Этиология
Возбудители бруцеллеза у человека и животных — бруцеллы — группа патогенных микробов. Первый представитель микробов этой группы был обнаружен английским ученым Д. Брюсом в 1886 г. в препарате из селезенки солдата, погибшего от лихорадки на острове Мальта.В 1887 г. Брюс получил его в чистой культуре. В 1897 г. Банг и Стриболт обнаружили второго представителя группы бруцеллеза у абортировавшей коровы. Третий микроб группы бруцеллеза был выделен Траумом в 1914 г. при аборте свиней.
В 1920 г. Мейер и Фезье объединили этих трех микробов в группу по имени Д. Брюса. До Мейера и Фезье группа этих возбудителей была отнесена Кастеллани и Челмерсом к роду АкаПдепез. В 1918 г. Иване при сравнительном изучении установила родство этих микробов и в 1923 г. обозначила всю группу под видовым названием, подразделив ее на две подгруппы. Классификация Хеддльсона в 1931 г. встретила возражения со стороны А. Харди, Джордана, Бортса и Г. Харди ввиду необоснованного выделения сходных вариантов в самостоятельный род. Поэтому они, сохранив в основе номенклатуру Ивэнс, дополнили ее вариантом свиного аборта. Теперь чаще всего пользуются классификацией по Хеддльсону.
Морфологически все три типа бруцелл неотличимы друг от друга. Это мельчайшие бактерии шаровидной, овоидной или более удлиненной формы. Диаметр шаровидных форм достигает 0,3—0,4 ц; бактерии удлиненной формы имеют длину от 0,4—0,8 до 2,2—3,0 ц, ширину 0,4—0,8 ц. В электронном микроскопе бруцеллы сходны между собой, имеют форму кокков и коккобактерий. Бруцеллы более крупные, палочковидные с закругленными концами; кокковые формы встречаются редко. Бруцеллы неподвижны, спор не образуют, при некоторых условиях приобретают разнообразные формы и размеры, а также способны образовывать капсулы. У бруцелл описаны явления диссоциации с ооразованием Н-формы, прежних авторов. Обнаружены и Б-формы. Бруцеллы окрашиваются всеми анилиновыми красками, Грамотрицательны, при окраске по Романовскому—Гимза принимают нежно-фиолетовый цвет, а при окраске по Козловскому— ярко-красный; принадлежат к аэробам и факультативным анаэробам. Хорошо растут на всех мясопептонных средах с рН = 6,8—7,2 при 36—38°. Оптимальной питательной средой для них является печеночный агар и бульон с глюкозой (0,5%) и глицерином (1,5%). Для выращивания их применяются также картофельная, желточная среда и приготовленная на рыбном гидролизате сухая среда «Д». Бруцеллы хорошо развиваются при засеве в желточный мешок яиц и куриных эмбрионов. Лабораторные культуры бруцелл при перевивках на питательные среды вырастают через 24—48 часов. При высевах бруцелл из инфицированного материала от человека и животных они вырастают только через 10-—30 суток. Первые генерации, вырастают лишь при наличии в атмосфере повышенного содержания С02 (10%). Колонии бруцелл на агаре в чашках Петри бесцветны, прозрачны, выпуклые, круглые, гомогенные или с нежной зернистостью, в бульоне наблюдается равномерное помутнение с кольцевидным нежно-голубоватым ростом по стеклу. У бруцелл всех типов обнаружены явления бактериофагии. Бруцеллезный бактериофаг нередко обнаруживается в музейных и свежевыделенных культурах бруцелл от людей и животных. Он еще мало изучен.
Бруцеллы способны к щелочеобразованию, они не разжижают желатины и не свертывают молока; сбраживают арабинозу и глюкозу; не образуют индола; редуцируют нитраты и нитриты и гидролизуют белки, пептоны и аминокислоты; каталазоактивны.
Бруцеллы обладают хорошими агглютиногенными и агглютинирующими свойствами. Различные типы бруцелл по агглютинации неотличимы. Уилсон и Майлз обнаружили у группы два серологически дифференцированных антигена: преобладает антиген М (1 : 20), и наоборот, антиген А. Из бруцелл выделены полисахариды, а также полный антиген Буавена. Б.И. Дубровская (1954— 1955) обнаружила в бруцеллезе два антигена: антиген типа Буавена, состоящий из специфического полисахарида, липоида и белка, и антиген, в состав которого, кроме специфического полисахарида и белка, входят еще и нуклеиновые кислоты. В зависимости от типа бруцелл оба антигена находятся в клетке в различных соотношениях. У бруцелл установлен у1-антиген.
Бруцеллезы малоустойчивы к высокой 1°. В жидких культурах они погибают при 60° в течение 30 минут; при 80—85° — в течение 5 мин. и при кипячении — почти моментально. Сухой жар (90—95°) убивает бруцелл через час.
При низких температурах бруцеллы хорошо сохраняются. Солнечный свет убивает бруцеллы в зависимости от интенсивности инсоляции через различные сроки: от нескольких минут до часа. Бруцеллы чувствительны к дезинфицирующим веществам: 2% карболовая кислота, 3% креолин и лизол, 0,2—1% хлорная известь, 0,01% хлорамин, 0,1% сулема и соляная кислота убивают их в течение нескольких минут.
Для человека заразительность и патогенность различных типов бруцелл неодинаковы. Возбудитель бруцеллез мелкого рогатого скота для человека является высоко заразительным и высоко патогенным. Заражение им почти равнозначно заболеванию. Возбудитель бруцеллеза свиней также является патогенным для человека. Так, в США из общего числа культур, выделенных от больных, 48% составил. Однако встречаются варианты мало патогенные или не патогенные для человека. Возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота для человека условно патогенен. Заражаемость людей этим типом бруцеллеза определяется по иммунологическим реакциям. По-видимому, встречаются варианты, различные по вирулентности для человека. Для группы бруцелл характерна способность к миграции от типовых животных к другим видам животных. От домашних животных, больных бруцеллезом, происходит при аборте с плодом, околоплодной жидкостью, выделениями из родовых путей, с молоком, мочой и калом. Выделениями больных животных заражается шерсть, подстилка стойла, пастбище, корм, водопой и пр. В природе и пищевых продуктах бруцеллы сохраняются: в коровьем молоке от 10 до 45 дней, в масле до 25—67, в сыре от 14 до 44, в брынзе от 15 до 45, в мясе от 14 до 20 дней, в шерсти и коже (овец) до 3—4 месяцев, в воде от 5 до 150 дней, в почве влажной до 72 и в сухой до 44 дней.
Для обнаружения возбудителя бруцеллеза в организме людей и животных и в объектах внешней среды применяются бактериоскопические, бактериологические и биологические методы.
Для дифференцирования типов бруцелл применяют методы:
1. Дифференциация по С02. Первые генерации при выделении от человека и животных вырастают в обычных аэробных условиях. Напротив, первые генерации культуры растут при наличии в атмосфере повышенного содержания С02; иногда первые генерации получаются в обычных условиях. Этот метод позволяет дифференцировать. Культуры образуют Н25 при ассимиляции белков и аминокислот, а в тех же условиях роста не выделяют его совсем или образуют в очень незначительном количестве и непродолжительно (24 часа). Наиболее интенсивно и длительно (от 4 до 10 дней); несколько менее выражена эта способность определяют обычным методом с помощью реактивных бумажек, пропитанных раствором уксуснокислого свинца, в посевах, сделанных одинаковым количеством взвеси испытуемой культуры на скошенную поверхность печеночного агара (рН = 6,6— 6,8). Результаты учитывают в течение 10 дней с заменой через каждые 1—2 дня реактивных бумажек свежими, суммируя зоны почернения и побурения реактивных бумажек. Сероводородный признак как самостоятельный метод дифференциации группы является недостаточным в связи с его вариабильностью.
2. Дифференциация по устойчивости бруцелл к анилиновым краскам (предложена Хеддльсоном в 1929 г.). Типы бруцелл неодинаково устойчивы к основному фуксину, метилвиолету пиронину В и тионину. Эти краски, прибавленные в определенных количествах к печеночному агару (рН=6,6—6,8), избирательно задерживают рост различных типов бруцелл при выращивании их в течение 72 часов. В частности, дает хороший рост на средах с тионином и фуксином; не развивается в присутствии тионина, но хорошо растет на средах с фуксином, не растет при добавлении фуксина, но дает пышный рост в присутствии тионина. Мейер и Цобел (1932) усовершенствовали метод Хеддльсона, заменив печеночный агар полужидкой средой и уточнив технику в постановке опытов.
Состав среды Мейер—Цобела: мясной воды 1 л> поваренной соли 5 г,пептона 2 г, агара реакция среды после стерилизации рН = 6,8—7,0. Краски (фуксин, пиронин В и тионин) заготовляют впрок в виде основных растворов: 0,1 г краски растирают в ступке с 20 мл спирта и доводят дистиллированной водой до 100 мл. Основной раствор краски добавляется к расплавленному и охлажденному до 4 5° полужидкому агару из расчета разведений стандартных или подтитрованных на эталонных культурах красок: тионин — 1: 25 000 или 1: 50 000; фуксин — 1: 50 000; пиронин В — 1 : 200 000. Полужидкий агар тщательно смешивают, стерильно разливают по 4 мл в пробирки и проверяют на стерильность в течение 48 часов в термостате при 37°. На среды с краской засевают 48-часовую агаровую культуру, смытую раствором следующего состава: К2НР01—1 г, цистин — 0,2 г, бидистиллированная вода — 1л, КаС1—2,5г, КН2РО,—0,75 г, М^ЗО,—0,1г, СаС12— 0,01 г. В каждую пробирку засевают по стандартной петле (2 мм),содержащей 1000—2500 бруцелл, и пробирки помещают в термостат (37°) на 6 дней. Результаты опыта учитывают по наличию или отсутствию роста микробов. Взамен указанного раствора можно использовать физиол. раствор рН = 7,0. Дифференциация этим методом в большинстве случаев совпадает с эппдемдол. данными.
3. Серологическая дифференциация по адсорбции агглютининов позволяет выявить существующие в природе варианты и намечает пути к выявлению генетических связей различных типов (Здродовский).