3. Среда: стерильное обезжиренное молоко, проверенное на отсутствие ингибирующих веществ.
4. Протокол измерения.
4.1. Установить температуру 40 -С на приборе "Bac Trac".
4.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 4 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 30%
Е-параметр 0 - 50%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
М-параметр 4%
Е-параметр 10%.
Проводить учет результатов по М-параметру.
Пороговое значение по времени
(Time limit 1) 1 ч.
5. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл стерильного обезжиренного молока.
6. Добавить 1 мл исследуемого образца из соответствующего разведения продукта согласно нормативным документам МБТ N 5961-89.
6.1. Если количество ингибирующих веществ определяется в 1 г образца, то необходимо приготовить суспензию в соотношении 1:2 (образец, физ. раствор соответственно) и внести в измерительную ячейку 2 мл к 8 мл стерильного обезжиренного молока. В контрольную ячейку вносится 2 мл физ. раствора вместо образца.
7. Для контроля используйте одну измерительную ячейку с 9 мл стерильного обезжиренного молока (без инокулята) и 1 мл физ. раствора.
8. Внести 0,1 мл тест-культуры Streptococcus thermophylus в опытные и контрольную ячейки.
9. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).
10. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения.
11. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Учет результатов основан на сравнении степени угнетения роста тест-культуры ингибирующими веществами, содержащимися в испытуемом материале, с ее ростом в контрольной ячейке (рис. 8.1). Оценка осуществляется по двум параметрам:
1) время пересечения 4% порогового значения по М-параметру менее чем за 1 ч; 2) диапазон масштаба изменения импеданса по М-параметру за 2,5 ч. Если исследуемый образец содержит ингибирующие вещества, то наблюдается увеличение времени пересечения порогового значения по М-параметру и уменьшение масштаба изменения импеданса по М- параметру по сравнению с контролем (тест-культура).
9. Типичные кривые изменения импеданса при исследовании санитарно-показательных, потенциально патогенных и патогенных микроорганизмов (рисунки кривых не приводятся)
10. Инструкции по приготовлению питательных сред
10.1. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 001А BiMedia 001A - определение общей микробной численности
1. Растворить необходимое количество среды в дист. воде (соотношение указано на упаковке).
2. Разделить приготовленную среду на порции и стерилизовать при 1 атм. 15 мин.
3. После стерилизации среда должна уравновеситься в течение 6 часов при комнатной температуре. Примечание: приготовленная среда должна храниться при 4 -C. Срок хранения - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.2. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 160B BiMedia 160В - определение БГКП (колиформы)
1. Растворить необходимое количество среды в дист. воде (соотношение указано на упаковке).
2. Разделить приготовленную среду на порции и автоклавировать при 1 атм. 15 мин. 3. После стерилизации среда должна уравновеситься в течение 6 часов при комнатной температуре. Примечание: приготовленная среда должна храниться при 4 -С. Срок хранения - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.3. Инструкция по приготовлению среды Pre-Media 205A Pre-Media 205A - среда для предобогащения сальмонелл
1. Растворить Pre-Media 205A в стерильной дистиллированной воде из расчета 26 г на 1 л воды.
2. Довести рН до 7,2 +/- 0,1 (если необходимо).
3. Разделить приготовленную среду на порции по 500 мл.
4. Автоклавировать среду при 1 атм. 15 мин. 5. Дать остыть среде при комнатной температуре. Примечание: приготовленная среда должна храниться при 4 -С. Срок хранения - 3 недели. Длительное нагревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.4. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 201B BiMedia 201B для определения сальмонелл Среда BiMedia 201В - модификация среды Rappaport-Vassilidas. 1. Растворить необходимое количество среды BiMedia 201B и добавки Supplement 201B в дист. воде (соотношение указано на упаковке). 2. Довести рН среды от исходного 5,7 - 6,2 (сразу после растворения) до 6,8 +/- 0,1, медленно (по каплям) добавляя 2 N р-р NaOH при постоянном перемешивании на магнитной мешалке, избегая выпадения осадка. 3. Разлейте приготовленную среду по флаконам по 500 мл и пастеризуйте на водяной бане при 80 -С в течение 10 мин. Для контроля температуры используйте дополнительный флакон с 500 мл воды и помещенным в него термометром. После того как температура в контрольном флаконе достигнет 80 -С, необходимо продолжать прогревание еще 10 мин. В качестве альтернативы можно использовать прогревание среды на пару при 100 -С в течение 10 мин. В этом случае можно не контролировать время, необходимое для достижения требуемой температуры. Не стерилизовать среду автоклавированием! 4. После пастеризации необходимо быстро охладить среду холодной водой до комнатной температуры. 