Кроме того, было проведено небольшое биофармацев-тическое исследование мазей методами диализа через целлофановую мембрану и диффузии в ангар. Скорость высвобождения контролировали качественной реакцией по степени окраски, которую давали фенольные соединения с раствором хлорида окисного железа.
Результаты исследований и их обсуждение
Проведённый анализ специальной и научно-популярной литературы позволяет говорить о том, что фармакологическая активность лекарственных препаратов и арники горной и календулы лекарственной обусловлена наличием таких групп природных веществ, как тритерпеновые и стероидные сапонины, каротиноиды, флавоноиды, кумарины, фенолкарбоновые кислоты и др.
С помощью качественных реакций подтверждено наличие таких веществ: флавоноиды и каротиноиды – обнаружены во всех исследуемых препаратах; сапонины подтверждены во всех объектах исследования, за исключением дилюции х4. Для более чётких результатов результатов все объекты, начиная со второго десятичного разведения, рекомендуется сгущать при помощи упаривания на водяной бане.
Среди используемых методов хроматографического обнаружения соединений фенольного характера наиболее чёткую картину разделения даёт метод восходящей хроматографии на бумаге в системах Аи Б – так обнаружено от 6 до 10 веществ в тинктуреArnica х1 и от 8 до 10 – в тинктуре Calendula х1. Эта группа биологически активных веществ достоверно проявлялась в гомеопатических препаратах до второго десятичного разведения, что позволяет говорить о присутствии хорогеновой кислоты, скополетина, эскулетина и изокверцитрина в препаратах Calendula и астрагалина, изокверцитрина, скополетина и хорогеновой кислоты – в препаратах Arnica; в более высоких разведениях результаты были недостаточно чёткими для определения значений R1.
Круговое хроматографирование фенольных соединений в системе 15% уксусная кислота начительно сокращает время исследования (до 25 минут), но при этом не даёт полного разделения фенольных соединений – в тинктурах х1 обнаруживаось от 3 до 5 пятен ( что объясняется небольшой длиной пробега), и сопоставление этих данных значениями для образцов не представляось возможным. Тем не менее проявление в УФ – свете интенсивно окрашенных в жёлтый, бирюзовый, фиолетовый и бурый цвета пятен с определённым расстоянием от точки старта может считаться подтверждением наличия широкого спектра фловоноидов, кумаринов и фенолкарбоновых кислот.
Наиболее чёткое разделение аминокислотного состава происходило при хроматографировании методом восходящей хроматографии в системе растворителей А и методом ТСХ в системе растворителей Д.
По значениям R1и окраске пятен предварительно обнаружены орнитин, аспарагин, аланин, триптофан, - фенилаланин, цистин, метионин – в препаратах Arnica и гистин, орнитин, аланин, норвалин, - фенилаанин – в препаратах Calendula.
Методом хроматографии в тонком слое сорбента обнаружены каротиноиды ( в виде сине-зелёных пятен) – от 11 веществ в баисных препаратах до 4 веществ в разведении х4 и сапонины ( в виде тёмно-зелёных пятен ) – от 6 веществ в тинктурах х1 до 4 веществ в дилюции х4.
Сравнение биофарамацевтических показателей для 10% мази на вазелин-ланолиновой основе и таких же мазей на полиэтиленоксидной и эмульсионной основах показывает, что при использовании гидрофильной мазевой основы высвобождение лекарственного вещества выше. Поэтому возможно уменьшение концентрации настойки в мази в случае применения полиэтиленоксидной основы, а также расширение ассортимента основ в сравнении с используемым в аптеках на данный момент.
Оценка результатов количественного определения, растворения и распадаемости тестовых образцов таблеток парацетамола.
В рамках программы постаккредитационного надзора за работой лабораторий в системе Государственной инспекции по контролю качества лекарственных средств МЗ Украины (далее ГИ МЗ) в 2001-2003 гг было проведено три раунда программы профессиональноготестирования лабораторий (ППТ) “Фарма –тест”. С учётом опыта проведения первых двух раундов были сформулированы методологические подходы по организации ППТ в системе ГИ МЗ, которые были учтены при подготовке третьего и четвёртого раундов.
В качестве одного из тестовых образцов (ТО) для участников 4-го раунда ППТ ГИ МЗ, проведённого в феврале-мае 2004г., использовали аттестованные образцы двух промышленных серий таблеток парацетамола по 325 мг.
Выбор в качестве ТО для 4-го раунда ППТ таблеток парацетамола был обусловлен несколькими причинами. Во 2 и 3 раундах ППТ многими лабораториями-участницами были получены неудоветворительные результаты определения в ТО салициловой кислоты при использовании метода спектрофотометрии. Поэтому представлялось интересным сравнить результаты определения этим же методом парацетамола (основного вещества) с даными спектрофотометрических измерений ТО с кислыми свойствами в предыдущих раундах. Кроме того, таблетки парацетамола являются одним из наиболее популярных препаратов на фармацевтическом рынке Украины, содержат небоьшое количество вспомогатеьных веществ.
