Противовирусные препараты (стр. 5 из 9)
(2,7-бис-[2-(диэтиламино)этокси]-флуорен-9-он
Синтезирован двумя способами тилорон-2,7-бис[(диэтиламино)этокси] флуоренон-9(I)
Нитрованием флуоренона-9(II) HNO3 получен 2,7-(O2N)2-II (Т. пл. 289 – 91º), восстановленный ZnCl2 в HCl и AcOH до 2,7-(H2N)2-II (Т. пл. 287 – 9º), диазотированием которого NaNO2 в 50%-ной HBF4 получено соответственно бис-диазосоединение (III) переведенное действием 50%-ной H2SO4 в 2,7-(HO)2-III (IV, т. пл. 320 – 2º). Ацетилированием флуорена (V) AcCl и AlCl3 синтезирован 2,7-Ac2-V (т. пл. 180 – 2º), превращенный действием 3-ClC6H4COOOH в присутствии F3CCOOH в 2,7-(AcO)2-V (VI), который окислен Na2Cr2O7 в AcOH до 2,7-(AcO)2-II (VII). Взаимодействием IV или VII с KOH и Et2NCH2CH2Cl*HCl получен I.
0,099 моля 85%-ной 3-ClC6H4COOOH прибавляют к охлажденной смеси 0,037 моля 2,7-Ас2-V, 400мл ХЛФ и 0,3мл F3CCOOH, защищают от света, нагревают до 20ºС, выдерживают три дня, хлороформный раствор промывают насыщенным раствором Na2CO3 и насыщенным раствором NaCl, органический слой сушат безводным MgSO4, фильтрат упаривают, получают IV, выход 62%, т. пл. 165 – 7ºС (МеОН – хлф1).
0,034 моля VI, 0,01 моля Na2Cr2O7*2H2O, 30мл АсОН кипятят 45 минут, раствор охлаждают, прибавляют 50мл воды, выделяют VII, выход 53%, т.пл. 224,5-6,5º (СП).
0,04 моля Et2NCH2CH2Cl*HCl, 0,08 моля KOH, 0,01 моля IV или VII 0,5г PhCH2NMe3Br, 200мл толуола и 50мл воды кипятят 24 часа, после охлаждения отделяют органический слой, промывают водой, насыщенным раствором NaCl и высушивают безводным MgSO4, толуол упаривают в вакууме, масло растворяют в 5мл МеОН прибавляют к 50 мл эфирн. ненасыщенного HCl. Выделяют ди-ХГ (I) 50%, т.пл. 232 – 4º (изо-PrOH-MeOH, 3:1).
5.2. Получение бонафтона (6-бром-1,2-нафтохинон)
Получение 6-бромнафтохинона-1,2 с нитрозодисульфонатом калия [10]
Реакцией β-нафтол с Br2, в лед АсОН получен с выходом 76% 6-бромнафтол-2(I), т.кип. 200 - 5º /20 т.пл. 128ºС. Взаимодействием IcON(SO3K)2 в дистиллированной воде при добавлении 1/6 н KH2PO4 приводит к 6-бромнафтохинону-1,2, т.пл. 170º(разл).
Бонафтон – 14С [11]
Разработан метод синтеза [8 – 14С]-6-бром-1,2-нафтохинона (I, бонафтона), обладающего противовирусной активностью, взаимодействием 4-MeOC6H4CH2CH2CH2Br с Mg и 14CO2 получают 4- MeOC6H4CH2CH2CH2-14COOH (II). Циклизация (II) ПФК дает [1-14С]-7-метокси-1-тетралон (III), восстановление которого на Pd/С приводит к [1-14С]-7-метокситетралину (IV). Дегидрирование IV при помощи тетрахлор-1,2-бензохинона приводит к [1-14С]-7-метоксинафталину(V-неролину-14С) из V и HBr получают [8-14С]-2-нафтол(VI), бромирование которого дает [1-14C]-3,8-дибром-7-оксинафталин (VII). Из VII получают [8-14C]-6-бром-2-нафтол (VIII). Реакция VIII с ON(SO3K)2 приводит к (I).
5.3. ГОССИПОЛ
2,2-бис-(1,6,7-триокси-3-метил-5-изопропил-8-альдегидонафтил)
 | C30H30O8Мол. масса 518.57Т.пл. 180-181°C |
Госсипол представляет собой кристаллический канареечно-желтый порошок без запаха.
Растворим - в спирте, эфире, ацетоне, хлороформе, пиридине.
Не растворим - воде.
Качественные реакции. Кристаллик госсипола с каплей конц. серной кислоты на часовом стекле дает пурпурно-красное окрашивание.
Диоксим C30H32O8N2. В колбе с обратным холодильником нагревают на водяной бане 0.5 г госсипола, 1 г гидроксиламина гидрохлорида, 5 мл пиридина и 5 мл абсолютного спирта. Растворитель концентрируют под тягой, к остатку прибавляют спирт. Выпадают кристаллы; их отделяют и перекристаллизовывают из спирта. Т.пл. 312°C.
Госсипол является одним из главных пигментов хлопчатника, известен в трех таутомерных формах. Обладает свойствами антиоксиданта, щелочные растворы поглощают свободный кислород воздуха. Ядовит.
В ядрах семян и других частях хлопчатника содержание госсипола в среднем составляет 1%. В процессе производства хлопкового масла он превращается в глубокоокрашенные не токсичные соединения, затрудняющие рафинацию масла.
