Диагностика и специфическая терапия инвазии ротовых простейших у больных пародонтитом (стр. 2 из 3)

Реактивы и оборудование:

- стерильная корневая игла с турундой;

- предметное и покровное стекла;

- пробирки;

- капилляр или пипетка;

- питательная среда;

- термостат;

- микроскоп.

Забор содержимого пародонтальных карманов производят аналогично предыдущим методам, однако наиболее приемлемым является забор стерильным стоматологическим экскаватором № 2 из глубины кармана. Содержимое смывают в жидкую питательную

среду, которую затем инкубируют в термостате при Т - 37° С.

Культура развивается в течение 3-6 суток. По окончании срока инкубации со дна пробирки капилляром или пипеткой берут

осадок, каплю помещают на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют с об. 40, ок. 7.

Применяется много питательных сред, но основными ингридиентами их являются физиологический раствор, сыворотка и углеводы.

Рекомендуют использовать простую сывороточную среду. Она проста в приготовлении и дает хороший рост трихомонад. Для ее приготовления берут 9 частей стерильного физиологического раствора, добавляют 1 часть лошадиной или бычьей сыворотки и 1 петлю стерильного рисового крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-10 мл.

Наш опыт по культуралъной диагностике ротовых простейших показал, что простая сывороточная среда не всегда дает положительные результаты. Очевидно, это связано с региональными физико-химическими характеристиками воды, из которой готовят физиологический раствор. Физиологический раствор, приготовленный аптекой, у нас всегда имел рН 5,1 и питательная среда на таком растворе без добавления буферных солей роста трихомонад не давала.

Поэтому мы рекомендуем применять среду Павловой. Способ приготовления: хлористый натрий - 4,25 г, двузамещенный фосфорнокислый натрий /Na2HPO4 X 2 H2O2 , можно и Na2HPO4 X 12 H2O2 - 0,3 г, однозамещенный фосфорнокислый калий / K2HPO4 - 0,23 г, дистиллированная вода - 500,0 мл. Раствор стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм в течение 20 минут. Перед засеванием материала раствор разливают в пробирки по 9,5 мл, добавляют О,5 мл лошадиной сыворотки и петлю стерильного рисового крахмала.

В качестве сыворотки применяют нормальную лошадиную сыворотку для приготовления питательных сред или сыворотку лошадиную сухую. Предварительно флакон с нормальной лошадиной сывороткой раскупоривают и оставляет в термостате на 3-е суток для испарения консерванта, а сухую растворяют в дистиллированной воде.

Культуральным методом на среде Павловой десневые амебы выявлены в незначительном числе /3,74% из всех положительных результатов, полученных другими протозоологическими методами/, поэтому для выделения их лучше использовать среду следующего еоетава: физиологический раствор - 1000,0 мл, мясо-пептонный бульон - 20,0 мл, печеночный экстракт -20,0 мл, глюкоза - 2,5 г, Na2HPO4- 0,45 г, K2HPO4 - 0,45 г, рН = 7,4- 7,8, К простерилизованной среде добавляют 10,0 -15,0 мл инактивированной лошадиной сыворотки, разливают в пробирки; по 6— 10,0 мл ив каждую вносят 1-2 петли стерильного рисового крахмала.

Амебы развиваются в щелочной среде, а трихомонады предпочитают кислую.

Рост трихомонад на жидкой питательной среде Павловой выявлен в 76,92% среди всех положительных случаев. Определение в культуре этих простейших не представляет особого труда, посколько в поле зрения скапливается от 5 до 30-50 особей. Незначительная часть ротовых трихомонад имеет тот же вид, что и в нативном препарате. Подавляющее же число особей округляется, приобретает шарообразную форму. В цитоплазме видны заглоченные зерна крахмала. Выбрасывание жгутиков активное, у некоторых крупных трихомонад можно увидеть движе ние ундулирующей мембраны в виде волны, пробегающей по длиннику тела.

4. Люминесцентная протозооскопия

Учитывая, что в некоторых случаях протозооскопия окрашенных препаратов не позволяет четко отдифференциовать мелкие особи десневых амеб без фагоцитированых лейкоцитов, вакуолей, псевдоподий от ротовых трихомонад, предложено использовать люминесцентную протозооскопию.

Принцип метода: приготовлений мазок или отпечаток обрабатывают флюоресцирующим веществом, после чего объект, невидимый в ультрафиолетовом свете, приобретает иной цвет.

Оборудование и реактивы:

- корневая игла с турундой;

- предметное стекло;

-фиксатор /10% раствор формалина/;

- флюоорохром /акридин оранжевый 1:10 000/;

- люминесцентный микроскоп.

Содержимое пародонтальных карманов переносят на предметное стекло в виде отпечатка или мазка, высушивают, фиксируют в10% растворе формалина в течение 10 минут, вновь высушивают и окрашивают раствором акридина оранжевого в течение 1 минуты. Микроскопию производят с иммерсионным объективом 90.

