Химико-фармакологическое исследование лопуха войлочного
Аннотация
Мику Мохамед
Тема:Химико - фармакологическоеисследованиелопуха войлочного.
Руководитель:доцент кафедрыфармакологиик. ф. н. Дудко В.В.
Цель работы:Проведениехимико - фармакологическогоисследованиялопуха войлочного.
Задачи:
1. Определитьтовароведческиепоказателилистьев лопухавойлочного.
2. Получитьжидкие экстрактыиз листьевлопуха войлочногона 25, 40, 70% этанолеи провести ихстандартизацию.
3. Провестиисследованиепротивовоспалительнойактивности.
4. Провестивыделениесесквитерпеновыхлактонов.
Научнаяновизна:
1. Проведеносравнительноеисследованиепротивовоспалительнойактивностиспиртовыхэкстрактови водного извлечения.
2. Проведеновыделениесесквитерпеновыхлактонов.
Практическаязначимость:
1. Полученыспиртовыеэкстракты.
2. Спиртовыйэкстракт листьевна 70% этанолепроявил в клиническихусловияхпротиволямблиознуюактивность.
3. Все экстрактыпроявляютпротивовоспалительнуюактивность,но сухой экстракткорней на 70% этанолеоказался болееэффективнымпри хроническомвоспалении,а сухой экстрактлистьев на 25,40% этаноле - приостром асептическомвоспалении.
Выводы:
1. Определенытовароведческиепоказателилистьев лопухавойлочного.
2. Полученыжидкие экстрактына 25, 40, 70% этанолеи проведенаих стандартизация.
3. Проведеноисследованиепротивовоспалительнойактивностиэкстрактовиз корней илистьев и водногоизвлеченияиз листьев.
4. Проведеновыделениесесквитерпеновыхлактонов.
МИНИСТЕРСТВОЗДРАВООХРАНЕНИЯРФ
СИБИРСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙМЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙФАКУЛЬТЕТ
КАФЕДРАФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙХИМИИ И ТЕХНОЛОГИИЛЕКАРСТВЕННЫХФОРМ
МикуМохамед
Химико– фармакологическоеисследованиелопуха войлочного
Дипломнаяработа
| Допуститьк защите: заведующийкафедройфармацевтическойхимии, докторфармацевтическихнаук, профессор ______________________КрасновЕ. А. | Научныеруководители: доценткафедры фармацевтическойхимии, кандидатфармацевтическихнаук ______________________ДудкоВ. В. |
Дипломник
_____________________
(Подпись)
ТОМСК– 1999
Содержание
Часть 1. Литературныйобзор___________________________________________
1.1. Систематическоеположение иботаническоеописание растенийрода лопух,распространение____________________________________________
1.2. Химическийсостав листьевлопуха_______________________________
1.3. Применениетравы лопухав народноймедицине, результатыклиническихиспытаний___________________________________________
1.4. Характеристикалямблиоза______________________________________
Часть 2. Экспериментальнаячасть_______________________________________
2.1. Характеристикатовароведческихпоказателейлистьев лопухавойлочного______________________________________________________
2.2. Разработкарациональнойлекарственнойформы из листьевлопухавойлочного______________________________________________________
2.2.1. Получениежидких экстрактовиз листьевлопуха войлочного(1: 1) на 25, 40, 70% этаноле_______________________________
2.2.2. Стандартизацияжидких экстрактовиз листьевлопуха войлочногона 25, 40, 70 %этаноле______________________________
2.3. Исследованиепротивовоспалительныхсвойств сухихэкстрактовлистьев и корней,полученныхна 25 %,40 %,70 %этаноле, сухоговодного раствора,извлеченногоиз листьевлопухавойлочного__________________
2.3.1. Характеристикавоспалительногопроцесса__________________
2.3.2. Материалыи методыисследования_________________________
2.3.3. Результатыисследования_________________________________
Часть 3. Выделениесесквитерпеновыхлактонов___________________________
3.1. Общаяхарактеристика_________________________________________
3.2. Распространениев растительноммире____________________________
3.3. Локализацияв растениях_______________________________________
3.4.Классификация_______________________________________________
3.5. Физико -химическиесвойства___________________________________
3.6. Методывыделения иразделениясесквитерпеновыхлактонов________
3.7. Выделениесесквитерпеновыхлактонов излистьев лопухавойлочного_
3.8. Хроматографическоеисследованиесуммы лактоновиз листьевлопухавойлочного______________________________________________________
3.9. ИК - спектроскопиясуммы лактоновфракций 3 - 6 излистьев лопухавойлочного______________________________________________________
Выводы_________________________________________________________
Приложение.Таблицы попротивовоспалительнойактивности___________
Списоклитературы_______________________________________________
Введение
В последниегоды интереск лечениюлекарственнымирастениями- фитотерапии- значительновозрос.
В началенашего векалекарственныерастения составлялидо 80 % всех используемыхлекарственныхсредств, нозатем синтетические,антибиотические,гормональныеи др. препаратызначительноих потеснили.Однако, несмотряна поразительныеуспехи в созданиисинтетическихпрепаратов,лекарства израстений продолжаютзанимать важноеместо в современнойнаучной медицине.
Преимуществофитопрепаратовсостоит в том,что они содержаткомплекс действующихвеществ, хорошопереносимыхбольными. Этипрепаратыбогаты компонентами,которые способствуютвсасываниюв пищеварительномтракте БАВ,обеспечиваютжизнедеятельностьклеточнойпротоплазмы,связь клетокс медиатораминервной системы,усиливаютферментативнуюактивность,улучшаютпроницаемостьи эластичностьтканей, способствуютвыведениютоксическихвеществ изорганизма.
К числулекарственныхрастений,недостаточноизученных ипопулярныхв народноймедицине, относитсялопух, широкораспространенныйво флоре ЗападнойСибири каксорное растениес приличнойбиомассой.
Задачей работыявляется проведениеследующихисследований:
1) Определитьтовароведческиепоказателилистьев лопухавойлочного.
2) Получитьжидкие экстрактыиз листьевлопуха войлочногона 25, 40, 70% этанолеи провести ихстандартизацию.
3) Провестиисследованиепротивовоспалительныхсвойств.
4) Провестивыделениесесквитерпеновыхлактонов.
Новизнаработы. 1) Проведеноисследованиепротивовоспалительнойактивностиспиртовыхэкстрактови водного извлечения.2) Проведеновыделениесесквитерпеновыхлактонов.
Практическаязначимость.1) Получены спиртовыеэкстракты.
2) Спиртовыйэкстракт листьевна 70 % этанолепроявил в клиническихусловияхпротиволямблиознуюактивность.3) Все экстрактыпроявляютпротивовоспалительнуюактивность,но сухой экстракткорней на 70 %этаноле оказалсяболее эффективнымпри хроническомвоспалении,а сухой экстрактлистьев на 25,40 % этаноле приостром асептическомвоспалении.
Часть1. Литературныйобзор
Систематическоеположение иботаническоеописание растенийрода лопух,распространение
СемействоСложноцветныхASTERACEAE,насчитывающееоколо 1000 родови более 20000 видов(Melchior, 1964,Тахтяджан,1966), широко представленына всех континентахи во всех климатическихзонах земногошара. Во всехфлористическихрегионах СНГсложноцветныесоставляютзначительнуючасть флоры.Обширностьи неоднородностьсемействоASTERACEAE затрудняетцеленаправленныйпоиск того илидругого классаприродныхсоединенийсреди составляющихэто семействотаксономическихгрупп и не позволяютдать однозначнойоценки перспективностив том или иномнаправлениене только всегосемейства,отдельных еготриб или подтриб,но даже родови их секций(Рыбалко К. С.и др., 1975).
РодARCTIUM,семействосложноцветных(Крылов П. Н., 1949)- средиземноморскийпо своемупроисхождению.На территорииСНГ произрастает8 из 11 видов этогорода. За лектотипрода принятвид А. lappa(Штэпа И. С., 1973).
Посистематическомуположению, онзанимаетпромежуточноеположение междуродами Атрактилодес(ATRACTYLODES DS)и Анура (ANURAJUS TS CHER)(Юзепчук С. В.,СергиевскаяЕ. В., 1962).
Всвою очередь,родовое латинскоеназваниеARCTIUM,произошло отдревнегреческого"arctos",обозначающегосевер или медведь,lappa - переводитсякак "северныйили медвежийрепейник".Русское название"лопух" произошлоот древнерусскогослова "лоп"- лист. Виды этогорода - широколиственныемезоморфныетравы, преимущественносорные, рудеральные,распространенныевесьма широко,главным образом,в более северных,умеренно - влажныхлесных областях,некоторыеобитают вовлажных и тенистыхлесах и никогдане встречаютсяв засушливыхусловиях (ПайзиеваС. А., 1962).
НатерриторииЗападной Сибирипроизрастаетдва вида лопуха:Arctiumtomentosum Mill.иArctium lappa L(Крылов П. Н., 1949).
Arctiumtomentosum Mill.(лопух войлочный)
Растение60 - 150 см высотой,корень мясистый,толстый, веретенообразный,коричневый;стебель прямостоящий,мощный, продольнобороздчатый,зеленый иликрасноватый,ветви многочисленные,прямостоящиеоттопыренные,реже (в затененныхместах) несколькодугообразноотогнутые,покрытые, каки стебель,сосочковиднымиволосками спримесью железоки паутинисто- опушенные;листья черешчатые,яйцевидные,с сердцевиднымоснованиемдо широкосердцевидных,цельнокрайниеили раставленнозубчатые, наверхушке тупые,с насаженнымостроконечном,сверху зеленые,голые или слегкаопушенныеприжатымиволосками,снизу густо,серовато- илибеловато -паутинисто- войлочные,усаженныесидячими золотистымижелезками,верхние листьяна короткихчерешках, яйцевидныеили яйцевидно- продолговатые,черешки прикорневыхлистьев выполненсердцевиной,войлочные,нередко красновато- коричневые.Общее соцветиещитковидное,корзинкирасполагаютсяприблизительнона одном уровнемногочисленные,шаровидные,слабо стянутына верхушке,считая безостроконечий- 11 - 18 мм шириной,с остроконечиями- 18 - 30 мм, 13 - 20cм высотой,по созреваниилегко распадающиеся,сильно паутинистоопушенные илиочень редкосовсем лишеныопушения; средниелисточки оберткиснаружи покрытымелкими, короткими,прилегающимиволоскамииногда с примесьюжелезок, покраю реснитчато- зубчатые, самыенижние листочкиобертки короткие,с резко внизнаправленными,недлиннымиостроконечиями,заканчивающимисякрючком; нижниелисточки оберткиланцетовидные,килеватые, уоснованиярасширенные,от 1.25 до 1.5мм шириной,переходящиев линейно-ланцетное,горизонтальноотстоящеостроконечие,оканчивающеесякрючком, самыевнутренниелисточки оберткипурпуровые,расширенныеу основаниядо 2.75 мм ширинелинейно - ланцетные,туповатые иливыгрызенные,с маленькимнасаженнымостроконечием,но не крючковидным;нередко вселисточки оберткипурпуровые,венчик значительнодлиннее внутреннихлисточке обертки,красновато- пурпуровый,покрытый рассеяннымижелтоватымжелезками,колокольчатый,к верху расширенный,трубка 4.5 - 6 ммдлиной приоснованиирасширенная,отгиб 4 - 5.5 мм длиной,из которых надолю лопастейприходится2 - 2.5 мм, верхниепридатки пыльниковболее менеевнезапно оттянутына верхушкев остроконечие0.2 мм длиной, нижниепридатки 0.6 ммдлиной, простыеили 2 - раздельные;семянки 5 - 6 мдлиной, обратноконические,с тупо срезаннымверхним концоми узкой площадкойприкрепленияхохолка, гранистые,поперечноморщинистыесеровато -коричневые,бурые или стемными зигзагообразнымипятнамина болеесветлом фоне;хохолок 2.5 - 3 ммдлиной.
