колбы в приемную. Для того, чтобы убедиться, что весь аммиак перешел в приемную колбу, обычно пользуются лакмусовой бумажкой, которая от капли отгона не должна менять свой цвет.

19. Промыть конец трубки холодильника дистиллированной водой, сливая воду в приемную колбу.

20. Отнять приемную колбу от холодильника, а затем включить нагревательный прибор.

21. Оттитровать содержимое приемной колбы 0,01- нормальным раствором едкого натра.

22. Из числа миллилитров 0,01-нормального раствора серной кислоты, первоначально взятого в приемную колбу, вычесть число миллилитров 0,01-нормального раствора едкого натра, пошедшего при титровании на нейтрализацию свободной кислоты, в результате чего будет получено число миллилитров 0,01-нормального раствора серной кислоты, пошедшее на связывание аммиака.

23. Умножить 0,14 на число миллилитров 0,01-нормального раствора серной кислоты, нейтрализованное аммиаком. Произведение покажет количество миллиграммов азота, которое содержалось в аммиаке, отогнанном из 10…25 мл анализируемой жидкой пробы.

24. Установив массу азота в отогнанном аммиаке, определить путем арифметического пересчета общее количество азота во всем объеме исследуемой жидкой пробы, находящейся в мерной колбе. В результате будет получено количество азота, которое содержалось в сожженной навеске анализируемого материала.

25. Определить процент азота в воздушно-сухом веществе анализируемой пробы по формуле:

а х 100

Х_о =---------- _, где

Р₂

Х_{о -} процент азота в воздушно-сухом веществе;

а - масса азота во взятой на анализ навеске воздушно-сухого вещества;

Р₂ - навеска воздушно-сухого вещества, взятая на анализ.

26. Сравнить полученную величину процента азота в воздушно-сухом веществе анализируемой пробы с величиной процента параллельного определения. Допустимое расхождение в данных величинах не должно превышать 0,15%.

27. Принять среднеарифметическую величину двух параллельных определений за процент азота в воздушно-сухом веществе анализируемой пробы.

28. Умножить процент азота, установленный для воздушно-сухого вещества анализируемой пробы, на коэффициент 6,25. В результате будет получен процент протеина в воздушно-сухом веществе данной пробы.

29. Установить при помощи пересчета процент протеина в абсолютно сухом веществе анализируемой пробы по формуле:

Х_{о х} 100

Х =------------ _, где

100 - В ₁

Х – процент протеина в абсолютно сухом веществе;

Х_о – процент протеина в воздушно-сухом веществе;

В₁ – процент гигроскопической влаги в воздушно-сухом веществе.

30. Установить при помощи пересчета процент протеина в сыром материале анализируемой пробы по формуле: