АВТОРЕФЕРАТ
ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ
ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК
ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ФЛАВОНОИДОВ
(фармакодинамика и перспективы клинического изучения)
14.03.06 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
На правах рукописи
ДОРКИНА ЕЛЕНА ГРИГОРЬЕВНА
Волгоград 2010
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" и в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"
Научный консультант: доктор медицинских наук,
профессор Тюренков Иван Николаевич
Официальные оппоненты:
Доктор биологических наук, профессор Дудченко Галина Петровна
2. Доктор биологических наук, профессор Гарибова Таисия Левоновна
3. Доктор медицинских наук, Макляков Юрий Степанович
Ведущая организация:
ГОУ ВПО "Саратовский государственный медицинский университет Росздрава"
Защита состоится "__"_________2010 г. в____ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 ГОУ ВПО "Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава" (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов,1)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава"
Автореферат разослан " " 2010 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
профессор А.Р. Бабаева
Поражения печени различной этиологии являются достаточно широко распространенной патологией [Дробинский А. и соавт., 2002; Ильченко Л.Ю. и соавт., 2002, Полонский В.М., 2005]. По данным ВОЗ в мире - 2 млрд человек с патологией печени, что в 100 раз превышает распространенность ВИЧ-инфекции [Дроговоз С.М., 2009]. Среди широкого круга препаратов, используемых в комплексной терапии заболеваний печени, выделяют сравнительно небольшую группу "истинных" гепатопротекторов, эффективность которых не всегда оказывается достаточной.
В патогенезе поражений печени (токсической, алкогольной и другой этиологии) большое значение отводится окислительному стрессу [Буеверов А.О., 2002, Скворцов В.В., 2003, Ипатова О.М., 2005, Оковитый С.В., 2007, Fernandes-ChecaJ. C., 2003, LieberC. S., 2004, DeyA., CederbaumA.I., 2006]. При оксидативном стрессе, в первую очередь, наблюдается сдвиг про-антиоксидантного равновесия в сторону усиления прооксидантной составляющей, снижение резервов мобилизации антиоксидантной защиты, что сопряжено с нарушением энергообеспечения клетки, детоксикационных механизмов, активацией апоптоза, провоспалительных цитокинов и др. [Дубинина Е.Е., 1998, Болдырев А.А., 2001, Шаповал Г.С. и др., 2003, Сазонтова Т.Г. и др., 2007, Ланкин В.З. и др., 2009, HanD. Etall., 2006]. Окислительный стресс инициирует нарушения, связанные с кровоснабжением печени (повреждение эндотелия сосудов и синусоидов печени с изменением выработки оксида азота, ухудшение реологических свойств крови, состояния микроциркуляторного русла и пр), что усугубляет течение патологического процесса [Марков Х.М., 2005, LukivskayaO. etal., 2004, PầrvuA. E. etal., 2005, BabệlP. etal., 2006].
Многофакторность патогенеза поражений печени требует, чтобы и защита осуществлялась на различных уровнях и структурах, что определяет перспективность поиска новых гепатопротекторов среди флавоноидов, для которых выявлено более 40 видов фармакологической активности [RobakJ. etal., 1996]. Несмотря на значительное число работ, посвященных изучению гепатозащитных свойств флавоноидов, сравнительного изучения эффективности их действия не проводилось. Не выяснены до конца и механизмы их гепатопротекторной активности. Большинство исследователей считают, что основой такового является антиоксидантное действие [Чучалин В.С., 2003, Куркин В.А., 2003, Саратиков А.С. и др., 2005, MiddletonE. JR. etal., 1996, 2000, RobackI. etal., 1996, Narayanaetal., 2001, NijveldtR.I. etal., 2001, HavsteenB. H., 2002]. В последние годы все большее внимание уделяется исследованию состояния эндогенных систем антиоксидантной защиты [PuiggrosF. etal., 2005, Moskaugetal., 2005, Кравченко Л.В. и др., 2005, FreiB., 2003].
Поэтому сегодня актуальным является не только поиск новых эффективных и безопасных гепатозащитных препаратов, но и сравнительное изучение особенностей и интимных механизмов действия уже известных гепатопротекторов.
Исходя из этого, следует считать важным, как с научной, так и с практической точки зрения, комплексное, сравнительное изучение гепатопротекторного действия флавоноидов, их влияние на про-антиоксидантный баланс, системы антиоксидантной защиты, детоксикации и энергообеспечения, эндотелиальную дисфункцию, продукцию оксида азота и печеночный кровоток, что и явилось предметом настоящей работы.
На основании комплексной и сравнительной оценки влияния флавоноидов на основные метаболические и гемодинамические патогенетические процессы при токсических поражениях печени экспериментально обосновать создание новых эффективных отечественных гепатопротекторов.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
провести изучение в сравнительном аспекте влияния лечебно-профилактического действия гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина, карсила и сухого экстракта (СЭ) из горошка обрубленного (ViciaabbreviateFish. exSpreng. (ViciatruncatulaFish. ex. Bieb), содержащего флавицин, на развитие синдромов цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления и гепатодепрессии, гистологическую картину печени, интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ), состояние систем антиоксидантной защиты (АОЗ), энергообеспечения и детоксикации при экспериментальном остром поражении печени СС14 и этанолом;
провести сравнительное изучение антиоксидантного действия исследуемых флавоноидов invitro и их влияния на интенсивность ПОЛ, состояние систем АОЗ, энергообеспечения и детоксикации invivo при их курсовом введении в условиях нормы;
провести сравнительное изучение влияния флавоноидов на содержание NO у интактных животных и при его избыточной продукции, индуцированной СС14, методом ЭПР;
изучить в сравнительном аспекте влияние флавоноидов на органный кровоток и функцию эндотелия в условиях нормы и моделирования эндотелиальной дисфункции;
провести комплексное изучение энергетического обмена, интенсивности ПОЛ и состояния АОЗ, а также изменения печеночных показателей и гистоморфологической картины данного органа в ходе хронической алкоголизации и при лечебном применении наиболее активного гепатопротектора в сравнении с карсилом;
изучить влияние наиболее активного гепатопротектора на развитие фиброза при хроническом поражении печени СС14, желчеобразовательную функцию печени в норме и при экспериментальном гепатите и отдаленные результаты его лечения.
Впервые проведено сравнительное, комплексное изучение механизмов гепатопротекторного действия индивидуальных флавоноидов, флавицина и СЭ из травы горошка обрубленного, их влияние на процессы ПОЛ, системы АОЗ, детоксикации и энергообмена в условиях нормы и патологии печени. Впервые установлена гепатозащитная активность флавицина, выделенного из оригинального растительного сырья (надземная часть V. abbreviata), при токсических поражениях печени СС14 и этанолом. Впервые показано существование тесной корреляционной взаимосвязи между выраженностью гепатозащитного действия и степенью восстановления про-антиоксидантного равновесия за счет не только прямого антиоксидантного действия флавоноидов, но и повышения активности эндогенной системы АОЗ в печени.
Впервые выявлено, что курсовое введение исследуемых флавоноидов оказывает стимулирующее влияние на активность NADP+-редуктазных ферментов, принимающих участие в регенерации восстановленного глутатиона, а применение диосмина, флавицина и кверцетина повышает содержание GSH, участвующего в механизмах повышения неспецифической резистентности организма к экстремальным факторам среды.
Впервые показано, что введение гесперидина и флавицина увеличивает печеночный кровоток в условиях нормы. Впервые проведено сравнительное изучение корригирующего влияния флавоноидов на органный кровоток в условиях эндотелиальной дисфункции, очевидно связанное с активацией eNOS и повышением продукции NO.
Методом ЭПР показано повышение под влиянием флавоноидов содержания NO в норме, и его снижение в условиях индукции окислительного стресса введением СС14, что свидетельствует об их модулирующем влиянии на продукцию NO.
Впервые установлено, что СЭ из Viciaabbreviata, содержащий 5,12 - 5,67% флавицина, обладает более эффективным гепатопротекторным действием, чем препарат сравнения карсил, и изучен механизм действия СЭ при профилактическом и лечебном применении, который связан с преодолением окислительного стресса за счет поддержания функционирования эндогенной системы АОЗ, нормализации энергопродукции и процессов детоксикации, торможением процесса фиброгенеза при хронической патологии, восстановлением желчеобразовательной функции печени.
Впервые показано, что в ходе хронической алкоголизации происходит усиление адаптационно-защитных механизмов в виде повышения активности ферментов NADPH-GSH-зависимой системы, что значительно более выражено при лечебном применении СЭ из Viciaabbreviate.
На основании полученных результатов выявлено в разной степени выраженное влияние флавоноидов на патологические синдромы, патогенетические механизмы поражения гепатоцитов: ПОЛ, систему АОЗ, детоксикации и энергообразования, кровоснабжение печени, эндотелиальную дисфункцию. Такие данные позволяют разработать рекомендации по дифференцированному применению флавоноидов, как гепатопротекторов, при определенном характере течения заболевания печени. Сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосметина, которая условно названа флавицином, может быть рекомендована для дальнейшей разработки в качестве лекарственного средства для лечения поражений печени. СЭ из V. abbreviata, оказывающий выраженное гепатозащитное действие при острых и хронических токсических поражениях печени, превосходящее карсил, а также препятствующий развитию фиброза и стимулирующий секрецию желчи, может быть использован для создания лекарственного препарата.