Распространение:Европейскаячасть - Прибалтика,Лад. - Ильм., Дв.- Печ., Волж. - Кам.,Верх. - Волж., Верхн.- Днепр., Сред.- Днепр., Кар. -Лапл., Волж. - Дон.,Заволж., Ниж. -Дон., Верх. - Днестр.,Причерн., Бесс.,Крым;Кавказ;Зап.Сибирь - Томск,в дол. Р. Обь отКаргаска дог. Новосибирскас. Бердского,в сист. рек Кондомы,Мрассу, Томи,Верх. Таб., Ирт.,Обск., Алт.;Вост. Сибирь;Дальн. Восток;Ср.Азия.
1.2. Химическийсостав растенийрода лопух.
Чтокасаетсяхимическогосостава лопуха,то он изученнедостаточно.Имеется информацияпо отдельнымгруппам биологическиактивных веществ,обнаружены:жирные масла,горькие вещества,аскорбиноваякислота, слизи,минеральныесоли(МинаеваВ.Г., 1991,ЛагерьА.А., 1992), а такжеэфирное масло(Растительные...,1993).
Семеналопуха войлочногосодержат:жирные масла- 22.1 %;кислоты:миристиновая,пальмитиновая,стеариновая,олеиновая,линолевая -67.8 % ;триацисзицеролыкоронаровой,верноловой,цис - 9, 10 - эпоксиоктадекановойи транс - 9, 10 -эпоксиоктадекановойкислот;высшие алифатическиетритерпеновыеспирты, стероиды,ацилглицеролы(Растительные...,1993).
Помимолопуха войлочного,есть другиевиды похожиена него похимическомусоставу:это лопух малыйи лопух большой.
В листьяхлопуха большоготак же как и увойлочногообнаруженыжирные масла,горькие вещества,аскорбиноваякислота, слизи,минеральныесоли.
Известно,что количественноесодержаниежирных маселв лопухе большомсоставляет0.4 - 0.8 % (Минаева В.Г.,1991;Лагерь А.А., 1992);а также содержатсягорькие вещества,вероятносесквитерпеновыелактоны и эфирныемасла. В лопухебольшом идентифицированапальмитиноваякислота, входящаяв состав эфирногомасла (Растительные...,1993). Содержатсяеще углеводы:моно и дисахаридыдо 22 %, дубильныевещества 3,4 - 8 %,фенолкарбоновыекислоты и ихпроизводные:кофейная,хлорогеновая,изохлорогеновая,флаваноидыдо 5.7 - 18 % (РимкенсС.П. Биологическиеособенности...,1986).
Вплодах лопухабольшого содержатсяорганическиекислоты:яблочная, лимонная,алкалоиды,сапонины, кумарины,фенолкарбоновыекислоты и ихпроизводные:кофейная,хлорогеновая,изохлорогеновая;лигнаны:арктиин, арктигенин,металрезинол,лигнаны AL- D иAL - F.
Семеналопуха большогосодержат оченьмало лигнанов:( - ) - арктигенин,лоппаол А, лоппаолB,(Растительные...,1993),лигнановыйгликозид - арктиин(Блинова К.Ф.,Яковлева Г.П.,1990).
Всеменах лопухамалого содержатсяжирные масла- 21.4 %, представленныекислотами (в%):пальмитиновая- 9 %, пальмитооленовая(гексадецен9 - овая) - 0, 9, стеариновая- 1 %, олеиновая- 20.3 %, линолевая- 67 %, леноленовая- 1.7 %, миристиновая.Высшие жирныекислоты:октадекатриен- 3, транс, 4 - цис,12 - овая - 9.9 % (Растительные...,1993).
1.3 Применениетравы лопухав народноймедицине, результатыклиническихиспытаний
Ужев древностилопух отмечаликак лекарственноерастение. Всвоей работе"Materiamedica" егоупоминаетДиоскорид. Излетописейизвестно, чтов лекарственныхцелях широкоиспользоваллопух врачАлександраНевского (КузнецоваМ.А., РезниковаА.С., 1992). Из этогоследует, чтообширноераспространение,наличие приличнойбиомассы,разнообразныйспектр действияобусловилиширокое использованиерастений родалопух в народноймедицине, причемнаиболеераспространенные- лопух войлочный,лопух большой,лопух малыйприменяютсяравнозначно(Растительные...,1993).
Химическийсостав определяетбиологическуюактивность:так в народноймедицине используютлистья лопухадля леченияопухоли путемприкладыванияих к пораженнымместам(КовалеваН.Г., 1972).
Лопухприменяют припростудныхзаболеваниях(Петкова В.,1982), атакже при начальныхформах заболеванийверхних дыхательныхпутей(бронхов,легких);при отекахгорла применяютсвежие листьяили сок консервированныйна 40 % этаноле,прикладываютк горлу каккомпресс (ПоповА.П., 1993).
Свежиелистья вместес листьями мать- мачехи прикладываютк груди примастите (ПетковаВ.,1993).
Листья,смазанныесвежей сметанойприменяют прирожистом воспалении,больного обертываютна ночь простыней,смоченной внастое в течении2 - 3 недель. Такимспособом лечати рецидивирующийревматизм.
Привоспалениислизистыхоболочек (рта,десен, горла,внутреннихженских половыхорганов, пригингивитах,стоматитах)полезен свежийсок, можно иконсервированныйна 40 % этаноле,разведенный1: 10,в виде полоскания.
Впоследнемслучае полезнои внутрь приниматьэтот же сок, ноне разведенный,по 20 капель 3 разав день. Для лечениявоспалительныхзаболеванийполости ртасок из свежихлистьев лопухаиспользуетсяв виде полосканий,промываний,примочек (ПашинскийВ.Г., 1989;Лагерь А.А., 1992).
Установленоантибактериальноедействие свежихлистьев, ониулучшают обменныепроцессы ворганизме,рекомендуютсяпри трофическихязвах, их используютпри лихорадке(Минаева В.Г.,1991),а также лопухиспользуюткак наружноесредство дляснятия высокойтемпературы,накладываясвежие листьяна тело.
Лопухомлечат головнуюболь воспалительногохарактера имигрень, приэтом свежиелистья прикладываютк голове (ПетковаВ.,1982;Полов А.П.,1993).
Свежимилистьями (нижнейстороной) оборачиваютсуставы приломоте, ревматизме,подагре, прирадикулитев течении всеговесенне - летнегопериода (КовалеваН.Г.,1972;Петкова В., 1982).Применяетсятакже при леченииартритов, восновном используетсянаружно в видекомпрессов,втираний, обертыванийсвежими листьямии ванн (ПашинскийВ.Г., 1989).
Ихиспользуютв китайскоймедицине какпротивоядие,приукусах ядовитыхзмей и другихнасекомых.
Оченьинтересноприменениелопуха в народноймедицине длялечения опухолей.Отвар листьевлопуха малого,собранногово время цветения,пьют в Белоруссиикак чай призлокачественныхопухолях (БалицкийК.П., ВоронцоваА.Л.,1982;Растительные...,1993).
Также сок из растениясамостоятельнои в сочетаниис соком другихрастений - хорошеепрофилактическоесредство отрака, особеннов пожилом возрасте(Решетняк В.В.,Цигура Н.В.,1992).
Лопухприменяют каксредство длялечения почечно- каменной болезни,он способствуетрастворениюи выведениюкамней из почеки мочевых путей(Гриневич М.А.,1990;ПашинскийВ.Г.,1989).
Используютлопух при глистах(Решетняк В.В.,Цигура Н.В.,1992).
Прикожном зудеприкладываютлистья, смоченныеили растертыев молоке.
В народноймедицине отвар,настой используютпри гипертиреозе.Он применяетсяпри асците,энтероколитах,сопровождающихсязапорами,остеохондрозе,вагините, кольпите,как лактогенноеи антиалкогольноесредство. Лопухвойлочныйобладаетантиоксидантнымисвойствами(Растительные...,1996).
Отварлопуха эффективенпри запорах(10 :250).Одну чайнуюложку семянлопуха настаиваютнесколько часовв 250 - 500 мл воды, потомкипитят 5 - 7 минути выпивают втечении дня(Губергриц А.Я.и СололченкоН.И.,1990;Петкова В.,1982).
Семенарекомендуютсякак популярноенародное средство,оздоравливающеевесь организм,в через тоформирующийи стул. Крометого, еслиупотреблятьсемена, обладающиеслабительнымдействием, онибудут увеличиватьэффект.
Применяютлопух при различныхзаболеваниях:желудочно -кишечных,заболеванияхпечени, почек,мочевого пузыря,ревматизме,подагре, водянке,золотухе, рахите,сахарном диабете,а так же какранозаживляющее,кровоочистительное,мочегонное,потогонноесредство, длярегуляцииобмена веществ.
Результатыапробацииэкстракта излистьев лопухавойлочногона 70 % - ном этанолена противолямблиознуюактивностьна 14 детях от3 до 14 лет показаливысокую эффективностьпрепарата.
1.4 Характеристикалямблиоза
1.4.1 Строение
Лямблия(Lamblia intestinalis)впервые былаописана в 1859 г.русским ученымД. Ф. Лямблем,в честь которогоона и получиласвое название.
