Изучение обменных свойств мягких контактных линз по отношению к ципрофлоксацину (стр. 3 из 12)

Различен и механизм действия фторхинолонов. Соединения этого класса обладают способностью проникать через клеточные мембраны и селективно воздействовать на размножение бактерий путем ингибирования бактериальной ДНК-топоизомеразы II (ДНК-гиразы) – фермента, отвечающего за разрыв и восстановление суперскрученной спирали ДНК. Согласно современным представлениям, молекулы хинолона связываются с ДНК, образуя сложный комплекс из четырех молекул фторхинолона, двойной спирали ДНК- и ДНК-гиразы [6]. Образование такого комплекса происходит в тот момент, когда гираза осуществляет разрезание обеих цепей ДНК. Тем самым нарушается процесс размножения бактерий. Следует отметить, что механизм действия фторхинолонов принципиально отличается от механизмов действия других групп бактериальных препаратов: пенициллинов, цефалоспоринов, аминогликозидов, сульфамидов, что особенно важно для лечения инфекционных заболеваний, вызванных резистентными к этим препаратам штаммами бактерий [8].

2.4.2 Механизм действия фторхинолонов

Все фторхинолоны действуют бактерицидно благодаря ингибированию ферментов класса топоизомераз – ДНК-гиразы (топоизомеразы II) и топоизомеразы IV [16].

Эти ферменты выполняют строго определенные функции в процессе формирования пространственной структуры молекулы ДНК при ее репликации: ДНК-гираза катализирует расплетение (отрицательиую суперспирализацию) нитей ДНК, а топоизомераза IV участвует в разъединении (декатенации) ковалентно-замкнутых кольцевых молекул ДНК. Ингибированне этих ферментов нарушает процессы роста и деления бактериальной клетки, что приводит к ее гибели [23].

Основной мишеныо в грамположительных микроорганизмах преимущественно является топоизомераза IV, а в грамотрицательных – ДНК-гираза [6].

Механизмы резистентности

Развитие резистентности связано с мутациями в генах gyrAи gyrB(кодируют ДНК-гиразу), раrС (grlA) и _are (grlB) – кодируют топоизомеразу IV, а также вгене norА (кодирует мембранные белки, которые участвуют в активном выбросе – эффлюксе – фторхинолонов из клетки). Высокий уровень резистентности возникает вследствие сочетания этих механизмов [7].

Мутации,возникающие в генах gyrA, gyrB, раrС и раrЕ, достаточно значительно влияют на активность фторхинолонов I, II, III поколений, а на активность моксифлоксацина – фторхинолона IV поколения – меньше. Например, мутации у S. Aureusвгенах, кодирующих топоизомеразы,меньше снижают активность моксифлоксацина, чем ципрофлоксацина, офлоксацина, левофлоксацина, спарфлоксацина [8].

У Escherichiacoliдвойнаямутация гена gyrAприводит к снижению IC¹₅₀ норфлоксацниа, ципрофлоксацина и спарфлоксацина по сравнению с таковой у немутировавшего типа более чем в 500 раз, в то время как для моксифлоксацина этот показатель не превышает 12 раз [5].

Эффлюкс (мутация в гене nor А) значительно меньше влияет на активность гидрофобных препаратов, таких, как моксифлоксацин, по сравнению с таковой у гидрофильных препаратов, например у ципрофлоксацина.

При применении моксифлоксацинавероятность развития резистентности у грамположительных микроорганизмов, возможно, ниже, чем при применениидругих фторхинолонов, что связано с его высоким сродствомкак к топоизомеразе IV, так и к ДНК-гиразе [6].

2.4.3 Применение фторхинолонов и связанные с этим проблемы

Фторхинолоны хорошо сочетаются с пенициллинами и аминогликозидами. Допустимо совместное применение с макролидами и тетрациклинами, хотя может проявляться ослабление их действия [6].

Не рекомендуется назначать фторхинолоны с нестероидными противовоспалительными средствами и нельзя сочетать с метилксантинами – кофеином и, особенно, теофиллином, т.к. возможны судороги [8].

Из других побочных явлений – раздражающее воздействие на желудочно-кишечный тракт (при пероральном назначении). Возможно негативное влияние на печень, ЦНС, появление кожно-аллергических сыпей, но у небольшого количества пациентов [7]. В целом фторхинолоны малотоксичные соединения. Применяются при многих бактериальных инфекциях и в хирургической практике.

На сегодняшний день синтезировано достаточное количество фторхинолонов, таких как: ципрофлоксацин, эноксацин, норфлоксацин, офлоксацин, ломефлоксацин, флероксацин, перфлоксацин, энрофлоксацин и др. Зарубежные фирмы выпускают фторхинолоны специально для ветеринарии в форме премиксов и растворов с 5 и 10% содержанием АДВ [17].

