Перед началом работы в баллончике-ручке должно находиться не менее 3/4 объема избранного реактива. Проводится обмывание и обработка вымени.
При отборе проб из четвертей вымени в каждой лунке должны находиться от 2 до 5 г молока. Затем легким нажатием на стенку баллончика из капиллярного устройства выбрасывается 2-3 капли диагностикума, поступающего синхронно во все четыре лунки. Учет реакции любого индикатора производится согласно инструкции к соответствующему диагностикуму по цветовой гамме сдвига рН.
Проба с димастином
Для исследования готовят 5% раствор димастина на дистиллированной или прокипяченной теплой воде. В каждое углубление пластинки из соответствующей четверти вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл димастина из бутылки с пипеткой-автоматом. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой лунке в течение 10-15 секунд.
При использовании пластинки МКП-2 палочка не требуется, смешивание молока с реактивом производится путем горизонтального вращения пластинки. Реакция учитывается по густоте желе и цвету.
Учет реакции по вязкости желе:
- отрицательная реакция — однородная жидкость (-);
- сомнительная реакция - следы образования желе(±);
-положительная реакция — ясно видимый сгусток (от слабого до плотного), который можно выбросить из луночки палочкой (+).
На пластинке МКП-2 при:
- отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь.
- Сомнительная реакция (±) - во время вращения пластинки на дне лунки заметны тонкие хлопья без образования сгустка.
- Положительная реакция (+) - отчетливое появление слабого или быстрообразующегося плотного сгустка.
Проба с 10% раствором мастидина. Для исследования коров на мастит по молоку из общего удоя применяют 10% раствор мастидина.
Техника постановки пробы на пластинках МКП-1 и МКП-2 и учет реакции по образованию желе проводят так же, как и при постановке с димастином.
Для определения пораженной четверти вымени от животных давших, положительную или сомнительную реакции с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 5% или 2% растворами мастидина или по пробе отстаивания.
Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора прибавляют 400 мл дистиллированной воды или прокипяченной теплой воды.
Постановка пробы и учет реакции проводят по образованию сгустка и изменению цвета, как при исследовании молока с 10% раствором мастидина.
Образование сгустка является основным диагностическим признаком при исследовании молока по димастиновой и мастидиновой пробам, а изменение цвета служит ориентирующим признаком.
Показания реакций с димастином или мастидином не имеют самостоятельного значения для постановки диагноза на мастит, они в обязательном порядке должны подтвердиться пробой отстаивания.
Проба отстаивания
Ее проводят путем отбора секрета из четвертей вымени, которые реагировали положительно на димастиновый или мастидиновый тесты.
В конце доения в пробирку надаивают 10 мл молока и ставят ее на 16-18 часов в холодильник, чтобы оно не прокисло. На второй день учитывают результат. При этом обращают внимание на наличие осадка, количество и характер сливок и цвет молока.
Молоко здоровых коров имеет белый или слегка синеватый оттенок, осадка не образует. Молоко от больных маститом коров водянистое, сливки становятся тягучие, слизистые, хлопьевидные.
Основным диагностическим признаком при пробе отстаивания является осадок. Образование его в отстоявшемся молоке или наличие хлопьевидных, тягучих слизистых сливок указывает на положительную реакцию (Рис. 12). Такую корову считают больной маститом, ее изолируют от общего стада и подвергают лечению. Молоко из пораженной маститом доли выдаивают руками, собирают отдельно и уничтожают. Молоко из непораженных четвертей в каждом отдельном случае бракуют в соответствии с наставлением по применению того или иного метода лечения.
Проба Тромсдорфа — один из давно известных непрямых методов обнаружения повышенного количества клеток в молоке. Сущность ее заключается в осаждении повышенного содержания лейкоцитов и других клеточных элементов при центрифугировании 10 мл молока. Используют делительные пробирки с суженным нижним концом. После центрифугирования судят по объему осадка о наличии или отсутствии заболевания вымени.
В процессе дальнейших исследований было замечено, что при центрифугировании сырого молока не все соматические клетки выпадают в осадок, какая-то часть их остается в слое сливок. Поэтому при нагревании молока перед центрифугированием до температуры 60— 70 °С объем осадка увеличивается.
Проба Уайтсайда — довольно распространенный диагностический тест. Для постановки пробы используют 4 %-ный раствор едкого натра, который смешивают с молоком в соотношении 1:5. При наличии воспалительных процессов в вымени (положительная реакция) образуется густая тягучая масса с хлопьями. Для упрощения реакции и ускорения исследований обычно берут 0,1 мл щелочи и 0,5 мл молока.