Лямблиясуществуетв виде вегетативнойформы и цисты.Вегетативнаяформа активная,подвижная,грушевидная,передний конецтела закруглен,задний заострен.Длина 9 - 18 мкм.
В переднейчасти теланаходитсяприсасывательныйдиск - в видеуглубления.Лямблия имеет2 ядра, 4 парыжгутиков. Принаблюдениив живом состояниидвижение ееочень характерное,паразит всевремя переворачиваетсябоком. В препаратепри комнатнойтемпературелямблии быстропогибают. Пищувсасывают всейповерхностью.Размножаютсяпродольнымделением.
Цисты - это неподвижныенеактивныеформы паразита.Длина цист 10 -14 мкм. Формаовальная. Оболочкасравнительнотолстая, хорошоочерчена, частов значительнойсвоей частикак бы отслоенаот тела самойцисты. Этотпризнак помогаетотличать цистылямблии отдругих сходныхобразований.
В раствореЛюголя цистыокрашиваютсяв желтовато- коричневатыйцвет. Окрашиваниепозволяетвидеть 2 - 4 ядрав зависимостиот степенизрелости цисты.
1.4.2. Циклразвития
Лямблииобитают в верхнемотделе тонкогокишечника. Спомощью присасывательногодиска ониприкрепляютсяк ворсинкам.В желчном пузырелямблии неживут, так какжелчь на нихдействуетгубительно.Частые находкиих при дуоденальномзондированииобъясняютсятем, что лямблиипопадают всодержимоедвенадцатиперстнойкишки с ее стенок.
Обычновегетативныеформы лямблиис испражнениямине выделяются,однако припоносах ихможно обнаружитьв свежевыделенныхжидких фекалиях.Лямблии, попадаяв нижние отделыкишечника, гдеусловия дляних неблагоприятны,превращаютсяв цисты, которыеи выделяютсяобычно с испражнениями.Цисты хорошосохраняютсяво внешнейсреде, в зависимостиот влажностии окружающейтемпературы- до месяца. Привысушиваниицисты погибаюточень быстро.Заражение можетпроизойти череззагрязненнуюводу, пищу, грязныеруки и игрушки,при этом цистыв кишечникепревращаютсяв вегетативныеформы.
1.4.3.Диагностикаи лечение лямблиоза
Вопроспатогенностилямблиознойинвазии остаетсяопорным. Однакомноголетниенаблюдениянад больнымипозволилисчитать лямблиивозможнымвозбудителемзаболеванийкишечника игепатобилиарнойсистемы, абессимптомностьнекоторыхслучаев лямблиозасчитать недоказательствомих апатогенности,а расцениватькак малосимптомныегельминтозы.Роль лямблийв развитиизаболеванийбилиарнойсистемы можетбыть толькоопосредованнойчерез поражениетонкой кишки.Часто болезньс самого началаприобретаетхроническоетечение. Нарушениережима питания,погрешностив диете, интеркуррентныезаболевания,хроническиеочаги инфекции,явления пищевойи других видоваллергии,функциональныенарушенияоргановдуоденохоледохогепатопанкреатическойзоны ведут кобострениюзаболевания.Так как лямблиоз- болезнь "грязныхрук"(заражениепроисходиторальным путемпри контактеребенка с предметами,зараженныминосителямипаразита илипри употреблениизагрязненныхпищи и воды),она часто встречаетсяу других членовсемьи и в детскихколлективах,посещаемыхэтими больными.
1.4.3.1.Клиническаякартина
Клиническаякартина можетбыть оченьразнообразной,но чище другихдиагностируютсясимптомы,составляющиеболевой, диспептический,интоксикационныйсиндромы иявления вегетодистонии.При сборе анамнезанаиболее частоотмечаютсясимптомыгепатобилиарнойпатологии идуоденита: болив области пупкаи правом подреберье,усиливающиесяпосле употребленияв пищу жирных,зажаренных,острых продуктов,грубой пищи,после физической,умственнойи эмоциональнойнагрузки: плохойаппетит, тошнота,поносы, запоры,явления метеоризма,а также недомоганиеи головнаяболь. Реже больныхдетей беспокоитгипертермия,рвота, икота,горечь во рту,отрыжка, болив области сердца.При объективномосмотре обращаютна себя вниманиесимптомы хроническойинтоксикации:бледностькожных покрововлица, синевапод глазами,часто небольшоепохудание,изменения состороны сердечно-сосудистойсистемы в видеурежения, режеучащения пульса,приглушениятонов, появленияфункциональногосистолическогошума, повышения,реже пониженияАД, красногодермографизмаи болевогосиндрома: напряжениеи болезненностьпри пальпациив правом подреберье,зоне Шоффара,болезненностьи урчание походу кишечника.Из патологическихсимптомов, какправило, бываютположительныесимптомы Кера,Гауссмана,Мерфи, реже -Ортнера, Мюсси,Менделя, Мейо- Робсона, Кача,Поргесса,Образцова,Керте и др. Утретьей частидетей с лямблиозомзамечаетсяувеличениеразмеров печени,чаще всеговследствиедискенезийжелчевыводящихпутей застойногохарактера. Умногих детейв период обостренияпроцесса отчетливымистановятсяатомы полигиповитаминоза,дисбактериоза,вегето - сосудистойдистонии, чтодолжно находитьотражение влечении этихбольных.
1.4.3.2. Планобследования
План обследованияостается прежним.Несомненно,что наилучшуюинформациюдля постановкидиагноза лямблиозаимеют анализыкала на яйцаглист 3 - кратнои данные дуоденальногозондирования.Никакие сверхсовременныеметоды обследования не могут заменить,эти традиционныеметоды в обнаружениипаразитов ипростейших.Для общегоанализа кровихарактерныэозинофилия,лимфо- и моноцитоз,реже - лейкоцитоз,ускореннаяСОЭ. В биохимическоманализе кровичаще появляютсянарушениебелкового ижирового обменав печени (умереннаядиспротеинемиясо снижениемальбуминови повышением и - глобулинов,увеличениехолестерина).
Внарушении ритма желчевыделенияболее характерныдля спазмсфинктерногоаппаратажелчевыводящейсистемы и гипотонияжелчного пузыря,что в свою очередьобуславливаетзамедлениескорости вытеканияпорции "В"и удлиняетдлительностьвсего зондирования.Микроскопияжелчи позволяетобнаружитьлямблии в порциях,явление дискринии(кристаллыхолестеринаи билирубинатакальция), а такжеповышенноесодержаниелейкоцитови слизи.
Оценкарезультатовжелудочногозондированияу детей с лямблиозомпоказывает,что в 23 % случаевпроизошлоповышениекислотообразующейфункции желудка,а в 15 % - ее понижение.Нарушениесекреторнойфункции наблюдаетсяотносительноредко. Из типовсекреции преобладаютинертный инормальный.Функциональныенарушенияпечени, желудкаи других органовпищеваренияобусловленыу детей с лямблиозомпреимущественнорастройствомрегуляторнойфункции 12-перстнойкишки, играющейроль своеобразного"пульта управления"пищеварительноготракта.
У половиныдетей, больныхлямблиозом,диагностируютсяне только физикальныеизменения состороны сердечно- сосудистойсистемы, но инарушенияпоказателейэлектрокардиограммы:изменения ходавозбужденияпо миокардужелудочков,синусоваяаритмия; а утретьей частидетей - нарушениеобменных процессовв миокарде. Впатогенезесдвигов в сердечно- сосудистойсистеме имеютзначение изменениятрофическихпроцессов,тонуса вегетативнойнервной системы,а также особенностиразвития больныхдетей, моментыадаптациидетского организмана патологическийпроцесс и поломкаприспособительныхмеханизмов.
Изучениесостава желчипоказывает,что лямблиозу детей сопровождаетсядостовернымнарушениемконцентрациив порциях всехосновных компонентовжелчи; содержаниебилирубинаи жирных кислотснижается,белка - повышается,холестерину большинствабольных повышен,а у некоторых- снижен, из жирныхкислот наибольшееснижение претерпеваютгликохолаты,в белковомспектре отмечаетсядиспротеинемияс повышениемглобулиновыхфракций и понижениемальбуминовых.
Наибольшиенарушениядиагностируютсяв пузырнойпорции, меньшеменяются показателипеченочнойжелчи. Снижениелизоцимнойактивноститакже болеевыражено впузырной порциии меньше - впеченочной.При изученииэлектролитовв дуоденальномсодержимомотмечена тенденцияк снижению К,a Naи Са - к повышению.Металлокомплексытрансферрин,церулоплазминумеренно повышаются.
Схемакомплексногоэтиопатогенетическоголеченияпри лямблиозеизвестна:
1) диета№ 5 (ограничитьсладкое) и режимныемоменты;
2) витаминотерапия;
3) легкаяседативнаятерапия;
4)противолямблиозныепрепараты(тинидазол,трихопол,фуразолидон);
5)десенсибилизирующиесредства (супрастин,тавегил, задитен,димедрол, пипольфени др.);
6) спазмолитики;
7) желчегонныесредства (холеретикии холекинетики);
8) фитотерапия(желчегонныеи противовоспалительныетравы);
9) физиотерапия(чаще электрофорезсо спазмолитикамив период обостренияи тепловые ифизиопроцедурыв период стиханияпроцесса);
10) лечебнаяфизкультура;
11) приемминеральнойводы;
12)при необходимости- лечение дисбактериоза,санация хроническихочагов инфекции,общеукрепляющиесредства, терапия,направленнаяна устранениефункциональныхнарушений,выявленныхсо стороныдругих органови систем организма(Генис Д. Е., 1979;ХудяковаН. В.,ФилипповГ. П., ГорленкоЛ. В., КовалевскаяР. А., ШалыгинВ. А., 1994).
Часть2. Экспериментальнаячасть
2.1. Характеристикатовароведческихпоказателейлистьев лопухавойлочного
2.1.1. Внешниепризнаки
Цельноесырье.Смесь цельныхили частичноизмельченныхлистьев, свернутыхв комочек. Листьячерешчатые,яйцевидныес сердцевиднымоснованием,цельно - крайниеили расставлено- зубчатые, наверхушке тупые,с насаженнымостроконечием.Цвет листьевсверху зеленый.Они голые илислегка опушенныес прижатымиволосками,снизу густо,серовато - илибеловато -паутинисто- войлочные.
Измельченноесырье.Кусочки листьевразличнойформы, проходящиесквозь ситос отверстиямидиаметром 7 мм.Цвет серовато- зеленый. Запахотсутствует.Вкус слабо -горьковатый.