Впервые морфологическая характеристика ротовых простейших при помощи люминесцентной микроскопии дана П.С.Флис /1976/.

Десневые амебы, окрашенные флюорохромом, хорошо определяются. Для них характерно темно-зеленое свечение цитоплаз мы и более светло окрашенное ядро.

Ротовые трихомонады тоже имеют специфическое свечение. Цитоплазма окрашивается в кирпично-красный цвет, ядро люминесцирует достаточно ярко белесовато-оранжевым цветом. Четко виден аксостиль, жгутики чаще не определяются.

Лейкоциты, создающие фон препарата, имеют зеленоватый оттенок.

Не всегда ротовые простейшие обнаруживаются сразу всеми методами. Каждый из вышеназванных методов имеет свои преимущества и недостатки.

Протозооскопия нативного препарата в должной мере является объективным методом, однако его применение должно быть непосредственно после взятия материала и любое промедление во времени приводит к снижению двигательной активности трихомонад, что в дальнейшем приведет к затруднению в дифференциации с другими клеточными элементами.

Окрашенный препарат пригоден для выявления десневых амеб, но обильный фон в препарате не позволяет обнаружить единичные экземпляры трихомонад. В препарате, приготовленном в виде мазка, легче находить как десневые амебы, так и трихомонады, но при этом возникает необходимость просмотра большой площади мазка.

Культуральным методом на среде Павловой целесообразно выявлять только Trichomonas tenax

. Недостатком метода является меньшая частота выявляемости простейших по сравнению с мазком. Это связано в большей части с техническими погрешностями: мало материала для исследования, помещение материала в не подогретую среду, несоблюдение режима инкубации, рН среды и т.д.

Указанные недостатки компенсируются тем, что диагностику протоинвазии осуществляют параллельно всеми методами.

Техника диагностических протозоологических исследований проста, оборудование и реактивы доступны для лабораторий и стоматологических учреждений любого уровня. Несмотря на это выявление ротовых простейших требует натренированности, терпения и внимания лаборантов.

Специфическая терапия протоинвазии полости рта

Терапия пародонтита строится на принципах максимально индивидуализированного комплексного подхода с учетом общего и местного статуса больных. Весь комплекс лечебных мероприятий должен быть направлен на ликвидацию этиологических и патогенетических звеньев развившегося процесса. У больных пародонтитом с инвазией ротовыми трихомонадами среди этих мероприятий важное значение приобретает воздействие на простейших в пародонтальных карманах. С этой целью применяют специфические протистоцидные препараты для местного и общего лечения.

Для местной терапии используют 1% р-р трихопола, 1% р-р трихомонацида, р-р фурацилина 1:5000, 1% р-р мефенамината натрия, 1,5% р-р метиленового синего, 0,5-1% р-р перманганата калия, 40% р-р гексаметилентетрамина. Вышеуказанные препараты вводят в пародонтальные карманы в виде инсталляций и орошений.

При выборе метода введения и экспозиции лекарственного вещества следует учитывать сроки гибели трихомонад.

По данным з.а.флис, И.А.Бенюмовой /1976/ растворы трихопола, трмхомонацида, фурацилина в раздавленной капле культуры протистов оказывают губительный эффект на 30-40 минуте, иногда на 60-й. Следовательно, их рационально оставлять в пародонтальных карманах под повязкой.

Свежеприготовленный 1% р-р мефенамината натрия на 5-18 минуте обездвиживает трихомонады, а хранившийся длительное время оказывает эффект на 20-30-й минуте.

0,5-1% раствор перманганата калия обездвиживает простейших на 10-30-й минуте. Эти вещества целесообразно вводить в виде инстилляций на турундах, при этом необходима частая замена на свежие турунды, так как концентрация лекарств снижается вследствие разбавления слюной, кровью, экссудатом.

Очень удобно иметь в кабинете навески с порошком мефенамината натрия по 0,5 г. Из них легко приготовить свежий 1% раствор /0,5 г порошка растворить в 50,0 мл дистиллированной воды/.

Гексаметилентетрамин /уротропин/ по нашим наблюдениям в большинстве случаев вызывает не только обездвиживание, но и распад трихомонад на протяжении 1-2-х минут. Им можно орошать пародонтальные карманы при помощи распылителя стоматологической установки.

Результаты наших исследований показали, что после воздействия на трихомонад 0,02% раствором декаметоксина основная масса особей прекращает движение на 4-7 минуте, 0,05% раствор хлоргексидина снижает двигательную активность простейших или прекращает ее на 7-10-й минуте.

Несмотря на положительный протистоцидный эффект указанных препаратов в раздавленной капле применение их в клинике не всегда приносит желаемый результат. Очевидно, это связано с труднодоступностью зубодесневых карманов.

Перед внесением лекарственных веществ следует тщательно удалить зубные отложения, провести обильное орошение карманов другими антисептическими средствами. Это будет способствовать механическому вымыванию простейших, микрофлоры, экссудата и таким образом протистоцидные препараты могут непосредственно воздействовать на паразитов.