Перевагу за для індикації МПВ надають генетичним методам. ПЛР - це чутлива та специфічна реакція, яка дозволяє виявляти МПВ безпосередньо у зразках тканин. Вірусна РНК ампліфікується та ідентифікується у ПЛР з використанням праймерів до консервативної ділянки нуклеокапсидного гену [24, 25,26].
У тесті ПЛР - специфічному до конкретного підтипу, використовуються специфічні праймери для ідентифікації таких підтипів МПВ як А,В,С і D.
Інший тест заснований на серотипуванні в ПЛР. У цьому тесті використовується один комплект праймерів RТ-РСR для ампліфікації цілого гену від усіх підтипів МПВ. Був розроблений універсальний праймер для ампліфікації гіперваріабельної ділянки МПВ, що дозволяє відокремлювати референтні штами від інших підтипів або варіантів МПВ [27] . Метод ПЛР використовують для виявлення F, М, N і G генів МПВ, але із-за молекулярної різнорідності важко встановити до якого типу відноситься МПВ. Послідовність нуклеотиду і аналіз філогенезу гена G була анологічна до підтипів А, B, C і D [27].
Дослідження різновидів підтипу успішно використовуються для постановки діагнозу [27,28]. Проте, існує обмеження специфічних для підтипу досліджень, коли проводиться діагностична перевірка на респіраторні захворювання. Різноманітні методи ПЛР були вивчені і оцінені при дослідженні змивів птиці [29,30]. Носові змиви необхідно відбирати не пізніше третьої доби від початку захворювання. ПЛР проводиться за температури 42°C впродовж 50 хвилин, а завершується за температури 70°C впродовж 15 хв. до інактиваціїферменту [31,32].
Прямий автоматизований цикл секвенування продуктів ПЛР дозволяє швидко ідентифікувати польові штами вірусу, включаючи нові, раніше не досліджувані підтипи, а також швидко виявити РНК вірусу в алантоїсній рідині інфікованих КЕ.
Філогенетичний аналіз, заснований на секвенуванні амінокислот, показав, що польовий ізолят відноситься до нової філогенетичної гілки, через те, що має нуклеотидні вставки у гіперваріабельній ділянці гену [33].
Специфічного лікування МПВІ не розроблено, але хворобу можна успішно профілактувати, проводячи регулярну дезінфекцію приміщень, створюючи задовільні умови утримання і - звичайно ж, вакцинацію. Птиця, що перехворіла, резистентна до зараження гомологічним штамом вірусу впродовж 5-6 місяців. Для профілактики інфекції в птахогосподарствах України застосовуються як інактивованні, так і живі вакцини з атенуйованих штамів. Введення вірус - вакцин здійснюється - випоюванням або спреєм. У резистентності птиці важливу роль відіграє місцевий тканинний імунітет респіраторного тракту. Курчата, вакциновані аерозольно живим вірусом, резистентні, навіть якщо в сироватці крові немає специфічних антитіл. Встановлена пряма залежність між стійкістю птиці до зараження вірулентним вірусом і наявністю гістопатологічних змін у гарднерових залозах після вакцинації.
Вакцинація бройлерів проти МПВІ все частіше проводиться в добовому віці. Проте, одного щеплення недостатньо щоб забезпечити захист від вірусу на весь період вирощування. Ревакцинація може не тільки подовжити імунітет, але і розширити антигенний спектр захисту від МПВІ.
Необхідно враховувати формування перехресної стійкості різними серотипами МПВ. Вакцинація птиці одним серотипом викликає стійкість до інших. Чим вище різниця в антигенній структурі ізолятів вірусу, тим нижче перехресна стійкість. При загрозі МПВІ необхідно використовувати вакцини з різними варіантами вірусу.
Програма імунопрофілактики повинна включати при першій граунд - іммунізаціїкурчат високо - атенуйовані штами вірусу і сильніші імуногенні для подальших щеплень. Вибір конкретного штаму повинен залежати від циркуляції його в регіоні [34].
