Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики трихомоноза (стр. 5 из 6)

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Все исследования по теме квалификационной работы проводились на базе Одесского областного кожно-венерологического диспансера, расположенного по адресу: г. Одесса, ул. Воробьева, 5.

В исследовании, которое проходило в период с декабря 2003 года по май 2004 года, принимали участие исключительно мужчины в количестве 150 человек. Пациенты были обследованы на трихомоноз тремя методами: культуральным, микроскопии окрашенного мазка и ПЦР.

Всем обследуемым, за сутки до взятия материала производилась внутримышечная инъекция пирогенала, в дозе – 50 МПД, согласно инструкции приведенной [18]. Вследствие чего на момент анализа у 60% больных отмечались слизистые, слизисто – гнойные выделения.

2.1. Исследование культуральным методом.

Культуральный метод исследования заключался в посевах патологического материала (отделяемого уретры) на ИПС, по методике [21]. Использовалась питательная среда для выделения влагалищных трихомонад (Э).

Следующего состава, г/л:

ферментолизат биомассы микроорганизмов без оболочек

(осветлённый) 14,2

мальтоза 8,0

хлорид натрия 6,0

хлорид калия 0,1

карбонат натрия 1,2

РН среды доводился до 6,0 ± 0,2.

Препарат разработан ЦКВИ, выпускается НПО “ Питательные среды“.

Материал выделений и соскоб забираются ложечкой Фолькмана, если выделения обильные, то можно использовать бактериологическую петлю, при этом для увеличения отделяемого, левой рукой производится массаж уретры выжимающими приёмами (дистально-проксимальное направление). При посеве ложечка Фолькмана с посевным материалом опускается в среду до дна пробирки и энергично круговыми движениями смывается. Пробирка у спиртовки закрывается ватно-марлевой пробкой и ставится на инкубацию при 37 градусах Цельсия.

Учёт результатов проводился путём микроскопического исследования препаратов через 7 дней после посева. Осадок отбирался пастеровской пипеткой и микроскопировался в тёмном поле с увеличением 280. При положительном результате наблюдались движущиеся паразиты: одиночные или в скоплениях. Все препараты смотрелись нативными.

2.2. Исследование методом микроскопии мазка.

Метод микроскопии мазка основан на анализе соскоба или выделений, с последующей их окраской, методика[39]. Соскоб берется желобоватым зондом или тупой ложечкой из уретры. Из ложечки биологический материал извлекался копьём для перфорации кожного покрова. Выделения брались мазком – отпечатком.

Стекла обрабатывались так же, как и посуда, бывшая в употреблении, мылись и кипятились 15 минут в 0,5% мыльном растворе, затем многократно ополаскивались в горячей воде и не менее 5 раз в дистиллированной. После этого сушились в сухожаровом шкафу. Далее натирались между двумя дощечками с прикреплённой тканью и помещались до опыта в смесь спирта с эфиром 1:1. (Чистота стёкол в подобной диагностике имеет важное значение!)

Отобранный материал эмульгировался (очень нежно) на предметном стекле, после чего высушивался на воздухе 20-30 минут, затем окрашивался – 1% раствором метиленового синего, в течении 3 минут. В положительных случаях, обнаруживались трихомонады различной формы. Не больше одной в поле зрения.

Ядро окрашивалось в темно – синий, а протоплазма – в бледно-синий цвет. Трихомонады имели: овальную, круглую и грушевидную формы. Препарат смотрелся при увеличении 630 с иммерсионным объективом.

2.3 Исследование методом ПЦР

Для ПЦР – диагностики использовались соскобы уретры.

Все анализы на основе этого метода по группам больных проводились сотрудниками кафедры Кожных и венерических болезней Одесского Государственного Медицинского Университета.

Результаты обследованных были любезно предоставлены {XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX}! Простите этого человека не указываю!

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведения собственных исследований по сравнению различных методов диагностики трихомоноза у мужчин, общее количество которых составляло 150 человек, были получены следующие результаты: наиболее удачным методом диагностики трихомоноза является метод микроскопии окрашенного мазка. Его информативность составила 71%. За ним следует метод ПЦР, (включающий в себя данные исследований по различным группам), он составил 26%. И наименее информативным, а, следовательно, менее надежным методом диагностики трихомоноза, оказался культуральный метод. Его информативность составила 3%. Полученные результаты отражены на рисунке 1.

