Опиоидергические механизмы тревожных расстройств (стр. 4 из 11)

Установлена способность даларгина при внутрибрюшинном (20 мкг/кг) введении снижать поведенческие проявления тревожности животных в тестах Вогеля, «челночная камера» и «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ). В процессе статистической обработки результатов обнаружилось, что выраженность анксиолитического эффекта даларгина зависит от исходного поведенческого статуса животных, в частности, от их ГДА в ATS. Так, в конфликтном тесте Вогеля этот эффект наиболее выражен у крыс с низкой двигательной активностью (НА) в ATS. Курсовое введение даларгина оказывает анксиолитическое действие, выражающееся в переходе от активной стратегии избегания в «челночной камере» к пассивной, только у крыс с высокой исходной двигательной активностью (ВА) в ATS. Анксиолитическое действие даларгина в тесте ПКЛ наблюдалось лишь на фоне дополнительных стрессорных воздействий, сопровождавшихся повышением тревожности крыс, блокировалось налоксоном и было более выражено у ВА животных (табл. 1).

Таблица 1. Влияние курсового периферического (внутрибрюшинного) введения даларгина на поведение белых беспородных крыс-самцов в ПКЛ на фоне стресса питьевой депривации

воздействие	Общая выборка	Высокоактивные	Низкоактивные
Интактные животные	77±14 (а)2.8±0.7 (б)(n=19)	90±203.5+0.7(n=11)	58±181.9±0.6(n=8)
Физ. р-р + стресс	17±5 ***0.8±0.2 ***(n=22)	11±5 **0.4±0.2 ***(n=10)	21±7 *1.1±0.3(n=12)
Даларгин (20 мкг/кг)	48±12 #1.8±0.4 #(n=23)	76±20 ##3.0±0.7##(n=11)	22±8 @0.8±0.3 @@(n=12)
Даларгин + Налоксон (10 мг/кг)	20±6 +0.6±0.2 +(n=24)	15±9 ++0.5+0.2 +++(n=12)	25±90.8+0.4(n=12)

(а) – время нахождения, (б) – количество выходов крыс в «открытый рукав» ПКЛ,

* – p<0.05, ** – p<0.01, *** – p<0.001 – достоверность отличия от интактных крыс;

# – p<0.05, ## – p<0.01, ### – p<0.001 – эффект даларгина;

@ – p<0.05, @@ – p<0.01 – отличие регистрируемых параметров у животных с высокой и низкой локомоторной активностью;

+ – p<0.05, ++ – p<0.01, +++ – p<0.001 – снятие налоксоном эффекта даларгина.

Приведены средние значения ± ошибка среднего.

В аналогичных тестах не было обнаружено анксиолитического действия селективного агониста ОР μ-типа ДАГО (Tyr-D-Ala-Gly-N-methyl-Phe-Gly-ol), то есть снижение тревожности животных под действием опиоидов, в первую очередь, опосредовано δ-ОР. Подтверждение этому было получено с использованием селективных антагонистов ОР δ1‑типа – 7‑бензлиденналтрексон (BNTX) и δ2‑типа – налтрибен (NTB). При центральном введении даларгин оказывал анксиолитическое действие в дозах, в 1000 раз более низких, чем при внутрибрюшинном введении. Эффект также был более выражен у ВА крыс и блокировался селективными антагонистами δ-ОР. Причем BNTX блокировал анксиолитический эффект даларгина на ВА, но не на НА крыс (табл. 2).

Таким образом, даларгин как при внутрибрюшинном, так и при центральном введении оказывает блокируемое антагонистами ОР анксиолитическое действие на белых беспородных крыс в условиях стресса. Степень проявления и механизм этого действия зависит от исходной двигательной активности животных: более выраженный эффект пептида на крыс с высокой двигательной активностью опосредован ОР δ1 и δ2 типов. Анксиолитическое действие даларгина на НА животных наблюдается лишь при центральном введении и блокируется только высокими дозами антагониста δ2‑ОР.

Таблица 2. Влияние антагонистов δ1 (BNTX) и δ2 (NTB) ОР на анксиолитический эффект даларгина при центральном (внутрижелудочковом) введении

воздействие	Общая выборка	Высокоактивные	Низкоактивные
Интактные животные	38±9 (а) **2.4±0.5 (б) **(n=14)	46±9*3.4+0.7*(n=7)	30±16*1.3±0.3(n=7)
Физ. р-р	6±30.4±0.1(n=23)	9±60.4±0.3(n=11)	2±1.20.2±0.1(n=12)
Даларгин (0.05 мкг/кг)	42±6 **1.4±0.3 **(n=44)	64±10 *2,2±0.4*(n=19)	26±7 * @1,0±0.3(n=25)
Даларгин (0.05 мкг/кг) + BNTX (10 мкг/кг)	14±5 #0.8±0.2(n=20)	10±4##0.6+0.2#(n=8)	17±70.9+0.3(n=12)
Даларгин (0.05 мкг/кг) + NTB (10 мкг/кг)	7±2###0.7±0.2#(n=20)	8±3 ##0.8±0.3 #(n=9)	6±3#0.6±0.3(n=11)

(а) – время нахождения, (б) – количество выходов крыс в «открытый рукав» ПКЛ,

* – p<0.05, ** – p<0.01, *** – p<0.001 – отличия от крыс, получавших физ. раствор;

# – p<0.05, ## – p<0.01, ### – p<0.001 – снятие эффекта даларгина антагонистами;

@ – p<0.05 – отличие регистрируемых параметров у ВА и НА животных

Приведены средние значения ± ошибка среднего.