5. Выдержать среду при комнатной температуре в течение 6 часов или в холодильнике (2 - 8 -С) в течение ночи перед использованием. 6. Приготовление аддитивов (добавок) 201В/1 и 201В/2. Оба аддитива (201В/1 и 201В/2) рассчитаны на 1 л среды. а) Растворить содержимое флакона аддитива 201В/1 в 1 мл 96% этанола. Добавить 1 мл р-ра аддитива во флакон с 1 л среды. б) Добавить 2 мл стерильной дист. воды во флакон с аддитивом 201В/2. Добавить 2 мл р-ра аддитива 201В/2 во флакон с 1 л среды. Примечания. Аддитивы следует добавлять только непосредственно перед использованием среды! Все аддитивы должны храниться при 4 -С. Максимальный срок хранения приготовленной среды (с аддитивами) - 3 дня при 2 - 8 -С. Максимальный срок хранения растворов аддитивов - одна неделя при 2 - 8 -С. Приготовленная среда BiMedia 201B без аддитивов может использоваться в течение 3 недель при 2 - 8 -С. При продолжительном сроке хранения рекомендуется заменить этап пастеризации среды стерилизацией с использованием мембранных фильтров. Выпадение небольшого количества осадка, а также помутнение раствора среды в процессе хранения допускается. Более продолжительное прогревание среды, а также обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.5. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 205А BiMedia 205A для определения сальмонелл - Selenite-Cystine media 1. Растворить BiMedia 205A (среда) и Additive 205A (добавка) в стерильной дист. воде из расчета 24,6 г среды и 5,6 г добавки на 1 л воды. Для приготовления среды используйте стерильные шпатели и колбы, избегайте загрязнения оставшегося в упаковке порошка. 2. Нагреть раствор до 60 -С (для быстрого растворения). Не стерилизовать среду автоклавированием! 3. Проверить рН среды и, если необходимо, довести рН среды в стерильных условиях до 7,2 +/- 0,1. 4. Перед использованием необходимо выдержать среду при комнатной температуре в течение 4 - 6 часов или в холодильнике (2 - 8 -С) в течение ночи. Примечания. Приготовленная среда должна храниться при 2 - 8 -С. Срок хранения - 1 неделя. Для увеличения срока хранения (более 1 недели) рекомендуется провести стерилизацию среды фильтрованием. Если во время хранения в среде образовался красный осадок, то среда не пригодна к использованию. Длительное нагревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.6. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 301А BiMedia 301A для определения энтерококков 1. Растворить все содержимое упаковки в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 1 л, 2 л или 5 л в зависимости от объема, указанного на упаковке. 2. Разделить среду на порции по 500 мл. 3. Автоклавировать среду при 1 атм. в течение 15 мин. 4. Перед использованием необходимо выдержать среду при комнатной температуре в течение 6 часов. 5. Добавить 1 флакон аддитива (Additive 301А), растворенного в 1 мл стерильной дист. воды, к 500 мл основной среды. Примечания. Аддитив следует добавлять непосредственно перед использованием среды; хранить аддитивы при 4 -С до использования. Срок хранения приготовленной среды при 4 -С - 3 недели. Длительное нагревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.7. Инструкция по приготовлению среды Pre-Media 350A Pre-Media 350A - среда для предобогащения Staphylococcus aureus 1. Растворить Pre-Media 350A в стерильной дистиллированной воде из расчета 32,4 г на 500 мл воды. 2. Довести рН, если необходимо, до 6,9 +/- 0,2. 3. Автоклавировать среду при 1 атм. в течение 15 мин. 4. Выдержать среду при комнатной температуре в течение 6 часов или в холодильнике (2 - 8 -С) в течение ночи перед использованием. 5. Растворить аддитивы (Additive 350В/1 и Additive 350B/2) в 2 - 4 мл стерильной дист. воды каждый и добавить к 500 мл среды Pre- Media 350A. 6. Добавить 0,7 мл 3,5%-ного раствора теллурита калия к 500 мл среды Pre-Media 350A. Теперь среда Pre-Media 350A готова к использованию. Примечания. Аддитивы 350В/1 и 350В/2 следует добавлять непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы в темноте при 2 - 8 -С до использования. Приготовленная среда должна храниться в холодильнике при 2 - 8 0Q. Срок хранения приготовленной среды (без аддитива) при 2 - 8 -С - 3 недели. Срок хранения приготовленной среды с аддитивом при 2 - 8 -С - 3 дня. Срок хранения аддитива после вскрытия - 1 неделя. Длительное нагревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.8. Инструкция по приготовлению среды ВiMedia 350A BiMedia 350A для определения Staphylococcus aureus 1. Растворить необходимое количество среды в дист. воде (соотношение указано на упаковке). 2. Разделить среду на порции по 500 мл. 3. Автоклавировать среду при 1 атм. в течение 15 мин. 4. Перед использованием необходимо выдержать среду при комнатной температуре в течение 6 часов. Примечания. Приготовленная среда должна храниться при 4 -С. Срок хранения приготовленной среды при 4 -С - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!