Например, энрофлоксацин (энроксил) активен в отношении грамположительной и грамотрицательной микрофлоры, в т.ч. микоплазм. Препарат малотоксичен, LD50 для белых крыс 5000 мг/кг. Собаки переносят дозы в 40 раз превышающие терапевтические. После введения терапевтической дозы препарат циркулирует в организме в лечебных концентрациях уже через 0,5 ч, сохраняясь на этом уровне более 24 ч [9].

Назначают телятам, поросятам, цыплятам, плотоядным при инфекциях дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, мочевыводящих путей, кожи в форме инъекций (внутримышечно) и в форме порошка (с водой) в дозах 2,5-5 мг/кг, однократно. Выпускается в форме 5% растворов и 5% порошка [9].

В результате неправильного применения, увеличения лечебной дозы, а так же несоблюдения сроков ожидания, остаточные количества фторхинолонов могут попадать в молоко, мясо, яйца, предназначенные в пищу людям. Это является причиной развития дисбактериозов, пищевых аллергий, повышения устойчивости патогенных микроорганизмов [10]. Кроме того, наличие следовых количеств фторхинолонов в продуктах питания является причиной развития функциональных нарушений со стороны центральной нервной системы, особенно у детей, что проявляется судорогами, расстройствами слуха и зрения [9].

Согласно европейскому законодательству (Директива ЕС 2377/90) установлены максимально допустимые уровни фторхинолонов в продукции животного происхождения для 2-х соединений этой группы: энрофлоксацина и ципрофлоксацина [10].

Согласно Постановлению Минсельхозпрода РБ от 16.12.2005 г. № 78 об утверждении «Правил осуществления контроля за содержанием вредных веществ и их остатков в живых животных и продукции животного происхождения при экспорте их в страны Европейского Союза» энрофлоксацин включен в перечень фармакологических веществ, на который установлен максимально допустимый уровень остатков [10].

2.5 Методы определения ципрофлоксацина – антибиотика фторхинолонового ряда

2.5.1 Определение содержания ципрофлоксацина методом ВЭЖХ

Ципрофлоксацин методом ВЭЖХ определяют в таблетках и глазных каплях. Данным методом можно определить 90 - 110% активного вещества от заявленного количества. Разделение проводят на колонке SS 4,0 мм

250 мм, C18 (L₁) в системе фосфорная кислота, доведенная до pH = 3 триэтиламином – вода – ацетонитрил при скорости потока 1,5 мл/мин. Детектирование - в УФ свете при длине волны 278 нм [11].

2.5.2 Определение ципрофлоксацина методом ТСХ

Разделение проводят на пластинках, покрытых слоем смеси силикагеля (0,25 мм). GF 254 (20

20 см) в присутствии стандарта. Подвижная фаза: метиленхлорид : метанол : аммония гидроксид : ацетонитрил в соотношении 4 : 4 : 2 : 1. детектирование проводится в УФ свете при 254 и 366 нм. Основное пятно на хроматограмме испытуемого раствора по величине R_f и интенсивности должно соответствовать основному пятну на хроматограмме стандартного раствора [11].

2.5.3 Определение антибиотиков фторхинолонового ряда с помощью тест – систем RIDASCREEN Enro/Cipro

Тест-система RIDASCREEN Enro/Cipro предназначена для количественного определения ципрофлоксацина и энрофлоксацина в продуктах животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа.

Вид продукта	Предел обнаружения	Извлекаемость, %
Молоко	1 мкг/кг	84%
Мясо	10 мкг/кг	87%
Рыба	10 мкг/кг	85%

Чувствительность: данофлоксацин 80-85 %, норфлоксацин 12-15 % [10].

2.5.4 Определение содержания ципрофлоксацина спектрофотометрическим методом

Лекарственные вещества группы фторхинолонов имеют характерные УФ-спектры, что обусловлено наличием сложной сопряженной системы в их структуре. Ввиду высоких значений удельного показателя поглощения оптимальная концентрация испытуемого раствора составляет 5 мкг/мл. Метод УФ-спектрофотометрии можно применять для установления подлинности лекарственных средств группы фторхинолонов в виде субстанций и в лекарственной форме «таблетки».

Спектры получают в интервале длин волн от 200 до 450 нм. В качестве растворов сравнения можно использовать воду, 0,01 М HCl, 0,01 М раствор NaOH, 96% этанол [12].

Спектрофотометрическое определение ципрофлоксацина используется для контроля его содержания в препаратах, в частности, в таблетках [13] и глазных каплях [14]. Определение проводят при длине волны (275

2) нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной. Поглощение испытуемого раствора сравнивают с поглощением стандартного раствора, приготовленного растворением точной навески ципрофлоксацина в 0,1 М растворе соляной кислоты.