Для характеристикирастительногосырья определяютследующиечисловые показатели:влажность, золаобщая и нерастворимаяв 10 % растворехлористоводороднойкислоты, экстрактивныевещества пометодам ГосударственнойфармакопеиСССР XI изд. (1987, 1990г.).
2.1.2.Определениевлажности сырья
Подвлажностьюпонимают потерюв массе за счетгигроскопическойвлаги и летучихвеществ, которуюопределяютв сырье привысушиваниидо постоянноймассы.
1.0 г сырья(точная масса)отвешиваютв высушенныйдо постоянноймассы бюкс иопределяютвлажность поГФ СССР XI (1987). Полученныерезультатыпредставленыв таблице № 1.
Таблица1
Содержаниевлаги в листьяхлопуха войлочного
№ п/п | Массасырья, в граммах | Разностьв граммах | Влажность,% | |
| до высушивания | послевысушивания | |||
1 | 0.9968 | 0.9085 | 0.0883 | 8.85 |
2 | 0.9989 | 0.9100 | 0.0889 | 8.89 |
3 | 0.9920 | 0.9040 | 0.0880 | 8.87 |
4 | 0.9940 | 0.9067 | 0.0873 | 8.87 |
5 | 0.9954 | 0.9047 | 0.0889 | 8.93 |
Вывод:влажностьлистьев лопухавойлочногосоставляет8.88%.
2.1.3.Определениезолы
Около3 г измельченныхлистьев лопухавойлочного(точная масса)помещают впредварительнопрокаленныйи точно взвешенныйфарфоровыйтигель, равномернораспределяяих по дну тигля.Затем тигельосторожнонагревают,давая веществусначала сгоретьили улетучитьсяпри возможноболее низкойтемпературе.Сжигание оставшихсячастиц углянадо тоже вестипри возможноболее низкойтемпературе;после того какуголь сгоритпочти полностью,увеличиваютпламя.
Принеполном сгорании.частиц угляостаток охлаждают,смачивают водойили насыщеннымрастворомаммония нитрата,выпариваютна водяной банеи остатокпрокаливают.В случае необходимоститакую операциюпроводят несколькораз.
Прокаливаниеведут при слабомкрасном калении(около 500 С) допостоянноймассы, избегаясплавлениязолы и спеканияее ее стенкамитигля. По окончаниипрокаливаниятигель охлаждаютв эксикатореи взвешивают.Результатыпредставленыв таблице № 2
Таблица№ 2
Содержаниезолы в листьяхлопуха войлочного
№ п/п | Массасырья до сжигания,г | Массазолы, г | Количествозолы, % |
1 | 3.0288 | 0.3778 | 12.47 |
2 | 3.1344 | 0.4628 | 14.76 |
3 | 3.0288 | 0.3554 | 11.73 |
4 | 3.0461 | 0.3870 | 12.70 |
5 | 3.1241 | 0.4141 | 13.25 |
Вывод:Содержаниезолы в листьяхлопуха войлочногосоставляет12.98 %.
2.1.4. Определениезолы, нерастворимойв 10 % растворехлористоводороднойкислоты
Костатку в тигле,полученномупосле сжиганиялистьев лопухавойлочного,прибавляют15 мл 10 % растворахлористоводороднойкислоты, тигельнакрываютчасовым стекломи нагревают10 мин на кипящейводяной бане.К содержимомутигля прибавляют5млкипящейводы, обмываяею часовоестекло. Жидкостьфильтруют черезбеззольныйфильтр, переносятна него остатокс помощью горячейводы. Фильтрс остаткомпромываютгорячей водойдо отрицательнойреакции нахлориды в промывнойводе, переносятеговтот же тигель,высушивают,сжигают, прокаливают,как указановыше, и взвешивают.
Результатыпредставленыв таблице № 3.
Таблица3
Содержаниезолы, нерастворимойв 10 % растворехлористоводороднойкислоты, в листьяхлопуха войлочного
№ п/п | Массазолы до сжигания,г | Массазолы, нерас- ой вHCL,% | Кол- во золы, нерастворимойвHCL, % |
1 | 0.3778 | 0.0188 | 0.62 |
2 | 0.4628 | 0.0182 | 0.58 |
3 | 0.3554 | 0.0137 | 0.45 |
4 | 0.3870 | 0.0162 | 0.53 |
5 | 0.4141 | 0.0172 | 0.55 |
Вывод:Листьялопуха содержатзолу нерастворимуюв 10 % растворехлористоводороднойкислоты, в количестве0.54 %.
2.1.5. Определениесодержанияэкстрактивныхвеществ в листьяхлопуха войлочного
Определениеэкстрактивныхвеществ в сырьепроводят вслучае отсутствияв нормативнойдокументацииметода количественногоопределениядействующихвеществ.
Около1 г измельченногосырья (точнаямасса), просеянногосквозь ситос диаметромотверстия 1 мм,помещают вконическуюколбу вместимостью200 - 250 мл, прибавляют50 мл растворителя(вода, этанол25 %, 40 %, 70 %), колбу закрываютпробкой, взвешивают(с погрешностью0,01 г) и оставляютна 1 ч. Затем колбусоединяют собратнымхолодильником,нагревают,поддерживаяслабое кипениев течение 2 ч.После охлажденияколбу с содержимымвновь закрываюттой же пробкой,взвешиваюти потерю в массевосполняютрастворителем.Содержимоеколбы тщательновзбалтываюти фильтруютчерез сухойбумажный фильтрв сухую колбувместимостью150 - 200 мл, 25 мл фильтратапипеткой переносятв предварительновысушеннуюпри температуре100 - 105° С до постоянноймассы и точновзвешеннуюфарфоровуючашку диаметром7 - 9 мл и выпариваютна водяной банедосуха. Чашкус остаткомсушат при температуре100 - 105 °С до постоянноймассы, затемохлаждают втечение 30 минв эксикаторе,на дне которогонаходитсябезводныйкальция хлорид,и немедленновзвешивают.
Содержаниеэкстрактивныхвеществ в процентах(X) в пересчетена абсолютно- сухое сырьевычисляют поформуле:
Х= [М * 200 *100]/ [М1 * (100 - W)],
гдеМ - масса сухогоостатка в граммах,М1 - масса сырьяв граммах,W - потеряв массе привысушиваниисырья в процентах.
Содержаниеэкстрактивныхвеществ в листьяхлопуха войлочного,извлекаемых25 %, 40 %, 70 % этаноломи водой, представленыв таблице № 4.
Таблица№ 4
Содержаниеэкстрактивныхвеществ в листьяхлопуха войлочного,извлекаемых25 %, 40 %, 70 % этаноломи водой
Содержаниеэкстрактивныхвеществ, % | Экстрактивныевещества,извлекаемые | |||
водой | 25% | 40% | 70% | |
20.38 | 9.81 | 13.86 | 12.61 | |
Вывод:наибольшееколичествоэкстрактивныхвеществ извлекаетсяводой, спиртомразличнойконцентрации,извлекаетсяв пределах 9.81– 13.86 %.
2.2. Разработкарациональнойлекарственнойформы из листьевлопуха войлочного
2.2.1. Получениежидких экстрактовиз листьевлопуха войлочного(1:1) на 25, 40, 70 % этаноле
Жидкийэкстракт лопухавойлочного(1 :1)получаютметодомреперколяциипо Н. А. Чулковув батарее из5 - ти перколяторовс законченнымциклом.
Вкаждый перколяторзагружают по50 г листьев. “Назеркало”затрачено 370мл 25 %, 40 % и 70% этанола,что соответствуетсодержаниюбезводногоэтанола 92.5 , 148.0 и259.0 мл.
Наложное дноподготовленногоперколяторазагружают 50 гпредварительнозамоченногосырья, слегкаутрамбовываюти подают экстрагентдо зеркала,настаивая 24часа.
На 2 -ой день во 2 - ойперколяторзагружают 50 г,предварительнозамоченногоэкстрактомиз 1 - го перколяторасырья. Из ранеезагруженногоперколятора№1 вытесняютсвежим экстрагентомизвлечениеи подают егона загруженноесырье перколятора№ 2. Уровень зеркалав перколяторах№ 1 и 2 выравнивают.Настаивают24 часа. Аналогичновышеописанномузагружаютперколяторы№ 3 и № 4 на 3 - ий и4 - ый день работы.На 5 - ый день вперколятор№ 5 загружают50 г сырья, заливаютего извлечениемиз перколятора№ 4, делая передвижкуиз перколятора№ 4 в перколятор№ 5, из № 3 в № 4, из№ 2 в № 3, из № 1 в №2.
В первыйперколяторподают свежийэкстрагент.Все пять перколяторовзалиты до зеркалаи настаивают24 часа.
С шестогодня начинаетсярабочий период.Из первогоперколяторасливают ирегенерируютэтанол, промываяшрот водой.Шрот выгружаюти подготавливаютперколятор№ 1 к новой загрузке.Производятпередвижкуизвлечений.В № 1 загружают50 г сырья и заливаютизвлечениемперколятора№ 5. Перколятор№ 1 становитсяголовным, аперколятор№ 2 - хвостовым.Для максимальногоизвлечениядействующихвеществ излистьев лопухаперколятор№ 2 заливаютсвежим экстрагентоми передвигаютв перколятор№ 3.
Послечего перколятор№ 2 отключаютот батареи нарегенерациюэтанола и выгрузкушрота. Аналогичнозагрузке перколятора№ 1 загружаютперколяторы№ 2, 3, 4, 5. В продолжениевсей работырабочего периодаодин перколяторнаходится подвыгрузкойистощенногосырья и загрузкойсвежего. Свежийэкстрагентвсегда поступаетв "хвостовой"перколяторс максимально- истощеннымсырьем.
Концентрированноеизвлечениесливают с головногоперколяторасо свежимрастительнымматериалом.Все диффузорыпоследовательностановятся"хвостовыми"и "головными".Выход жидкогоэкстракталопуха с одногоперколяторасостовляет50 мл.
Остановочныйпериод.
Поокончаниитехнологическогопроцесса производстважидкого экстракталопуха "хвостовые"перколяторыотключают, ноновых перколяторовсо свежим сырьемне включают.С каждого перколятораежедневносливают слабыеизвлечения,которые собираютотдельно ииспользуютпри последующихзагрузках впроизводствежидкого экстракталопуха.
