Подсчет эритроцитов. Подсчет производят спустя 1-2 минуты (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40Х и окуляром 7X, либо объективом 8Х и окуляром 15Х.
Чтобы не сбиться со счета, придерживаются определенной
последовательности счета: передвигая из квадрата в квадрат по
горизонтали один ряд слева направо, следующий - справа налево. Считают, помимо находящихся внутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двух линиях, например, на левой и верхней, и пропускают все лежащие справа и снизу. Считать эритроциты надо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких.
Чтобы избежать неточности, вследствие не вполне равномерного распределения крови в камере, выбирают для подсчета не 5 рядом лежащих квадратов, а продвигаются по всей сетке.
Количество эритроцитов в 1 ммЗ (искомое) вычисляют следующим образом: единицей счета всегда, при всяком подсчете, в любой сетке служит малый квадрат. Объем его, как было указано, равен 1/4000 мм3. Сосчитав эритроциты в 5 больших квадратах (80 малых квадратов), делят это количество на 80 и умножают на 200 (степень разведения крови) и на 4000 (чтобы получить количество
клеток во всем кубическом миллиметре);практически, следовательно, полученное число умножают на 10000 (прибавляют четыре нуля).
Пример: В 80 маленьких квадратах подсчитано 480 эритроцитов. Следовательно, количество эритроцитов в 1 ммЗ крови равно:
480*4000*200
------------ =4 800 000
80
Подсчет лейкоцитов. Для получения достаточно точного результата при подсчете лейкоцитов необходимо сосчитать не менее 100 больших квадратов (=1600 малых). Количество лейкоцитов в 1 мм3 получается следующим образом: число, сосчитанное в3100 больших квадратах, делят на 1600 (приводят к 1 малому квадрату) и умножают на 20 (степень разведения) и на 4000; практически, сокращая постоянные цифры формулы, количество сосчитанных лейкоцитов (при разведении в 20 раз) умножают на 50.
Пример: в 100 больших квадратах сосчитано 120 лейкоцитов.
Следовательно, количество лейкоцитов в 1 ммЗ равно
120*4000*20
-----------=6000
1600
Оценка полученных данных:
Нормальное количество эритроцитов в 1 ммЗ от 4500000 до 5000000. В норме среднее количество лейкоцитов в 1 мм3 от 5000 до 9000 (крайние границы 4000 - 9000).
Вычисление цветового показателя:
Зная число эритроцитов в крови и содержание в ней гемоглобина, можно высчитать в какой мере насыщен каждый эритроцит. Цветовой показатель соответствует максимальному содержанию гемоглобина в одном нормальном эритроците, величина его условно принимается за единицу.
Для вычисления цветового показателя пользуются следующей формулой:
найденное количество Нв найденное число эритроцит.
------------------------ : -------------------------
нормальное количество Нв нормальное число эритроцит.
Практически определение цветового показателя производят путем деления процента (единиц) гемоглобина на удвоенные две первые цифры числа эритроцитов. Если же число эритроцитов меньше 1000000, то процент Нв делится на удвоенную первую цифру числа эритроцитов.
Приготовление мазков:
Мазок крови делают обычно вслед за наполнением обоих смесителей. Вытирают палец и пользуются свежевыступившей каплей крови. Кровь берут на предметное стекло, которое должно быть тщательно обезжирено. Затем шлифованным предметным стеклом,
или толстым покровным стеклом, которое ставят на первое предметное стекло под углом 45' в непосредственной близости от капли крови, чтобы она растекалась тонким слоем по ширине шлифованного стекла, делают на нем мазок. Хорошо сделанный мазок желтоватого цвета, просвечивает. Вслед за этим мазок фиксируют.
Фиксация мазка делается для того, чтобы уплотнить протоплазму форменных элементов крови и сделать мазок более устойчивым. Высохший на воздухе мазок погружается для фиксации в банку с метиловым спиртом на 1 - 3 мин., либо в смесь Никифорова, состоящую из равных частей этилового спирта и эфира, на 10-20 минут. По окончании фиксации мазки вынимают пинцетом и ставят в вертикальном положении на фильтровальную бумагу для высушивания.
0крашивание мазка производится, как правило, при помощи смеси нескольких красок. Наиболее широко применяется окраска мазка по Романовскому - Гимзе. Перед употреблением краску разводят дистиллированной водой из расчета 1 - 2 капли на 1 мл воды. Мазки укладывают на мостики из стеклянных палочек, опирающихся на края кюветы, и заливают красителем в максимальном количестве, которое может удержаться на стекле. Продолжительность окраски 30 минут. После окраски краситель смывают струей воды, а мазки ставят вертикально на фильтровальную бумагу для просушки.
Окраска ретикулоцитов:
1. Предметные стекла (обезжиренные).
2. 1% раствор бриллианткрезилблау (спиртовой).
3. Шлифовальное предметное стекло.
4. Чашка Петри.
5. Фильтровальная бумага.
6. Стеклянная палочка.
7. Иммерсионное масло.