В той же час, застосування в стаді комбінованої програми імунізації із застосуванням різних вакцин, забезпечує широкий спектр захисту респіраторного тракту проти гетерологічних підтипів.
Деякі дослідники вважають, що вакцинація проти МПВІ буде ефективною за наявності материнських антитіл, інші ж доводять, що імунізувати курчат необхідно тоді, коли материнський імунітет вже відсутній [35].
В Україні щеплення курей проти МПВ проводиться як з використанням живих, так і інактивованих вакцин фірми Intervet (Голландія). Живі, Нобіліс RTV 8544 і Нобіліс TRT, які містять штам BUT 1 # 8544: > = 3,0 log10 ТЦІД50,BUT 1 # 8544: > = 2,5 log10 ТЦІД50 добре зарекомендували себе в промисловому птахівництві. Також застосовують фірми Пулвак TRT серотипу А (штаму CloneK), що культивується у клітинах VERO. Інактивовані вакцини, до складу яких входить МПВ, ХН, ІБ і ССЯ використовуються після введення живої вакцини. Звичайно використання інактивованої вакцини необхідно через 4–6 тижнів після останнього введення живої вакцини. Вакцини вводять у грудні мязи в дозі від 0,3 до 0,5 мл. залежно від виду вакцини. [36].
У Європі і Великобританії зараз відомий варіант, що відноситься до підтипу D, протиякого ще не розроблено вакцин [37].
Ефективність вакцинації залежить від імуногенності вакцинного штаму, наявності пасивного імунітету, віку курчат, дози і методу введення вакцини, дотримання термінів між щепленнями, техніки вакцинації та ін. Тому схему і метод вакцинації повинні розроблятися для кожного господарства, виходячи з їх епізоотичної ситуації. При проведенні профілактичної вакцинації необхідно дотримуватися створення 100%-ного напруженого імунітету у птиці всіх вікових груп. Цього можна досягти в тому випадку, якщо в господарстві добре організована система контролю поствакцинального імунітету. Ефективність вакцинації проти МПВІ можна оцінювати двома способами: біопробою і визначенням титру антитіл в сироватці крові методом ІФА. Для цього через 12-15 днів після вакцинації беруть кров від 25 курчат з 5-6 точок кожного пташника. Напруженість імунітету перевіряють також за декілька днів перед наступною вакцинацією. У загрозливих і неблагополучних господарствах напруженість імунітету у дорослої птиці перевіряють через кожні 60 днів. Вакцинацію вважають ефективною, якщо у 80% досліджувальних зразків сироватки крові знаходять високі титри антитіл, а менші служать показником необхідної ревакцинації птиці [36].
Висновки
МПВІ є гострим інфекційним захворюванням курей, яке характеризується трахеальними хрипами, кашлем, чханням. Крім того, при цьому захворюванні вражаються яйцеводи і якість яєць погіршується.
МПВІ поширена по всьому світу. Виходячи з літературних даних, він на сьогодні актуальніший в промисловому птахівництві, чим ІЛТ, респіраторний мікоплазмоз, сальмонельоз, хвороба Марека.
МПВ може розмножуватися в тканинах дихальних шляхів, кишковому тракті і яйцеводі. Звичайні штами вірусу незалежно, від тропності, легко ушкоджують дихальні шляхи курей і викликають характерні ураження трахеї. Найчастіше птиця видужує, якщо за респіраторною фазою не слідує ускладнення бактерійною інфекцією.
Аналіз сироваткових антитіл використовується для контролю дії вакцини і польової інфекції. Серологічні дослідження зазвичай виконуються за допомогою тестів РН, РТГА або ІФА.
Для запобігання втратам від МПВІ необхідна вакцинація як живими, так і інактивованими вакцинами. Живі вакцини використовують для бройлерів і первинної імунізації племінних курей і промислових несучок. Інактивовані масляно-емульсійні вакцини застосовують на початку яйцекладки.
Список літератури
1. Naylor. C.J. Turkey rhinotracheitis virus: a review [Text] / C.J. Naylor, R.C. Jones // Veterinary Bulletin. – 1993.-Vol..63.-P. 439-449.