Полученныеэкстракты (1:1)в объеме 500 мл,изготовленныена 25 %, 40 % и 70 % этаноле,отстаивают2-3дня при 8 - 12° С,фильтруют иподвергаютстандартизациипо содержаниюэтанола, сухогоостатка, тяжелыхметаллов (НовицкаяС. Я., БорзуновЕ. Е., СафиулинР. М., 1969)
2.2.2.Стандартизацияжидких экстрактовлистьев лопухавойлочногона 25, 40, 70 % этаноле
Описание:жидкость соспецифическимзапахом, горькоговкуса. 25 % экстрактимеет окраскукоричневогоцвета с красноватымоттенком. У 40% экстрактабуро - коричневыйцвет, 70 % экстракттемно -коричневогоцвета.
2.2.2.1. Определениеконцентрацииэтанола в жидкомэкстрактелистьев лопуха
Вкруглодоннуюколбу вместимостью200 - 250 мл отмериваютточное количествоэкстракта. Присодержанииэтанола выше50 %отмеривают25 мл жидкогоэкстракта,которые передотгонкой разбавляютводой до 75 мл.
Дляравномерногокипения в колбус жидкостьюпомещают капилляры,пемзу или кусочкипрокаленногофарфора.
Приемник(мерную колбувместимостью50 мл) помещаютв сосуд с холоднойводой, собираютоколо 48 мл отгона,доводят еготемпературудо 20 Си добавляютводы до метки.Отгон долженбыть прозрачнымили слегкамутным.
Плотностьотгона определяютденсиметромили с помощьюпикнометрапри температуре20 Си по алкоголиметрическойтаблице № ГФXI находят соответствующеесодержаниеэтанола в процентахпо объему.
Содержаниеэтанола (X) впроцентах пообъему вычисляютпо формуле:
Х=50*а/б,
где50 - объем отгонав мл, а - содержаниеэтанола в процентахпо объему, б -объем исследуемогоэкстракта,взятый дляотгона, мл.
2.2.2.2.Определениеплотностижидкого экстракта
Чистыйсухой пикнометрвзвешиваютс точностьюдо 0.0002 г, заполняютс помощью маленькойворонки очищеннойводой немноговыше метки,закрываютпробкой и выдерживаютв течение 20 минутв термостате,в которомподдерживаютпостояннуютемпературуводы 20Cс точностьюдо 0.1 С.При этой температуреуровень водыв пикнометредоводят дометки, быстроотбирая излишекводы при помощипипетки илисвернутой втрубку полоскойфильтровальнойбумаги. Пикнометрснова закрываютпробкой и выдерживаютв термостатееще 10 мин., проверяяположениемениска поотношению кметке. Затемпикнометрвынимают изтермостата,фильтровальнойбумагой вытираютвнутреннююповерхностьгорлышка пикнометра,а также весьпикнометрснаружи, оставляютпод стекломаналитическихвесов в течение10 мин. и взвешиваютс той же точностью.
Пикнометросвобождаютот воды, высушивают,споласкиваяпоследовательноэтанолом иэфиром (сушитьпикнометр путемнагреванияне допускается),удаляют остаткиэфира продуваниемвоздуха, заполняютпикнометриспытуемойжидкостью изатем производятте же операции,что и с очищеннойводой.
ПлотностьР (г / куб. см) вычисляютпо формуле :
Р20=[[(M2- М) *0.99703]/ (M1 - M)]+ 0,0012, где
М- масса пустогопикнометра,г;M1 - масса пикнометрас очищеннойводой, г;М2- масса пикнометрас испытуемойжидкостью, г;0.99703 - значениеплотности водыпри 20 Си барометрическомдавление 1011 гПа(760 мм рт. ст.)
2.2.2.3.Определениесухого остатка.
5мл жидкогоэкстрактапомещают вовзвешенныйбюкс, выпариваютна водяной банеи сушат 3 ч. при(102.5 2.5) С,затем охлаждаютв эксикаторе30 мин. и взвешивают.
2.2.2.4.Определениетяжелых металлов
К 1 млжидкого экстрактаили 1 г густогоили сухогоэкстрактаприбавляют1 мл концентрированнойсерной кислоты,осторожносжигают ипрокаливают.Полученныйостаток обрабатываютпри нагревании5 мл насыщенногораствора аммонияацетата. Фильтруютчерез беззольныйфильтр, промывают5 мл воды и доводятобъем фильтратадо 200 мл 10 мл полученногораствора должнывыдерживатьиспытания натяжелые металлы(не более 0.01 % впрепарате).
Результатыанализов постандартизациижидких экстрактовлопуха войлочногона 25, 40, 70 % этанолепредставленыв таблице № 5.
Таблица5
Стандартизацияжидких экстрактовлистьев лопухавойлочного,изготовленныхна 25 %, 40 % и 70 % этаноле
Экстрагент | Концентрацияэтанола, % | Сухойостаток, % | Плотность,г / см | Тяжелыеметаллы, % |
25 % | 22.31 | 10.22 | 0.971 | неболее 0.01 |
40 % | 36.89 | 11.41 | 0.968 | неболее 0.01 |
70 % | 64.21 | 12.05 | 0.945 | неболее 0.01 |
Вывод:жидкие экстрактына 25, 40, 70 % этанолеудовлетворяюттребованиямГФ XI.
2.3. Исследованияпротивовоспалительныхсвойств сухихэкстрактовлистьев и корней,полученныхна 25 %, 40 %, 70 % этаноле,сухого водногораствораизвлеченногиз листьевлопуха войлочного
2.3.1.Характеристикавоспалительногопроцесса
Воспалениеявляетсязащитно-приспособительнойреакцией организмапри различныхповреждениях.Однако в рядеслучаев восстановительныепроцессы переходятиз нормальныхв патологическиеи участвуют в формированиимногих заболеваний.Воспалительныйпроцесс - результатвзаимодействияфлогогенногоначала и макроорганизма.Участие последнегозависит преждевсего от егореактивности,которая определяетсясостояниемрегуляторныхсистем каквысших, дистальных- нервной, эндокринной,иммунной, таки местных -физиологическиактивных веществ,выступающихв очаге воспаленияв качествемедиаторови модулятороввоспаления[ДыгайА.М., КлименкоН.А., 1992].Большинствоавторов в развитиивоспалениявыделяют следующиеклассическиестадии:1) повреждениетканей и клеток;2)выделениямедиаторови реакциямикроциркуляторногорусла (сосудистаяфаза);3) проявленияповышеннойпроницаемости- экссудации,миграции клеточныхэлементов(сосудисто-клеточнаяфаза);4) пролиферацияс последующейрепарацией(фаза реконструкции). При воздействиихимическогои физическогораздражителявслед за разрушениемтканей (первичнойальтерацией)происходитэкссудация,затем - пролиферацияи репарация,тогда как придействии биологическихагентов процессначинаетсячаще с экссудации,далее наступаетрасплавлениетканей (вторичнаяальтерация)с последующейпролиферациейи репарацией.Вид воспалениязависит отпричины, вызывавшейего, особенностейпораженнойткани, реактивностиорганизма идр.Намодели каррагениновоговоспалениянаблюдаетсятри фазы выделениямедиаторов:впервую фазувысвобождаетсягистамин исеротонин, вовторую - кинины.Простагландиныявляются посредникомпоздней фазывоспаления,развивающегосяпри каррагениновомотеке через3 часа, максимумконцентрацииПГЕ2 - через 12 - 24часа. Активацияэтой третьейфазы воспалениязависит отвключения впроцесс системыкомплемента[ЧернухА.М., 1979].Защитные реакциирегулируютсяи нервно - гуморальнымимеханизмами.В результатеинтеграциикаскада реакцийвозникаеткомплекс сосудистыхи клеточныхреакций, характеризующихострое воспаление.При последующейликвидациипатогенетическогоагента развиваетсязаключительнаяфаза воспалительногопроцесса - репарация,которая заканчиваетсязаживлениемдефектов ткании прекращениемреакций. Восстановительную(регенерационную)стадию воспалениялучше всегорассмотретьна модели заживленияраневого повреждения,причем асептическаярана, в случаезаживленияпервичнымнатяжением,имеет менеевыраженнуювоспалительнуюреакцию, чемпри заживлениивторичнымнатяжением[ФенчинК.М., 1979].Для последнегохарактернозаживлениераны вследствиевыполнениядефекта грануляционнойтканью, котораяразвиваетсяв условияхоткрытогодефекта, онавсегда соприкасаетсясо внешнейсредой, будучидолго не покрытойэпителием, вто время какмолодая соединительнаяткань при первичномнатяженииразвиваетсяпод струпомили в условияхзашитой раны[ЕсиповаИ.К., 1966].Если организмне способенудалить источникраздражения,то увеличиваетсявыход в очагвоспаленияполиморфноядерныхлейкоцитови выделениеиз них большогоколичествализосомальныхэнзимов, вызывающихдеструкциютканей и развитиенеспецифическогохроническоговоспаления[ТринусФ. П. и др., 1987].В общем хроническоевоспалениеотличаетсятканевым ответом,характернымсвоей длительностью,развитием моноцитарногоинфильтратаи пролиферациейсоединительнойткани. Различаютпервичноехроническоевоспалениеи вторичное.Если повреждающийагент, вызывающийвоспалениепродолжаетнаходитьсяв тканях, торазвиваетсягранулема(гранулематозноевоспаление).Развитие гранулемыявляется фазным:а) вокруг возбудителяобразуетсяинфильтратюных мононуклеарныхфагоцитов;б) далее происходитсозреваниеи скопление(агрегация)этих клетокс образованиемзрелой гранулемы;в) дальнейшеесозреваниес формированиемэпителиоиднойгранулемы[ЧернухА.М., 1979].Развитие гранулемыпроисходитпутем экссудациии пролиферации.Уже к 7 дням (аиногда и раньше)организуетсязрелая гранулема(типа чужеродноготела). Существенноезначение впатогенезехроническоговоспаленияпринадлежитвзаимодействиюмакрофагови компонентовкомплемента.На ранних этапахформированиягранулемы ведущая рольотводитсяметаболизмусульфатированныхгликозаминогликанов.
Такимобразом, воспаление- сложный многоступенчатыйпроцесс, представляющийсобой динамическийкаскад биологическихпричинно-следственныхявлений, проходящихв своем развитиичерез ряд стадийи фаз. Фармакодинамикупротивовоспалительныхсредств необходимоисследоватьс учетом фазностивоспалительныхизменений изначения техили иных процессовв развитии этихфаз [ТринусФ.П. и др., 1987].
2.3.2 Материалыи методы исследования
Дляисследованиябыли использованысухие экстрактыи сухие водныеизвлечения,полученныеранее другимидипломниками.