В чеивёртом раунде ППТ ГИ МЗ приняли участие 60 лабораторий. Среди 49 украинских участников было 29 лабораторий территориальных государственных инспекций, 7 лабораторий, сотрудничающих с ГИ МЗ, и 13 лабораторий украинских фармацевтических предприятий. Кроме того, в 4-м раунде ППТ приняли участие 11 арубежных лабораторий по контролю лекарственных средств и стран СНГ (Армении, Беларуси, Молдовы, Киргизии, Таджикистана, 4 из Каахстана) и Западной Европы (Голандии и Португалии).
1. Результатыопределения содержания парацетамола в ТО таблеток парацетамола методом спектрофотометрии.
Поскольку различие начений средней массы таблеток, полученных разными участниками, превышало или было близким к предложенному интервалу допустимого отклонения от приписного значения содержания парацетамола в таблетках, оценку результатов определения содержания парацетамола в ТО таблеток проводили в перерасчёте на 1 г таблеточной массы.
Приписное значение содержания парацетамола в тестовых образцах таблеток парацетамола 325 мг составляло:
· для табеток с. 21203 производства ООО “Фармак” – 0,9198 г/г;
· для таблеток с. 551203 производства ООО “Концерн “Стирол” – 0,9194 г/г
Учитывая сложность пробоподготовки растворов ТО и ФСО (двойное разведение) и уровень спектрофотометров большинства участников, организаторы приняли решение расширить пределы допустимого отклонения результатов участников до значения +3,2% от приписного значения.
Поэтому оценку результатов, полученных лабораториями участницами при проведении данного определения, осуществляли следующим образом:
· результаты, для которых отконения от приписного значения по абсолютному значению были меньше или равнялись 1,6% считались удовлетворительными;
· результаты, для которых отконения от прописного значения по абсолютному значению были больше 1,6%, но меньше 3,2% считались сомнительными;
· резуьтаты, для которых отконения по абсолютному значению были больше или равнялись 3,2% считались неудовлетворительными.
Полученные результаты всех лабораторий-участниц приведены на рисунках 1,2.
Общие резуьтаты опредеения содержания парацетамола в ТО таблеток приведены в таблице 1.
Удовлетворительные результаты получили 21 лабораториии (35,6%) по ТО таблеток парацетамола 325 мг с. 21203 производства ООО “Фармак” и 13 лабораторий (22,4%) по ТО таблеток парацетамола с. 551203 производства ООО “Концерн”Стирол”. Сомнительные результаты получили 31 лаборатория (52,5%) по ТО таблеток парацетамола 325 мг с. 21203 производства ООО “Фармак” и 39 лабораторий (67,2%) по ТО таблеток парацетамола с. 551203 проиводства ООО “Концерн Стирол”. Результаты 7-ми (11,9%) и 6-ти (10,3%) лабораторий по ТО табеток парацетамола производства ООО “Фамак” и ООО “Концерн “Стирол”, соответственно, были неудовлетворительными.
Анализ отчётов участников показал, что основными источниками ошибок при определении содержания парацетамола в ТО таблеток могли быть:
1.Ошибки при взятии навесок, разведения и приготовления растворов. Методика, которая использовалась, предусматривала двойное разведение обраца, так и раствора стандарта, для чего были необходимы для приготовления каждого раствора три мерных колбы и две пипетки. Поэтому ненадлежащее качество мерной посуды, точность отбора аликвоты и доведения до метки могло вносить существенный вклад в общую неопределённость анализа.
2. Ошибка прибора при установлении значения оптической плотности.
3.Приборы большинства лабораторий которые принимали участие в 4-м раунде ППТ, не позволяли проводить измерения оптической плотности с надлежащей точностью, что могло привести к значительной погрешности при определении.
4. У 6,9% участников кюветная раница превышала рекомендованную ЕФ величину 0,005. Если её не учитывать при расчётах, то возможна погрешность определения как удельного покаателя поглощения, так и конечного результата.
5. Большое коичество заниженных реультатов может свидетеьствовать о надлежащем экстрагировании действующего вещества из таблеточной массы, причиной которого может быть недостаточно тщательное перемешивание, несоблюдение времени перемешивания и др.
2. Результаты определения процента высвобождения парацетамола из ТО таблеток парацетамола при провдении теста “Растворение” для таблеток парацетамола
Отчёты с реультатами определения высвобождения парацетамола при проведении теста “Растворение” для ТО таблеток парацетамола 325 мг с. 21203 проиводства ООО “Фармак” и с. 551203 производства ООО “Концерн “Стирол” были получены от 26 лабораторий-участниц.