2. Avian pneumovirus infection of laying hens: experimental studies [Text] / J.K.A Cook. [et al] // Avian Pathology. – 2000.- Vol. 29.- P. 545-556.
3. Buys S.B. Swollen head syndrome in chickens: a preliminary report on the isolation of a possible aetiological agent [Text] / S.B.Buys, J.H. Du Preez, H.J. Els // Journal of the South African Veterinary Association. – 1989. - Vol. 60 P. 221-222.
4. Cavanagh D. Pneumovirus-like characteristics of the mRNA and proteins of turkey rhinotracheitis virus [Text] / D. Cavanagh, T Barrett // Virus Research II. – 1988. - P. 241-256.
5. Pringle. C.R. Virus taxonomy [ Text] /C.R. Pringle //. Archives of Virology. – 1998. Vol 143. - P. 1449-1459.
6. Pringle C.R Demonstration of a candidate virus for turkey rhinotracheitis in experimentally inoculated turkeys [Text] / C.R. Pringle// Veterinary Record.– 1986.Vol. 119. - P. 599-600.
7. Immunogold labelling of turkey rhinotracheitis virus [Text] / C.J.O'Loan [et al] // Zentralhlatt fur Veter-inarmedizin Peine B - 1992 Vol 39. - P. 459-466.
8. Antigenic differentiation of avian pneumovirus isolates using polyclonal antisera and mouse monoclonal antibodies [Text] / M.S.Collins [et al] // Avion Pathology. – 1993.. – Vol 22. - P. 469-479.
9. Antigenic differentiation of strains of turkey 541 rhinotracheitis virus using monoclonal antibodies [Text] / J.K. Cook [et al] // Avian Pathol – 1993 Vol 22 P. 257–273.
10. Isolation of a pneumovirus 629 from a Muscovy duck [Text] / D. Togvin [ et al] // Vet. Rec – 1999. -Vol. 145. - P. 680.
11. American subgroup C isolates of avian metapneumovirus belong to different genetic lineages [Text] / D. Togvin [et al] // Virus Genes. – 2006. - Vol. 637 32. - P. 97–103.
12. Juhasz. K. Extensive sequence variation in the attachment (G) protein gene of avian pneumovirus; evidence for two distinct subgroups [Тext] / K.Juhasz, A.J.Easton // Journal of General Virology.– 1994. - Vol. 75. - P. 2873-2880.
13. Antigenic differentiation of avian pneumovirus isolates using polyclonal antisera and mouse monoclonal antibodies [Text] / M.S. Collins [et al] // Avion Pathology. – 1993. - Vol. 22. - P. 469-479.
14. Nucleotide sequences of the F, L and G protein genes of two non-A/non-B avian pneumoviruses (APV) reveal a novel APV subgroup [Text] / M.H.Bayon-Auboyer [et al] // Journal of General Virology. – 2000. - Vol 81. - P. 1723-2733.
15. Бессарабов Б.Ф. Пневмовирусы птиц: учебное пособие / [Текст] Б.Ф. Бессарабов, Е.А. Лазуткина, И.И. Мельникова. – М.: МТА-Графикс. – 2008. - .32с
16. Лазуткина Е.А. Клинические признаки, патологоанатомические и гистоморфологические изменения при синдроме опухшей головы у цыплят-бройлеров [Текст] / Е.А. Лазуткина, Б.Ф. Бессарабов // Материалы III международного ветеринарного конгресса по птицеводству. – М.: НПП «АВИВАК». - 2007. – С. 111-116.
17. Лазуткина Е. Особенности проявления синдрома опухшей головы у цыплят-бройлеров [Текст] / Е.А. Лазуткина, Б.Ф. Бессарабов, И.И.Мельникова// Био. - 2007. - № 6 (81). – С. 31-34.
18. Droual R Swollen Head Syndrome Associated With E. Coli and Infectious BronchitisVirus in the Central Valley of California [Text] / R.Droual , P. R.Woolcock // Avian Pathology. – 1994. - Vol. 23 (4). - P. 733-742.