Опытыпроводили набелых неинбредныхмышах массой20-25гр. и крысахлинии Wistarмассой250-300гр., полученныхиз коллекционногофонда НИЛэкспериментальногобиомедицинскогомоделированияТНЦ СО РАМН(сертификатимеется).
Остроеасептическоевоспалениевызывали введениемпод плантарныйапоневроз левойзадней лапки1% растворкаррагенинав объеме 0.05 млмышам и 0.1 крысам. Величину отекаопределялипо разностимасс воспаленнойи невоспаленнойлап животного,процент приростарассчитывалипо формуле:
массабольной __ массаздоровой
конечности конечности
_____________________________________ х100%
массаздоровой конечности
Репаративнаяспособностьпрепаратовизучена намодели заживлениякожного повреждения[ФенчинК.М., 1979].На депилированномучастке кожиспины у мышейпод легкимэфирным наркозомвырезали лоскуткожи размером10 x10 мм. Для моделированияболее длительногозаживленияструп регулярно(через сутки)снимали. О ходезаживлениясудили по среднемудиаметру раныи срокам полнойгрануляциии эпителизациираневого дефекта.Укорочениесрока заживленияран расчитывалив процентахпо формуле:
времяполного заживления __ время полногозаживления
ранв контроле ран в опыте
__________________________________________________________х 100%
времяполного заживленияран в контроле
Пролиферативноехроническоевоспалениеисследовалина модели "ватной"гранулемы.Стерильныйватный тампон(13 мг) имплантировалис помощью иглы(А1 -20 х 40 - 1 17 И25) крысампод кожу спинымежду лопатками.Исследуемыепрепаратывводилисьежедневно содня трансплантациив течение 7 дней.На 8 сутки животныхзабивали, гранулемавычленялась,взвешиваласьв сыром и затемвысушенномвиде.
Умерщвлениеживотных производилиметодом дислокациицервикальногоотдела позвоночника.Результатыисследованийобрабатывалисьметодом непараметрическойстатистикиВилкоксона-Манна-Уитни.
2.3.3 Результатыисследования
Изучениепротивовоспалительныхи ранозаживляющихсвойств растительныхсредств излопуха войлочногопроводили вусловияхэкспериментальныхмоделей патологическихсостояний умышей и крыс.В работе воспроизводилиострое асептическоевоспаление(каррагениновое),хроническоепролиферативное("ватная"гранулема) ирегенерациякожного повреждения.
Впервой серииэкспериментоврегенеративнуюактивностьпрепаратовисследовалина модели кожного"лоскута" умышей. Длямоделированиядлительногозаживленияструпы периодическиснимали. В связис этим ранызаживляливторичнымнатяжением,для которогохарактерноразвитиегрануляционнойткани [ФенчинК.М., 1979].Беспородныемыши-самки,используемыев эксперименте,получали сухойэкстракт корней70, сухой экстракткорней 40, сухойэкстракт корней25, сухой экстрактлистьев 70, сухойэкстракт листьев40, сухой экстрактлистьев 25. Длясопоставленияфармакологическойактивностивсе препаратывводились водной дозе - 50мг /кгв лечебномрежиме:через час посленанесениякожного повреждения,затем ежедневнооднократнодо моментазаживления.Растительныесредства вводилисьвнутрижелудочно(peros).Измерение раныпроводили сразуже после снятияструпа, длительностьнаблюдения- 20 дней. У контрольныхживотных, которымвводиласьдистиллированнаявода, полноезаживлениеран наблюдалина 20 сутки (табл.6, прилож.). Существеннуюактивациюрегенерациивызвал сухойэкстракт листьев25 - уже с 5 дня раныв 1.2 раза былименьше контрольных,а на 15 сутки -полное заживлениеу всех животных,т.е. на 28.6 % сокращалисьсроки регенерации.Аналогичнои сухой экстракткорней 25 на 5 и8 день достоверноснижал среднийдиаметр раныв 1.2 и 1.4раза соответственно,но судя по срокамзаживленияпроцент ускорениярепарациисоставил 9.6% , как и в остальныхисследуемыхгруппах (кромесухого экстракталистьев 70).
Вовторой серииэкспериментовбыло изученовлияние растительныхпрепаратовна хроническоевоспаление,для воспроизведениякоторого использовалимодель "ватной"гранулемы.Исследуемыеизвлечениявводились вменьшей дозе(25 мг /кг),с учетом коэффициентапересчетадозировки смышей на крыс.Фитопрепаратыи препаратсравнения -индометацинполучали крысы-самки линииWistarвлечебном режимев течение 7 дней.Индометацинв исследуемойдозе обладалболее выраженнойантиэкссудативнойактивностью(37% торможения),но не оказывалдостоверноговлияния наразвитиегрануляционнойткани (табл. 7,прилож.). Сухойэкстракт корней70 вызывал уменьшениемассы сухогокомпонентана 21% ина 26%снижал содержаниеэкссудата.Остальныеизвлеченияиз лопуха войлочногоне оказалистатистическизначимогопротивовоспалительногоэффекта на этойэкспериментальноймодели, хотятенденцияобнаруженау сухого экстрактакорней 40 и сухогоэкстракталистьев 25.
Дальнейшиеисследованияпроведены спрепаратами,полученнымина основе листьевлопуха. На моделиострого асептическоговоспаления,вызванногокаррагениномсравнивалипротивовоспалительноедействие спиртовыхизвлечений(сухого экстракталистьев 40, сухогоэкстракталистьев 25) и сухоговодного извлеченияиз листьев.Препаратывводились вшироком диапазонедоз:100 мг /кг;50 мг/кг;10 мг/кг;1 мг/кгв превентивномрежиме курсомв течение 5 дней,в последнийдень через часпосле препаратавводился каррагенин.Наилучшеепротивоотечноедействие наэтой моделиоказал сухойэкстракт листьев40, т. к. три дозыпрепаратаоказалисьэффективными(табл. 8, прилож.)наибольшийпротивоэкссудативныйэффект оказалэтот препаратпри введенииего в дозе 50 мг/кг- 37 %торможенияприроста весалапки в сравнениис контрольнымиживотными.Несколько нижеэффект привведении егов дозах 10 и 1 мг/кг- 25 и 26 % соответственно.Волнообразныйхарактерпротивовоспалительныхэффектов усухого экстракталистьев 25 на29 %снижался отекпод действиемпрепарата вдозах 100 и 10мг/кг;отсутствиеэффекта в дозах50 и 1 мг /кг.Сухое водноеизвлечениеиз листьев наэтой патологическоймодели не проявилопротивовоспалительнойактивности.
Такимобразом, проведенныескрининговыеисследованияговорят о наличиифармакологическойактивностиу спиртовыхизвлеченийиз лопуха войлочного.Неоднозначностьэффектов говорито их высокойизбирательнойактивностизависящей отконцентрацииэкстрагентаи вида сырья.Так сухой экстракткорней 70 оказалсяболее эффективнымпри хроническомвоспалении,а сухой экстрактлистьев 25 и сухойэкстракт листьев40 - при остромасептическомвоспалении.Наилучшийстимуляторрепаративнойрегенерации- сухой экстрактлистьев 25. Выявленнаяфармакологическаяактивностьсвидетельствуето перспективностиданных препаратови требует дальнейшегоболее углубленногоих исследования.
Часть3. Выделениесесквитерпеновыхлактонов
3.1. Общаяхарактеристика
Ксесквитерпеновымлактонам относятсякислородосодержащие,производныесесквитерпеноидов,имеющие в своемсоставе 15 атомовуглерода и 1(реже 2) - лактонныйцикл, а также,как правило,кетонную,гидроксильную,эпоксиднуюили сложноэфирнуюгруппы. Нарядус этим известнонезначительноеколичестволактонов, содержащиххлор, серу, азот.В последнеевремя выделенысоединения,состоящие из30 атомов углеродаи получившиеназваниедисесквитерпеноидов.
Долгоевремя сантонин(сесквитерпеновыйлактон), выделенныйиз соцветийцитварнойполыниArtеmisia cina Berg.,являлся единственнымпредставителемэтой группысоединений
-Сантонин(С15Н20О4)
С 1954 г.,благодаряработам чешскихученых Ф. Шорм,В. Героута, числовыделенныхи изученныхсесквитерпеновыхлактонов сталобыстро расти.
В настоящеевремя из растительныхисточникиввыделено свыше1200 лактоновразличныхтипов. Указанныйкласс терпеноидовусиленно изучаютво многих странахмира в связис широким спектромих биологическогодействия -антигельминтного,кардио - тонического,противовоспалительного,анальгезирующего,противомалярийного,противоопухолевогои др.
Первымсесквитерпсновымлактоном,применявшимсякак антигельминтноесредство, былсантонин. Аналогичнымдействиемобладает такжегеленин - суммасесквитерпеновыхлактонов издевясила высокогоInula helenium L.,который болееэффективен,чем сантонин,в особенностив детской практике.Сесквитерпеновыйлактон тауремизиноказываетвозбуждающеедействие накору головногомозга, урежаетритм сердечныхсокращений,мягко повышаетартериальноедавление, значительноусиливаетсокращениемышцы сердца,несколькоувеличиваетдиурез и применялсяв официальноймедицине. Матриципи матрикаринобладаютпротивовоспалительнойактивностью,что связаносо способностьюматрицина легкопревращатьсяв хамазулен.Последниймалотоксичен,активируетпроцессы грануляциии эпителизацииран. Арнифолинв опытах наживотных обнаружилтонизирующеедействие нагладкую мускулатуруматки.
Известно,что многиелактоны, содержащиеэкзоциклическуюметиленовуюгруппу, проявляютцитотоксическуюактивность,хотя это и неявляется обязательнымусловием указанногоэффекта. Количестволактонов, длякоторых установленопротивораковоедействие, ужеперевалилоза 70. Большинствоиз них относитсяк гермакранолидам(костунолид,алатолид, партенолид,элафантин,кницин, элеганини др.), гвайанолидам(дезацетоксиматрикарин,.артеглазиныА и В, гросгеймин,цинаропикрин,амброзин, геленалин,пауцин и др.).Внедрение этихсоединенийв медицинскуюпрактику тормозитсяих весьма высокойтоксичностью.С другой стороны,описаны - лактоны (например,гейгерин),стимулирующиепроцессызлокачественныхновообразований.Установленатакже антибактериальнаяи антипротозойнаяактивностьнекоторыхлактонов.