Исходя из результатов исследований можно сделать следующие выводы: для экспресс – диагностики мочеполового трихомоноза наиболее удобно использовать метод микроскопии окрашенного препарата уретрального соскоба или окрашенного мазка выделений. Более надёжный результат будет при проведении предварительной провокации пирогеналом. В случае непереносимости препарата (больные с острыми лихорадочными заболеваниями, беременные, гипертоники, диабетики), его можно заменить определенной комбинацией продуктов раздражающих слизистую оболочку желудка.

Данный метод имеет, перед остальными способами диагностики, ряд преимуществ: относительно недорогой и простой в проведении, результат достигается по истечении короткого промежутка времени, не требует применения дорогого лабораторного оборудования и высокой квалификации персонала.

В отношении метода ПЦР – диагностики трихомоноза, можно отметить следующее: по своей информативности он сегодня ещё уступает методу микроскопии окрашенного мазка. Это обусловлено недостаточной степенью очистки ДНК – возбудителя от балластных компонентов биоптата. Весомым недостатком ПЦР метода являются, сложность постановки опыта, необходимость применения дорогого оборудования и высокая стоимость анализа.

В настоящее время метод ПЦР диагностики T.vaginalis ещё недостаточно отработан. Такой вывод можно сделать на основании данных предоставленных сотрудниками кафедры Кожных и венерических болезней ОГМУ.

Метод ПЦР подтвердил наличие трихомонад у больных отнесённых к группе риска на 36%. У хронических больных с характерными симптомами этот показатель составил 34%, хронические больные без симптоматики и «здоровые» первично обследуемые, дали по-15% подтверждения. Данная информация отражена на рисунке 2.

Культуральный метод оказался наименее информативным при проведении исследований, на его долю приходится всего 3% выявления трихомонад. В сравнении с методиками, приведёнными раннее, он является самым длительным и наименее надёжным для диагностики трихомоноза.

3.1 Анализ данных выявления T.vaginalis у жителей Одесского региона

Информация, представленная на рисунках 3 и 4, была получена в результате анализа данных отдела медицинской статистики. Она отражает динамику случаев первичного выделения возбудителя трихомоноза у мужчин и женщин в период 1998 – 2003 годы. База данных по заболеваниям за 2004 год находится на стадии обработки.

.

Согласно полученным данным по Одесской области можно сделать заключение, что резкое увеличение заболеваемости произошло в период с 1998 по 1999 годы. За период с 1999 по 2000 год прирост заболеваемости был незначительным. Пиковый показатель имеет количество заболевших в 2001 году, по сравнению с 2000 годом, число больных выросло на две тысячи человек. В 2002 году заболеваемость снизилась до уровня 2000 года, а в 2003 снова наблюдается небольшой подъем. В связи с тем, что больные в лабораторию поступают добровольно, на основании плохого самочувствия или определённых подозрений, данную статистику можно считать близкой к реальной заболеваемости по нашему региону.

Различные показатели выявляемости трихомонад у мужчин и женщин обусловлены рядом причин. Доминирующими, среди которых являются следующие: женщины серьёзнее относятся к собственному здоровью, а, следовательно, чаще посещают врачей. Анатомия женских гениталий такова, что для трихомонад создаются хорошие условия, и они могут быть не замечены длительное время. В таких случаях наступает трихомонадо - носительство, а присутствие «стёртых» симптомов часто принимается за норму и связывается с циклами. Количество трихомонад у женщин всегда велико. Поэтому для диагностики достаточно взять мазок - отпечаток в определённый период.

У мужчин инфицирование не может остаться не замеченным, т.к. после попадания возбудителя первая фаза воспаления развивается в уретре. А уретрит чётко ощущается в момент мочеиспускания. По этой же причине много паразитов вымываются, а следовательно их сложнее выявить при заборе материала.

Таким образом, за 1998 год возбудитель впервые выявлен у 4338 человек, среди них: мужчины – 1462, женщины – 2867. За 1999 год, заболело 9543 человек, из которых: мужчин – 2479, женщин – 7064. В 2000 году общее число больных оставило 10242 человек. Среди них: мужчин – 2411, женщин – 7831. Общее количество больных в 2001 году составило 12265: мужчин – 3243, женщин – 9022. За период 2002 года всего заболело 10329 человек, где мужчины составили 2448, женщины – 7881. 2003 год дал общее число больных 10541, из которых мужчины составили 2833, а женщины – 7708.

Выводы

1. При диагностике трихомоноза наибольшее значение следует придавать методу микроскопии окрашенных препаратов. Для подтверждения результатов можно воспользоваться ПЦР диагностикой. Делать заключение на основе культурального метода нельзя. Ни один из существующих методов диагностики не обладает абсолютной информативностью.