В пробирку к 2 мл молока добавляют 2 мл 2н HCl и ставят в водяную баню при температуре 60° на 24 минуты. Затем добавляют 4 мл реактива Шиффа и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Появление интенсивно сиреневого цвета указывает на наличие ДНК (положительная реакция).
Титрация лизоцима М. Отсутствие лизоцима М не является прямым признаком воспаления молочной железы, но при наличии мастита лизоцим М в основном отсутствует. Поэтому титрация лизоцима М в молоке отдельных долей вымени служит дополнительным методом диагностики маститов.
Молоко исследуют на наличие и концентрацию лизоцима М путем чашечной титрации на агаре с луночками (по В. И. Мутовину).
В качестве питательной среды берут мясопептонный агар (МПА), рН которого 7,2. Наливают его в чашки Петри слоем 2,5—-3 мм. Затем среду подсушивают, выдерживая при температуре 2—6° в течение 18—24 часов, после чего используют для титрации в течение пяти дней при условии хранения в холодильнике.
Для получения фона при титрации лизоцима М используют культуру золотистого стафилококка штамм ВМ (ветка молочная). Получают его во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии.
Суточную бульонную культуру этого штамма разводят физиологическим раствором 1 : 10 000 и вносят по 0,25 мл в каждую чашку для титрации, тщательно распределяя по всей поверхности среды. После нанесения фона чашки оставляют при комнатной температуре на 30—40 минут, затем в агаровых пластинках стерильной тонкостенной стальной трубкой диаметром 10 мм делают луночки (кольца), В одной чашке Петри можно разместить 4—7 луночек. В каждую луночку вносят по 2 капли испытуемого молока, выдерживают 18 часов при комнатной температуре (22—23°) и 5—6 часов в термостате при 37°, а затем учитывают результаты титрации молока.
Обычный рост культуры фона непосредственно у луночки, в которую внесен испытуемый материал, обозначают знаком О, что означает отсутствие в исследуемом материале титруемых количеств лизоцима М.
Если рост культуры около луночек значительно слабее густоты культуры фона, находящейся в удалении от луночек, то такой результат обозначают термином ЗУР (зона угнетенного роста). При наличии зоны угнетенного роста диаметром более 14 мм перед знаком ЗУР отмечают величину диаметра зоны угнетенного роста. Если ЗУР имеет диаметр 14 мм и менее, то результат обозначают термином СЛ (следы).
При наличии в испытуемом молоке достаточных концентраций лизоцимов вокруг соответствующих луночек видны кольцеобразные зоны задержки роста (ЗЗР), свободные от колоний тесткультуры. Степень активности лизоцима М учитывают по величине диаметра (мм) кольца зоны задержки роста.
По данным первичного учета судят о бактериостатической активности лизоцима М. Для получения данных о бактерицидных свойствах лизоцима чашки для титрации после первичного учета вновь помещают в термостат при 37° до утра следующего дня, после чего учитывают бактерицидное действие лизоцима по величине диаметра оставшихся зон задержки роста.
4. Специфические маститы
Нокардиозный мастит
Остро протекающее воспаление молочной железы, при котором возможна гибель животного через 7-10 дней от начала заболевания.
Болеют коровы через 1-2 недели после отела. Пусковым механизмом при этом является механическое повреждение паренхимы доильной аппаратурой или интрацистернальным введением молочных катетеров. Заражение происходит через травмированные ткани. Возможен и пероральный путь заражения.
Возбудителем болезни является нитевидный, длиной 80 мкм грамположительный микроорганизм Nocardiaasteroides оранжевого или коричневого цвета, широко распространенный во внешней среде. Клинические признаки заболевания имеют сходство с маститами, вызываемыми Carynebacterinumpyogenes или возбудителем туберкулеза. Секрет пораженной доли розового цвета с комочками гноя; четверть вымени увеличена, горячая, плотная, болезненная; надвыменные лимфоузлы увеличены. Уточняют диагноз по образованию пигмента при посеве осадка молока на среду Петраньяни.
Некротический мастит
Некротический мастит - острый септический мастит коров, овец и коз с молниеносным течением и последующим развитием гангрены вымени.
В этиологическом отношении принято считать, что заболевание вызывается возбудителями Clostridiumperfringenes, Klebsiellaaerogenes, Klebsiellapneumoniae, Klebsiellaozaenae, Sferophorus, Aerobacteraerogenes, Escherichiacoli, Stafylococcusaureusв синергизме с патогенными стрептококками. У овец и коз некротический мастит обуславливается возбудителями некробациллеза и пиогенными кокковыми формами микроорганизмов.
В месте локализации возбудителей нарушается внутриклеточный белковый обмен; накапливающиеся токсические продукты вызывают гнилостный распад и некроз тканей с выделением пузырьков газа с ихорозным запахом. Воспалительный процесс распространяется по лимфатическим и кровеносным сосудам, разнося токсические продукты по всему организму. Прогноз зависит от характера течения процесса: с развитием септицемии он неблагоприятный, при инкапсуляции и купировании процесса - осторожный.