3.2.Распространениев растительноммире
Сесквитерпеновыелактоны широкораспространеныв природе иизучены в основномв высших растениях.Наиболее богатымявляется семействоAsteraceae (Compositae),в нем отличаютсябольшим разнообразиемсодержащихсялактонов роды:Achillea, Acroptilon, Ambrosia, Artemisia, Helenium, Inula,Gaillardia, Matricaria, Saussurea.Из других семействследует отметитьAcanthaceae,Amarantaceae, Apiaceae(и его родFerula), Aristolochiaceae, Canellaceae, Coriariaceae, Illiciaceae,Lauraceae, Lamiaceae (Labiatae), Magnoliaccae, Меnispermaceae,Polygoniaceae, Umbelliferae.
Изнизших растенийизвестныпредставителидвух семейств,содержащих' сескпитерпеновыслактоны - RussulaceaeиFrullaniaceae.
3.3.Локализацияв растениях
Сесквитерпеповыелактоны могутнакапливатьсяво всех органахрастений, нобольшинство их выделеноиз надземнойчасти.
Болеередки случаивыделениялактонов изподземныхчастей растений.В частности,из корней соссюреирепейниковой(лопуховидной)Saussurea lappa Clarke- растения, широкоиспользуемогов народной иофициальной.медицинестран Востока,получены костунолид,дегидрокостуслактон,дигидрокостуслактон,мокколактон,сауссуреалактон,12 -метоксидигидрокостунолид.Сумма сесквитерпеновыхлактонов, называемыхалантоном,изолированаиз корней икорневищ девясилавысокого. Крометого, выделенысесквнтерпеновыелактоны изкорней родаFerula.
3.4.Классификация
По строениюуглеродногоскелета всеизвестныесесквитерпеновыелактоны подразделяютна 24 основныхтипа. Наибольшееих количествоотносится ктипам гермакрана(гермакранолиды),гвайана (гвайанолиды),амброзана(амброзанолиды)и эвдесмана(эвдесманолиды):
ГермакранГермакрноолидыГвайанаГвайанолиды
АмброзанАмброзанолидыЭвдесманЭвдесманолиды
Построению углеродногоскелета лактоныможно классифицироватькак ациклические,моноциклические,бициклическиеи трицикличсские.Некоторые изних могут бытьэстерифицированыпо спиртовомугидроксилу.
Изредкавстречаютсягликозидированныелактоны, которыемогут бытьэстерифицированыпо гидроксиламсахарногокомпонента.
3.5. Физико- химическиесвойства
Большинстволактонов - этотвердые кристаллическиевещества, реже- маслообразныежидкости,нерастворимыев воде и растворимыев органическихрастворителях:этаноле, хлороформе,диэтиловомэфире, гексане.На растворимостьлактонов в водезначительноевлияние оказываютсопутствующиеэкстрактивныевещества, вприсутствиикоторых онарезко повышается.На этом основанодин из простыхметодов выделения.В водных растворахщелочей сесквитерпеновыелактоны растворяютсявследствиераскрытиялактонногокольца и образованиясолей соответствующихкислот.
Лактоныне имеют общихсвойств, которыеможно было быиспользоватьпри их выделении.Наиболее. достовернаяинформацияможет бытьполучена приИК - спектроскопииизвлеченияиз растений.С этой цельювыделениелактонов производитпо методу К. С.Рыбалко, которыйоснован наспособностиэтих соединенийрастворятьсяв горячей водев присутствиидругих экстрактивныхвеществ с последующимизвлечениемих хлороформом.
Неисключаетсявозможностьпроверки наличиясесквитерпеновыхлактонов методомИК - спектроскопиив других извлечениях,полученныхпри обработкесырья петролейнымэфиром, хлороформом,этилацетатом,ацетоном, этанолом.
Лактонысодержат - лактонныйцикл и поэтомуимеют в ИК-спектреполосу поглощениялактонногокарбонила вобласти 1740 - 1800 см-1.Однако в области1740 - 1750 см -1дает полосупоглощениятакже и карбонил- лактона кумаринов,сложных эфирови др. Но кумариныи ароматическиесложные эфирыотличаютсяеще наличиемдвух полос ванализируемойобласти: 1680 - 1750 (С= О) и 1600 - 1620 см -1(ароматическаяС = С).При отсутствиивторой полосыв области 1600 - 1620см -1полностьюисключаютсяароматическиесоединения,что указываетна возможностьприсутствия- лактонов; наличиеже полос поглощенияв области 1760 - 1800см -1при возможнойвторой полосев области 1610 - 1660см -1свидетельствуето присутствии- лактонов, вмолекуле которыхимеются двойныесвязи в сопряжении;- метилен - - лактонныйцикл.
Приисследованиилактонов методомтонкослойнойхроматографиив качествеадсорбентовиспользуетсяоксид алюминияIV степени активностиили силикагель.Подвижной фазоймогут служитьследующиесистемы растворителей:бензол - этанол(9 : 1), бензол - метанол(9 : 1), бензол - бутанол(9 : 1), гексан - этилацетат(85 : 5), хлороформ- метанол (7 : 3),хлороформ -этилацетат(9 : 1), петролейныйэфир - хлороформ- этилацетат(2 : 2 : 1), петролейныйэфир - бензол- хлороформ (5: 4 : 1) и др.
Проявляютхроматограммычаще всего 1%растворомперманганатакалия в 1 % растворесерной кислоты.Однако данныйпроявительне специфичендля лактонов,так как с егопомощью могутбыть определенын другие ненасыщенныевещества. Издругих проявителейможно отметить1 % раствор ванилинав концентрированнойсерной кислотеи серную кислотупринагревании.
3.6. Методывыделения иразделениясесквитерпенопыхлактонов
Унифицированногометода выделениясесквитерпеновыхлактонов несуществует.В каждом отдельномслучае, необходимконкретныйподход. Значительноеколичестволактонов выделенохлороформомс последующимразделениемполученногоэкстракта послеудаления растворителяколоночнойхроматографией.
Внекоторыхслучаях малополярныелактоны извлекаютпетролейнымэфиром (гексаномили гептаном).Сильнополярныесоединенияможно извлекатьполярнымрастворителем(ацетоном илиспиртом), в этихслучаях сырьерекомендуетсяобезжиритьпредварительнойэкстракциейпетролейнымэфиром. Ацетоновыеили спиртовыеизвлеченияпосле удалениярастворителяи разбавленияводой необходимоподвергнутьфракционированиюрастворителямис увеличивающейсяполярностью(петролейнымэфиром, хлороформом,ди-этиловымэфиром), в полученныхизвлеченияхследует искатьлактоны методомИК - спектроскопии.Для хроматографическойочистки и разделения- лактонов путемколоночнойхроматографиичаще всегоиспользуютнейтральныйоксид алюминия(IV ст. акт., режеIII) или силикагель.Лактоны элюируютрастворителямис увеличивающейсяполярностьюили их смесямиразличныхсоотношениях[РыбалкоК. С., 1978].
3.7. Выделениесесквитерпеновыхлактонов излистьев лопухавойлочного
300 грамм измельченныхлистьев лопухапомещают вколбу емкостью5 л, добавляют2 л хлороформаи нагреваютна водяной банес обратнымхолодильникомв течении 1 часа.Хлороформноеизвлечениепроцеживаюти процесс повторяют3 раза.
После чегорастворительотгоняют, остатоктрижды обрабатывают60% - ным этаноломпо 50 мл.
Полученнуюсмесь фильтрованиемчерез бумажныйфильтр отделяютот осадка, разбавляют100 мл воды и подвергаюттрехкратнойэкстракциихлороформомпо 30 мл.
Хлороформноеизвлечениефильтруют черезбумажный фильтрс безводнымнатрия сульфатом,растворительотгоняют и востатке получаютпорошок черногоцвета.
3.8. Хроматографическоеисследованиесуммы лактоновиз листьевлопуха войлочного
Полученнуюсмесь подвергаютразделениюколоночнойхроматографией.Используютсяколонки (30 * 0.5) с12 г силикагеляL 100 / 250 для хроматографии(Chemapol, Чехословакия),в качествеэлюента применяетсябензол с постояннымдобавлениемэтилацетата,объем фракциисоставляет50 мл, растворительотгоняется.
Результатыколоночнойхроматографииотражены втаблице № 9.
Таблица №9
Результатыколоночнойхроматографиихлороформногоизвлеченияиз листьевлопуха
| № фракций | Элюент | Внешнийвид остатка |
| 1 | Бензол | Аморфный,слабо – желтыйосадок |
| 2 | Бензол | Аморфный,слабо – желтыйосадок |
| 3 | Бензол | Белый и слабо– желтый осадок |
| 4 | Бензол | Белый осадок |
| 5 | Бензол | Белый осадокс желтым оттенком |
| 6 | Бензол | Слабо – желтыйосадок |
| 7 | Бензол | Слабо – желтыйосадок |
| 8 | Бензол | Желтый осадокс зеленымоттенком |
| 9 | Бензол | Зеленыйосадок |
| 10 | Бензол | Зеленыйосадок |
| 11 | Бензол | Зеленыйосадок |
| 12 | Бензол –этил ацетат(95: 5) | |
| 13 | Бензол– этил ацетат(95: 5) | Зеленыйосадок |
| 14 | Бензол –этил ацетат(95: 5) | Зеленыйосадок |
| 15 | Бензол –этил ацетат(95: 5) | Желтый осадок |
| 16 | Бензол –этил ацетат(95: 5) | Желтый осадок |
| 17 | Бензол –этил ацетат(95: 5) | Желтый осадок |
| 18 | Бензол –этил ацетат(95: 5) | Оранжевыйосадок |
| 19 | Бензол –этилацетат(90: 10) | Желтый осадок |
| 20 | Бензол –этилацетат(90: 10) | Желтый осадок |
| 21 | Бензол –этилацетат(90: 10) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 22 | Бензол –этилацетат(90: 10) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 23 | Бензол– этилацетат(90: 10) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 24 | Бензол –этилацетат(85: 15) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 25 | Бензол –этилацетат(85: 15) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 26 | Бензол –этилацетат(85: 15) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 27 | Бензол –этилацетат(85: 15) | Желтый осадок |
| 28 | Бензол –этилацетат(85: 15) | Желтый осадок |
| 29 | Бензол –этилацетат(80: 20) | Темно – зеленыйосадок |
| 30 | Бензол –этилацетат(80: 20) | Темно – зеленыйосадок |
| 31 | Бензол –этилацетат(80: 20) | Темно – зеленыйосадок |
| 32 | Бензол– этилацетат(80: 20) | Темно – зеленыйосадок |
| 33 | Бензол –этилацетат(75: 25) | Темно – желтыйосадок |
| 34 | Бензол –этилацетат(75: 25) | Желтый осадок |
| 35 | Бензол –этилацетат(75: 25) | Желтый осадок |
| 36 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Желтый осадок |
| 37 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Желтый осадок |
| 38 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Темно – желтыйосадок |
| 39 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Темно – желтыйосадок |
| 40 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Темно – желтыйосадок |
| 41 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 42 | Бензол –этилацетат(70: 30) | Белый осадок |
| 43 | Бензол –этилацетат(65: 35) | Белый осадок |
| 44 | Бензол –этилацетат(65: 35) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 45 | Бензол –этилацетат(65: 35) | Желтый осадок |
| 46 | Бензол –этилацетат(65: 35) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 47 | Бензол –этилацетат(65: 35) | Белый и слабо– желтый осадок |
| 48 | Бензол -этилацетат(65: 35) | Белый осадок |
3.9. ИК - спектроскопиясуммы лактоновфракции 3 - 6 излистьев лопухавойлочного
При ИК - спектроскопииостатка фракции3 - 6 ( в виде таблетокс калия бромидом)обнаруживаютследующиеполосы поглощения:
1745 см -1 - лактонныйкарбонил,
1411 см -1 - экзоциклическаяметиленоваягруппа,
1708 см -1 - оксогруппасложноэфирнойсвязи ,
3418 см -1 - гидроксильнаягруппа,
1411, 1097 см -1 -
Полученныеданные находятсяв соответствиисо структуройранее выделенногоиз листьевлопуха сесквитерпеновоголактона арктиопикрина.