Многие исследователи признают пробу Уайтсайда достаточно чувствительной и пригодной для выявления различных состояний вымени, при помощи которой можно обнаружить до 80 % и более коров, подозреваемых в заболевании маститом. При изучении механизма действия пробы Уайтсайда оказалось, что степень реакции ее зависит не только от количества лейкоцитов, но и содержания молочного жира и солей кальция в молоке.
В настоящее время более широко применяют быстрые маститные тесты из поверхностно-активных веществ, которые, по нашим и другим многочисленным данным, дают хорошие результаты при диагностике мастита, отражая количество соматических клеток в молоке. Одним из таких тестов является калифорнийская маститная проба (КМТ).
Действующим началом в ней являются поверхностно-активные вещества типа алкиларилсульфатов и алкиларилсульфонатов. Данная проба заключается в смешивании равных объемов молока и раствора реактива (3—5 %-ного). Ставят ее на специальных пластмассовых пластинках с четырьмя цилиндрическими углублениями. В углубления надаивают из каждой четверти вымени по 2 мл молока и добавляют такое же количество реактива из пластмассовой шприц-бутылки. Молоко с реактивом перемешивают круговыми движениями пластинки. При повышенном содержании клеток в молоке через 5—10 с образуется желеобразная масса (густота последней зависит от количества клеток). Реактив включает индикатор бромкрезоловый пурпурный, который одновременно показывает изменения рН молока. Положительная реакция по КМТ разграничивается на три степени: слабо положительная, четко положительная и сильно положительная.
По данным авторов КМТ и других исследователей, которые проверяли данный тест, результаты пробы соответствуют содержанию клеток в молоке.
Механизм действия калифорнийской маститной пробы заключается в том, что в реакцию с поверхностно-активным веществом вступают ядра клеток. При этом оболочка ядер разрушается, дезоксирибонуклеиновая кислота, содержащаяся в них, освобождается и придает молоку, смешанному с реактивом, вязкую консистенцию.
Определение щелочности молока с помощью индикаторов. Щелочность молока устанавливают путем добавления в него индикаторов, изменяющих окраску при рН 6,0—7,0. Нормальное молоко имеет рН близкую 6,5— 6,7, с отклонениями в пределах 6,3—6,9. Реакция молока при клинических формах воспаления вымени, в том числе и скрытых маститах, почти всегда щелочная и очень редко кислая.
Проба с индикаторными карточками. На карточке имеется четыре кружка, пропитанные обычно бромтимоловым синим. Для диагностики маститов на пятно индикаторной карточки выдаивают из каждого соска 1—2 капли молока и наблюдают за изменением их окраски в течение 10—15 секунд. Если кружок окрашивается в желтый или желто-зеленый цвет, молоко считается нормальным, если в сине-зеленый, зеленый или желто-зеленый, то можно предполагать наличие мастита.
Выявление сгустков казеина в молоке.В условиях производства при доении животных выявить хлопья и сгустки казеина в молоке очень трудно. Заметить их можно в тонком слое молока на дне чашки на стенке пробирки после взбалтывания, при процеживании молока через густое темное металлическое сито или марлю, окрашенную в темный цвет.
На крупных животноводческих фермах при обследовании большого количества животных удобнее пользоваться специальной кружкой или банкой, в съемную крышку которой вставлено темное сито. В такие кружки сдаивают первые струйки молока, контролируя тем самым состояние молочных желез.
Каталазная проба. В градуированную центрифужную пробирку наливают 9 мл молока и 1 мл 3%-ного раствора перекиси водорода, закрывают резиновой пробкой со вставленной в нее изогнутой стеклянной трубочкой, переворачивают вверх дном и оставляют на три часа при комнатной температуре. После этого отмечают количество выделившегося кислорода. При выделении 4 см3 и более кислорода реакцию считают положительной, от 3 до 4 — сомнительной, менее 3 см3— отрицательной.
Однако количество каталазы в молоке увеличивается не только при воспалении ткани вымени, но и в молоке здоровых коров (в первые 5 дней после отела, в период запуска и даже в середине лактационного периода). Каталазная проба становится резко положительной при наличии в молоке эритроцитов, что в большинстве случаев не является признаком мастита. Наконец, иногда каталазная проба дает положительную реакцию без заметного увеличения количества клеток в молоке.
Таким образом, по объему выделившегося кислорода трудно судить о количестве клеток в 1 мл молока и наличии лейкоцитов или эритроцитов. Методика каталазной пробы сложна, требует много времени, а поэтому неприменима в практических условиях.
Фёльген-проба на ДНК.