Опиоидная система животных с различными проявлениями тревожности

Поведенческие проявления тревожности у животных и тревожные расстройства у людей, в первую очередь, определяются состоянием центральной нервной системы. Поэтому для оценки роли опиоидной системы в нейрохимических механизмах тревоги было исследовано состояние центральных ОР и активность эндогенных лигандов этих рецепторов и ферментов деградации опиоидных пептидов в мозгу животных с различными поведенческими характеристиками.

На первом этапе исследования была обнаружена взаимосвязь между уровнем тревожности крыс при тестировании их в «челночной камере» и вытесняющей активностью эндогенных опиоидов в гиппокампе, которую определяли радиолигандным методом, используя лей-энкефалин для построения калибровочной кривой. Было показано, что процесс тестирования в «челночной камере» в несколько раз повышает уровень эндогенных опиоидов в гиппокампе крыс. Причем максимальный выброс опиоидов происходит в гиппокампе тех животных, которые не переходят в безопасный отсек «челночной камеры» после условного сигнала (пассивная стратегия избегания) (рис. 1).

Рисунок. 1. Активность эндогенных лигандов ОР в гиппокампе крыс с различной стратегией поведения в «челночной камере»

Активная стратегия (19 крыс) – более 70% переходов в ответ на условный звуковой сигнал, пассивная (8 крыс) – остальные тестированные животные. Интактные животные (12) не были тестированы в «челночной камере». По оси ординат – способность уксуснокислых экстрактов из гиппокампов крыс вытеснять ³Н-ДАДЛЭ из ОР, нормированная в соответствии с калибровочной кривой, построенной с использованием лей-энкефалина.

Учитывая важную роль гиппокампа в регуляции эмоциональной сферы, но не болевой чувствительности, обнаруженные отличия скорее связаны с эмоциональным состоянием животных, уровнем их тревожности, чем с ноцицепцией. Отсутствие перехода на условный сигнал можно интерпретировать как сниженной способностью запоминать информацию об условном сигнале, так и пониженной тревожностью крыс. Результаты данного исследования дают основание утверждать, что противотревожную роль в этих условиях выполняют эндогенные опиоиды. Действительно, уровень опиоидов в гиппокампе крыс с пассивной стратегией поведения в 7 раз выше, чем у интактных животных (рис. 1), что, по-видимому, позволяет им преодолевать страх. Поэтому они не пытаются избегать боли и остаются в камере после условного сигнала. Косвенным подтверждением этому являются данные о том, что введение даларгина крысам приводит к изменению активной стратегии избегания на пассивную (Зозуля и соавт., 1996). Подобные эффекты обнаружены и при центральном введении селективного агониста δ1‑ОР (Ukaietal., 1997) и β-эндорфина (Floodetal., 1992).

Таким образом, у крыс с пассивной стратегией поведения в тесте «челночная камера», которую можно интерпретировать как относительно низкую тревожность, наблюдается значительно более высокий уровень эндогенных опиоидов в гиппокампе по сравнению с интактными животными и крысами с более высокой тревожностью. То есть, в условиях стресса в различных отделах мозга происходит усиление синтеза и секреции эндогенных опиоидов, которые оказывают анксиолитическое действие. В условиях хронического стресса, когда истощение запасов эндогенных опиоидов приводит к усилению поведенческих проявлений тревожности, становится более выраженным анксиолитическое действие их синтетических аналогов (табл. 1, Зозуля и соавт., 1999, Narita etal., 2006).

Для оценки состояния центральных ОР было проведено радиорецепторное определение констант связывания синтетического аналога лей-энкефалина Н-ДАДЛЭ с мембранной фракцией обонятельных луковиц и стриатума крыс. Стриатум был выбран как основной отдел мозга, отвечающий за двигательную активность, которая весьма существенна при тестировании поведения животных большинством использованных методов. Обонятельные луковицы, через которые поступает большая часть информации в мозг животных, особенно грызунов, являются одним из эмоциогенных отделов мозга.

Как было показано выше, при внутрибрюшинном введении агонист ОР даларгин оказывает анксиолитическое действие лишь в условиях стресса и не влияет на интактных животных. Поэтому в данном исследовании проводилось сравнение констант связывания ОР интактных и стрессированых животных. В качестве стрессорного воздействия были выбраны те же условия, что и для поведенческого тестирования, т.е. питьевая депривация крыс при пищевом режиме adlibitum. Перед началом стрессорного воздействия крысы были протестированы в ATS и в классическом варианте ОП, а по его окончании – в ПКЛ.

В нашем исследовании оказалось, что константы связывания ОР в стриатуме коррелируют с двигательной активностью крыс как в ATS, так и в ОП. Аффинность ОР стриатума к ДАДЛЭ у низкоактивных (НА) крыс выше, чем у высокоактивных (ВА) (табл. 3). Это соотношение отмечено как у интактных крыс, так и у крыс, подвергавшихся водной депривации. Cчитается, что Кд рецепторов может менять свои значения как из-за изменения микроокружения рецепторов (ионного состава среды, наличия оккупированных лигандами рецепторов других типов, липидного состава и состояния мембраны), так и по причине наличия нескольких типов или подтипов рецепторов, с которыми может взаимодействовать исследуемый лиганд. В нашем случае РРА проводится invitro, поэтому причинами изменения Кд могли стать только изменение состояния мембраны или наличие нескольких подтипов ОР: μ-ОР, d1‑ОР и d2‑ОР.