После родов идет задержание последа до 24-48 часов. Застойный отек разлитого характера охватывает все четверти и частично нижнюю стенку живота. Молозиво в первые сутки внешне не изменено, содержание иммуноглобулинов высокое - до 100 мг/мл. На пораженной части или четверти вымени проявляется сильная гиперемия кожи.
На вторые сутки появляются сгустки казеина в одной или более четвертях, первоначально без признаков гнилостного разложения тканей. К концу вторых суток развивается катарально-гнойный мастит пораженной доли, а на коже образуется мокнущая экзема с отслоением эпидермиса в виде тонкой пленки темно-синего цвета.
Пальпацией отмечается сильная болезненность вымени и крепитация стромы; из сосковой цистерны выдаивается небольшое количество серозной жидкости коричневатого оттенка с неприятным запахом. Корова стоит на ногах, но хромает на конечность со стороны поражения,
Местная температура повышается, надвыменные лимфоузлы увеличены и болезненны. Некротическая ткань разрастается как в подкожной части, так и с поверхности. В отдельных участках молочной железы появляется активное воспаление в форме горячего абсцесса, в других случаях становится, наоборот, холодным; на разрезе железистая ткань красноватая, коричневая или темно-синяя с образованием газовых пузырьков, наличие которых заставляет животное приподнимать конечность. Вокруг гиперемированной зоны вены и лимфатические сосуды тромбированы; молочные ходы содержат массы фибрина, резко снижается резистентность организма, и в результате на гистосрезах в некротических участках и кровеносных сосудах находят колибациллезные грамположительные формы, которые снижают активность лактозы и способствуют образованию кислот и токсинов в очагах некроза. Если животное не погибает от септицемии, то некротические участки инкапсулируются. Наличие смешанной микрофлоры способствует развитию гангрены, при которой терапевтические процедуры бесполезны.
Микоплазменный мастит
Воспаление вымени коров и телок в зависимости от вида и вирулентности микоплазм протекает субклинически, бессимптомно, без заметного увеличения клеточных элементов в молоке или клинически выражено. Возбудителями микоплазменных маститов являются Mycoplasmaagalactiaebovis, Mycoplasmabovimastitidis, Mycoplasmabovigenitalium, Mycoplasmacanadience.
Наиболее тяжело протекает мастит, где возбудителем является Mycoplasmaagalactiae. Острая форма заболевания сопровождается отеком, уплотнением и болезненностью пораженной доли молочной железы. Секрет из молочных ходов становится водянистым с примесью небольшого количества хлопьев казеина коричневатого цвета. Количество клеток в 1 мл достигает 10 млн. и более; имеет место эозинофилия. Воспалительный процесс может переходить на здоровую четверть вымени. Часть микоплазменных маститов протекает бесследно, и секреция молока восстанавливается, если патология возникла в начале лактации.
Ящурный мастит
Ящурные маститы наблюдаются у 60% ящурных коров и протекают по типу серозного, геморрагического, фибринозного или гнойно-катарального мастита. Суточный удой снижается до 75% прежде всего из-за болезненности вымени. На гиперемированной коже пораженных четвертей вблизи сосков и на сосках появляются афты (ящурные пузырьки). При доении они лопаются, образуя эрозии и язвочки, нарушается рефлекс молокоотдачи, и создаются предпосылки для возникновения мастита. Воспалительный процесс распространяется с кожи на слизистую оболочку соскового канала и переходит по молочным ходам на паренхиму вымени вблизи железистых камер. Особенно опасны для развития мастита язвочки верхушки соска. Не исключается лимфогенный и гематогенный пути распространения инфекционного начала.
Секрет из пораженной доли вымени изменяет окраску на красноватую, желтоватую, зеленоватую, с хлопьями казеина, фибрина или гноя. После переболевания ящурным маститом прежняя молочная продуктивность не восстанавливается.
Микозный мастит
Широкое применение антибиотиков для лечения различных заболеваний животных способствует развитию колоний и друз дрожжевых грибов преимущественно рода Кандида – Candidaalbicans, Candidatropicalis, Candidacrusei.
Воспалительный процесс вымени приобретает вялотекущую острую или хроническую формы, сопровождающиеся гиперемией участков кожного покрова железы и слизистых оболочек, болезненностью при пальпации пораженных молочных пакетов, некоторым увеличением в размерах надвыменных лимфатических узлов, появлением серозного экссудата и сгустков казеина при сдаивании. В последующем секреция прекращается, паренхима уплотняется и наступает атрофия пакетов молочной железы. Диагноз подтверждается наличием мицелия грибов в моче.
Актиномикозный мастит
Заболевание характеризуется образованием нерассасывающихся стойких абсцессов после внедрения в молочную железу лучистого гриба Actinomyces. Вскрытие абсцесса или его пункция выявляет наличие жидкой или слизистой гнойной массы серо-зеленого оттенка с желтыми сгустками друз лучистого грибка. Абсцессы плотно инкапсулированы утолщенным слоем соединительной ткани. Самопроизвольное вскрытие или расплавление длительно не заживающих очагов воспаления происходит внутри молочных протоков, в результате в секрете обнаруживают друзы, обрывки тканей, лейкоциты и десквамированные в просвет эпителиальные клетки.