Хиномициновые антибиотики — это пептидные лактоны с хи-ноксалиновым кольцом, отличающиеся друг от друга только своей N-метиламинокислотной долей. Шой подвергал хро-матографическому разделению соединения А, В, Во, С, D и Е методом круговой хроматографии на оксиде алюминия, применяя нижнюю фракцию смеси этилацетат—1,1,2,2-тетрахлор-этан—вода (3:1:3). Таким способом удалось разделить все компоненты, кроме В и Во. Хроматографирование проводили на флуоресцентном слое и рассматривали пластинки в УФ-свете.
Штудер и др. при определении строения энниатина В синтезировали ряд циклических пептидов с активностью антибиотиков. В смеси бензол—эфир—метанол (17:2: 1) на силикагеле энниатины А и В характеризуются Rf 0,39.
ПОЛИЕНОВЫЕ МАКРОЛИДНЫЕ АНТИБИОТИКИ
Икекава и др. разделили шесть полиенов на силикасиликагеле G, используя смесь н-бутанол—уксусная кислота—вода (3:1:1), и получили при этом следующие величины Rf. нистатин 0,18; пимарицин 0,34; унамицин А 0,36; амфотерицин А 0,33; пентамицин 0,67 и трихомицин 0,17. Бержи и Эбле разделили на силикагеле HF, забуференном смесью 0,2 М ди-гидрофосфат калия—0,2 М гидрофосфат натрия (1:1), элюи-руя пробу смесью метиленхлорид—мета«ол (17:3). Выделенные компоненты характеризуются следующими величинами Rf. I 0,8; II 0,7; III 0,6; IV 0,5. Охаб разделил на силикагеле трихомицин, фумагиллин, натамицин, нистатин, амфотерицин А и амфотерицин В. Лучшие результаты дают смеси этанол— аммиак—вода—диоксан (8:1:1:1) и н-бутанол—пиридин— вода (3:2: 1). Мартин и Мак-Даниел разделили комплекс кандигексина на силикагеле G на пять компонентов со следующими величинами Rf. А 0,26; В 0,29; D 0,36; Е 0,39 и F о',43. Комплекс кандидина удалось разделить на две фракции с Rf 0,27 (А) и 0,32 (В). Третий компонент с Rf 0,36, о наличии которого в сырых препаратах кандидина сообщили Боровский и др., в очищенных препаратах обнаружить не удалось. Элюирование проводилось нижней фракцией смеси хлороформ— метанол—20 %-ный гидроксид аммония (2:2:1). Количественное разделение достигается денситометрированием in situ кандигексина при 340 нм и кандидина при 360 нм.
РАЗЛИЧНЫЕ ПРИМЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ
Берд и Стевенс использовали ТСХ для выявления примесей в нитрофуразоне — синтетическом антибактериальном соединении. При хроматографировании на силикагеле G смесью бензол—ацетон Rf нитрофуразона составляет 0,23. Одна из примесей, 5-нитро-2-фуральдазин, перемещается с фронтом растворителя, Rj другой примеси равен 0,65.
Маер и Шафнер исследовали антибиотики методом ТСХ на силикагеле со смесью хлороформ—метанол—28 %-ный гидроксид аммония—вода (1:4:2:1), дополнив ТСХ при определении некоторых ацетилпроизводных хроматографированием на бумаге. В результате эти авторы показали, что в данный комплекс входит 16 антибиотиков. Вагман и др. выделили из этого комплекса четыре примесных компонента. Вильсон и др. осуществили хроматографическое разделение в этой же системе некоторых примесных компонентов.
Патулин, фурапираноновый антибиотик, выделенный из ряда грибов, был подвергнут хроматографическому анализу с применением большого числа растворителей. Скотт и Кеннеди разработали количественный метод обнаружения этого антибиотика в яблочном соке, основанный на установлении минимально определимой флуоресценции, когда слой силикагеля опрыскивают 0,5%-ным раствором 3-метил-2-бензотиазолингидразона и нагревают 15 мин при 130°С.
Фишер и Ригельман] разработали флуоресцентный метод определения in situ гризеофульвина и его 4'-спиртовых производных в плазме. Разделение проводили на силикагеле, содержавшем 6,7 % коллоидного оксида алюминия (бемит) (Du Pont); элюентом служила смесь безводных эфира и ацетона (3: 2). Антибиотики экстрагировали из плазмы эфиром. Каднер и др. использовали смесь силикагель G—нейтральный оксид алюминия с активностью I (30:2); после разделения соединения элюировали и измеряли интенсивность флуоресценции при 385 нм при длине возбуждающего излучения 365 нм.
Бержи и Эбле [92] разделили комплексы филипина на четыре фракции: филипин II, филипин III, филипин IV и комплекс филипина I; последняя фракия представляет собой смесь по крайней мере пяти компонентов. Разделение проводили на силикагеле HF, забуференном смесью 0,2М растворов одно- и двузамещенного фосфата натрия, с применением смеси метиленхлорид—метанол (17:3). Перечисленным фракциям соответствуют следующие величины Rf: 0,7; 0,6; 0,5 и 0,8.
Нифимицин удалось разделить на четыре компонента Ai и А2, Bi и В2 методом двойного элюирования смесью этилацетат—этанол—вода (150:45:28) на слоях силикагеля GF. Вариамицин анализировали на слоях кремневой кислоты, применяя смесь метанол—хлороформ (9:1). Количественное определение проводят, измеряя коэффициент поглощения элюата при 280 нм. Клиндамицин и его метаболиты сульфоксид-клиндамицин, N-деметилклиндамицин и сульфоксид-N-деметил-клиндамицин хроматографировали на листах со слоем силикагеля 6061 (фирма Eastman) смесью ацетон—метилэтилкетон— вода (20,1:72,1:7,8). Пятна обнаруживали и детектировали методом биоавтографии. Азалос и др. приводят перечень микроорганизмов для детектирования 84 антибиотиков.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Кашкин П.Н., Безбородов А.М. Антибиотики.Ленинградское отделение: «Медицина». 1970.-375с.
2. Кирхнер Ю.Тонкослойная хроматография т.1.М.: «МИР» 1981.-616с.