Методика окрашивания:
На обезжиренное абсолютно чистое предметное стекло наносят стеклянной палочкой каплю 1% алкогольного раствора краски бриллианткрезилблау. Шлифовальным предметным стеклом
эту каплю размазывают так же, как при приготовлении обычного
мазка крови. После подсыхания красителя на него наносят каплю
крови и делают тонкий мазок, который сразу помещают во влажную камеру (чашка Петри с вложенным в нее кусочком мокрой фильтровальной бумаги). Через 3-5 минут мазок вынимают, высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с иммерсией.
Под микроскопом эритроциты при этой окраске желтовато-зеленоватого цвета; в отдельных же эритроцитах замечается синяя
сеточка, иногда скудная и нежная, иногда обильная, зернистая -
это и есть ретикулоциты.
Подсчет ретикулоцитов производится так:
Подсчитывают в поле зрения 1000 эритроцитов и отмечают сколько среди них ретикулоцитов. Найденное количество делят на 10. Нормальное содержание ретикулоцитов в крови 0,2 - 1,0%.
Подсчет лейкоцитарной формулы:
Лейкоцитарной формулой называют процентное соотношение
отдельных форм лейкоцитов крови. Для более точного ее вычисления необходимо просмотреть не менее 200 лейкоцитов. Так как различные виды лейкоцитов распределяются по мазку неравномерно,
необходимо соблюдать следующие правила: проводить подсчет по
верхнему и нижнему краю мазка, передвигая мазок по зигзагообразной линии. Считают три поля по самому краю в горизонтальном направлении, затем - три поля, направляясь к середине мазка, и т. и. Следовательно, в каждом из четырех участков насчитывают 50 клеток, а всего - 200. Для подсчета лейкоцитарной формулы используют специальный клавишный счетчик, на каждом клавише которого отмечается начальная 6yква названия лейкоцитов. Результаты подсчета лейкоцитарной формулы записываются в виде лейкограммы, имеющей в норме примерно следующий вид:
| нейтрофилы | |||||||
| Колич. Лейкоцитов | базо-филы | эозино-филы | юные | палочко-ядерные | сегменто-ядерные | лимфо-циты | моно-циты |
| 8000 | 1% | 4% | 0 | 4% | 60% | 25% | 6% |
Микроскопическая картина крови:
Эритроцит - безъядерная клетка, окрашивающаяся кислыми красками в розовый цвет и имеющая форму несколько уплощенного круга с вдавлением в центре. Диаметр в среднем около 8 микрон.
Лейкоциты различаются среди эритроцитов по их большей величине, по наличию ядра и по характеру окраски. Различают лейкоциты: базофильные, эозинофильные, нейтрофильные, лимфоциты и моноциты.
Первые три вида объединяются в группу гранулоцитов, т.е. клеток в протоплазме которых имеется зернистость.
Базофилы - клетки размером 12 - l4 микрон, с ядром неопределенной формы. Протоплазма содержит многочисленные крупные зерна, окрашивающиеся в фиолетовый цвет. Количество клеток не превышает 0,5-1%.
Эозинофилы - клетки размером 12 - 15", имеют сегментированное ядро в виде двух грушевидных сегментов, соединенных между собой тонким мостиком. Наиболее характерным признаком эозинофила является зернистость протоплазмы ярко-красного цвета. Количество эозинофилов в норме от 1 до 4%.
Нейтрофилы - круглые клетки, средняя величина 9 - 12 микрон.
Протоплазма слегка розоватая с мелкой зернистостью красновато-
фиолетового цвета. Ядро состоит из 2-х, 4-х и более сегментов, соединенных между собой тоненькими мостиками, окрашивается основными красками в сине-фиолетовый цвет. Сегментоядерные нейтрофилы составляют от 50 до 68%. В менее зрелых клетках ядро
вытянуто в виде палочки, так называемые палочко-ядерные нейтрофилы 1-4%. Еще реже, около 1%, встречаются нейтрофилы с
круглым ядром - юные формы. Увеличение числа палочко-ядерных, появление юных, вплоть до миелоцитов, носит название сдвига влево, или регенеративного сдвига. Сдвигом в право называется изменение формулы лейкоцитов в сторону увеличения более зрелых клеток.
Лимфоциты - клетки размером 7 - 9 микрон. Лимфоциты бывают малые, средние и широкопротоплазменные. Ядро круглое или овальное, сине-фиолетового цвета; иногда оно имеет с одной стороны острое углубление. Протоплазма голубая, нередко различаются ярко-красные зерна. Вокруг ядра остается бесцветный или более бледный ободок. В норме лимфоциты составляют 25 - 38%.
Моноциты - самая большая клетка нормальной периферической крови. Диаметр 12-20 микрон с крупным овальным ядром, почковидной или подковообразной формы. Окраска ядра светлее, чем у нейтрофилов и лимфоцитов, протоплазма серо-голубого цвета с мелкой азурофильной зернистостью. Моноциты составляют 6-8% всех лейкоцитов крови.
Определение длительности кровотечения по Дуке
0борудование и реактивы:
1. Игла Франка или скарификатор.