По результатамхроматографии,на пластинкахсилуфол, в системеэтанол - этилацетат– хлорофор (1 :1 : 8) (проявитель:1 % раствор калияперманганатав 1 % серной кислоты),были объединеныфракции 3 - 6; 14 - 19; 20- 25; 26 - 35; 36 - 48.
Рисунок 1.
Результатытонкосложнойхроматографиисуммы сесквитерпеновыхлактонов излистьев лопухавойлочного(проявитель- раствор калияперманганата)
 Rf= 0.63 Rf - 0.48 Rf =0.60 Rf = 0.41 Rf = 0.42 Rf= 0.27 x x x x x 3 - 6 14 - 19 20 - 25 26 - 35 36 - 48 |
Хроматографическийанализ позволяетзаключить, чтов полученномизвлечениинаходится 6веществ, проявляющихсякалия перманганатом.
Выводы
В ходе работыбыли выполненывсе поставленныезадачи:
1) Определенытовароведческиепоказателилистьев лопухавойлочного;
2) Полученыжидкие экстрактыиз листьевлопуха войлочногона 25, 40, 70 % этанолеи проведенаих стандартизация;
3) Проведеныисследованияпротивовоспалительныхсвойств;
4) Проведеновыделениесесквитерпеновыхлактонов.
Приложение.Таблицыпо противовоспалительнойактивности
Таблица6
Среднийдиаметр раневогоповрежденияу мышей, получавшихизвлеченияиз лопуха войлочногов сравнениис контрольнойгруппой.мм(Mm)
Группаживот. | Числоживот. | СУТКИНАБЛЮДЕНИЯ | |||||||
1 | 2 | 5 | 8 | 13 | 15 | 17 | 19 | ||
Контроль | 8 | 12.90.5 | 11.80.4 | 10.10.4 | 7.80.5 | 2.70.7 | 1.50.4 | 0.90.4 | 0.10.1 |
Сух.экстр. корней70 | 6 | 12.80.6 | 11.00.4 | 10.80.5 | 8.20.3 | 2.00.6 | 0.70.5 | 0.80.6 | 0 |
Сух.экстр. корней40 | 6 | 13.00.3 | 11.51.1 | 10.30.6 | 8.10.4 | 2.10.9 | 0.90.3 | 1.70.6 | 0 |
Сух.экстр. корней25 | 5 | 12.80.6 | 10.90.8 | 8.30.7* | 5.60.5* | 1.10.5 | 0.60.2 | 0.40.2 | 0 |
Сух.экстр. листьев70 | 6 | 12.80.3 | 12.80.7 | 9.60.6 | 7.20.4 | 1.80.6 | 1.40.5 | 0.60.2 | 0.20.2 |
Сух.экстр. листьев40 | 6 | 12.80.5 | 12.31.1 | 10.90.8 | 8.10.7 | 1.90.4 | 1.20.4 | 0.60.4 | 0 |
Сух.экстр .листьев25 | 6 | 12.60.3 | 10.60.6 | 8.30.4* | 6.30.6* | 0.10.1* | 0* | ||
ПРИМЕЧАНИЕ:* - различиястатистическидостоверныв сравнениис контролемпри Рu,t
Таблица7
Влияниесухих экстрактовлопуха войлочногона развитие“ватной”гранулемыу крыс линииWistar(Mm)
Группа,доза | Числоживот. | Вессухой гранулемы(мг) | Весэкссудата(мг) |
Контроль | 7 | 49.03.5 | 200.023.1 |
Индометацин(8 мг /кг) | 6 | 39.63.1 | 127.018.1* |
Сухойэкстракт корней70 (25 мг /кг) | 6 | 38.72.6* | 148.214.7* |
Сухойэкстракт корней40 (25 мг /кг) | 5 | 41.83.1 | 151.618.5 |
Сухойэкстракт корней25 (25 мг /кг) | 5 | 53.43.8 | 215.014.4 |
Сухойэкстракт листьев70(25мг /кг) | 5 | 49.46.2 | 215.054.0 |
Сухойэкстракт листьев40(25мг /кг) | 5 | 50.06.0 | 186.220.0 |
Сухойэкстракт листьев25(25мг /кг) | 5 | 44.02.7 | 170.614.0 |
ПРИМЕЧАНИЕ:*- различиястатистическидостоверныв cравнениис контролемпри Рu,t
Таблица 8
Влияниесухих извлеченийиз листьевлопуха войлочногона остроекаррагениновоевоспаление(Мm)
Группаживотных | Дозамг / кг | Числоживот. | Прироствеса лапки,% |
Контроль | - | 10 | 60.14.4 |
Сухойэкстракт 40 | 100 | 6 | 52.05.3 |
50 | 6 | 37.72.5* | |
10 | 6 | 44.77.9* | |
1 | 6 | 44.54.2* | |
Сухойэкстракт 25 | 100 | 6 | 42.75.8* |
50 | 6 | 51.85.5 | |
10 | 6 | 42.85.6* | |
1 | 6 | 52.75.8 | |
Сухоеводн. извл. | 100 | 6 | 58.25.6 |
50 | 6 | 56.56.0 | |
10 | 6 | 55.58.1 | |
1 | 6 | 65.25.6 |
ПРИМЕЧАНИЕ:*- различиястатистическидостоверныв сравнениис контролемпри Рu,t
Списоклитературы
1. Блинова К.Ф., Яковлева Г.П. Ботанико -фармакологическийсловарь. - М. :Наука, 1990. - с.207.
2. Государственнаяфармакопея11 - е издание. - М.: Медицина, 1987. -вып. 1. - 333 с.
3. Государственнаяфармакопея11 - е издание. - М.: Медицина, 1990. -вып. 2. - 395 с.
4. ГриневичМ. А. Информационныйпоиск перспективныхлекарственныхрастений. -Л.,1990. - с.92 - 105.
5. ГубергрицА. Я., СололченкоН. И. Лекарственныерастения Донбасса.- Донецк, 1990. - с. 106.
6. Генис Д. Е.Медицинскаяпаразитология.- Медицина, 1979. - с26.
7. Дыгай А. М.,Клименко Н. А.Воспалениеи гемопоэз. -Томск, 1992. - с.276.
8. Есипова И.К. Регенерациякожи у млекопитающихживотных ичеловека // очеркипо проблемерегенерации,М. : Медицина,1966. - с. 29 - 55.
9. КовалеваН. Г. Лечениерастениями.- М. : Наука, 1972. - с.162 - 164.
10. КрыловП. Н. Флора ЗападнойСибири. - Томск: издательствоТомскогоГосударственногоуниверситета,1949. - Вып. 2 . - с. 2874 - 2877.
11. КузнецоваМ. А., РезниковаА. С. Сказанияо лекарственныхрастениях. - М.: Высшая школа.,1992. - с. 277 - 279.
12. Лагерь А.А. Лечениерастениями.Фитотерапия.- Красноярск.: " Алис ", 1992. - с. 66 -69.
13. Минаева В.Г. Лекарственныерастения Сибири.1991. - 123 с.
14. НовицкаяС. Я., БорзуновЕ. Е., СафиулинР. М. Производствотаблеток. - М.: Медицина., - 1969.- 136 с.
15. ПайзиеваС. А. О продолжительностижизни некоторыхвидов Cousinia coss. и Arctium L.// Ботаническийжурнал. - 1962. - Т 47. - #10. - с. 1517 - 1521.
16. ПашинскийВ. Г. и др. Растенияв терапии ипрофилактикеболезней. - Томск.: Изд - во Томскогоуниверситета,1989. - с. 60 - 64.
17. Попов А.П. ТраволечебникАлексея Попова.- Кемерово. : АОКемеровскоекн. изд - во, 19937 - с.56 - 58.
18. Растительныересурсы СССР: Цветковыерастения, иххимическийсостав, использование;СемействоAsteraceae (Compositae). - Спб. : Наука,1993. - с. 332 - 335.
19. РешетнякВ. В., Цигура И.В. Травник. - Харьков: Прапор, 1992. - с. 101.
20. Рыбалко К.С. Природныесесквитерпеновыелактоны. - М. : "Медицина ",1978. - с. 320.
21. Тринус Ф.П., Клебанов В.К., Ганжа И. М.,Сейфулла Р. Д.Фармакологическаярегуляциявоспаления.- Киев. : Здоровье,1987. - с. 144.
22. Юзепчук С.В. и СергиевскаяЕ. В. Флора СССР.- М. : Академиянаук СССР. 1962. - Т.27, - с. 93 - 107.
23. Фенчин К.М. Заживлениеран. - Киев. : Здоровье,1979. - с. 167.
24. ХудяковаН. В., ФилипповГ. П., ГорленкоЛ. В., КовалевскаяР. А., ШалыгинВ. А. Актуальныевопросы детскойгастроэнтерологии//учебное пособие.- Томск. - 1992. - с. 26.
25. Штэпа И. С.О естественныхграницах междуродами Causinia и Arctiumна основеполинологическихданных. - Л. - 1973. - с.37 - 39.