В настоящее время наряду с фармацевтической отраслью применяется для получения полимерных материалов, преимущественно лаков.
ЛАБОРАТОРНЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ
Сырье и реактивы.
| Исходное сырье | Количество | Примечание |
| Кора корней хлопчатника | 250 г | В коре корней хлопчатника содержится больше госсипола, чем в других частях растения. Отсутствие в ней жирных веществ облегчает выделение и очистку. |
| Эфир | 1000 мл | Для удаления перекисей эфир встряхивают с 5% раствором сернокислого железа(II), подкисленного серной кислотой. |
| Уксусная кислота | 25 мл | |
| Петролейный эфир | 25 мл | |
| Гидросульфит натрия | 1 г | |
| Этиловый спирт | 50 мл | |
| Пиридин | 5 мл | |
| Гидроксиламин гидрохлорид | 1 г |
1 Стадия. Выделение госсипола в виде госсиполацетата.
Госсиполацетат - молекулярной комплекс состава C30H30O8* CH3COOH, легко гидролизуемое горячей водой.
Грубоизмельченную воздушно-сухую кору корней хлопчатника перколируют при пониженной температуре 1 л эфира, свободного от перекисей. Эфирный экстракт концентрируют при небольшом разрежении до объема 40-50 мл, добавляют 15 мл ледяной уксусной кислоты, хорошо перемешивают и, не закрывая колбы, оставляют в холодильнике для кристаллизации. При медленном испарении эфира выпадает госсиполацетат. Первую порцию зеленовато-желтых кристаллов отфильтровывают на стеклянном фильтре и промывают 10 мл смеси эфира и уксусной кислоты в соотношении 3:1.
Фильтрат и промывную смесь объединяют и оставляют в стакане при комнатной температуре, пока не испарится половина объема. В это время выпадает вторая половина госсиполацетата. Соединив вместе полученные осадки, их растворяют в 50 мл эфира, добавляют 5 мл уксусной кислоты и оставляют на сутки. Выпадает чистый госсиполацетат в количестве 3 гр.
2 Стадия. Получение свободного госсипола.
На холоду растворяют 3 г госсиполацетата в 50 мл эфира, свободного от перекисей, и переносят в коническую колбу, содержащую равный объем 0.4%-ного водного раствора дитионита натрия (неверно называемый гидросульфитом натрия).
Эфир отгоняют при температуре бани около 60°C под умеренным вакуумом. По мере испарения эфира на поверхности воды выделяется свободных госсипол в виде корочки. Для полноты гидролиза госсиполацетата эту операцию повторяют еще раз, т.е. отфильтрованный осадок снова растворяют в эфире, добавляют равный объем воды, эфир отгоняют. Полученный таким образом госсипол высушивают на воздухе. Получают 2 гр.
Для очистки всю порцию госсипола растворяют в 25 мл эфира и добавляют петролейный эфир до помутнения раствора. Раствор оставляют на кристаллизацию. Кристаллический госсипол - канареечно-желтый порошок, хранят в пробирке из темного стекла. Получают чистого госсипола 1-1.2 г, имеющего т. пл. 180-181°C.
5.4. ПОЛУЧЕНИЕ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО АЛЬФА-ИНТЕРФЕРОНА
Способность лейкоцитов человека продуцировать интерферон была показана вскоре после открытия системы интерферона Айзексом /Франция/.
Методика заключается в следующем.
Из периферической крови доноров выделяют лейкоцитарную массу и подвергают культивированию в суспензии. Используют среду №1, в которую добавляют 0,0015 ед/мл инсулина и 100-200 ед/мл нативного интерферона. К лейкоцитам в концентрации (5-10)*106клеток/мл в качестве индуктора добавляют вирус болезни Ньюкасла с инфекционным титром не ниже 108/мл ТЦД50 в культуре куриных фиброластов. Продуцированный интерферон отделяют от культуральной среды путем центрифугирования.
ПОЛУЧЕНИЕ БЕТА -ИНТЕРФЕРОНА
Еще в 60-е годы было показано, что интерферон, провоцируемый клетками амниона человека, а также кожно-мышечными фибробластами, по своим свойствам отличается от лекоцитарного интерферона. В настоящее время для получения бета-интерферона используют диплоидные клетки человека. Супериндукцию осуществляют различными воздействиями - дихлоро-1-бета-D-рибафуранозилбенэимидазолом, хлороквином, нейтральным красным, УФ~радиацией и др.
ПОЛУЧЕНИЕ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА
Гамма-интерферон является продуктом Т-лимфоцитов человека. За последнее десятилетие благодаря усиленному изучению иммунного ответа и свойств иммуннокомпетентных клеток значительно расширились представления о функциях Т-лифоцитов, а также о продуктах, выделяемых Т-лимфоцитами - лимфокинах, обладающих свойствами биорегуляторов.
Гамма-интерферон, или иммунный интерферон, также является одним из активных регуляторов иммунного ответа, так как обладает супрессорной активностью в отношении продукции антител, вызывает активацию естественных киллеров.
Гамма -интерферон продуцируют активированные Т-лимфоциты.
Для получения больших количеств гамма-интерферона из периферической крови выделяют Т-лимфоциты и обрабатывают митогеном или антилимфоцитарной сывороткой. Например, к культуре с концентрацией лимфоцитов (I-2)*105 в 1 мл прибавляют стафилококковый энтеротоксин в концентрации 0,02 мкг/мл.
Культуры инкубируют в среде с человеческим альбумином. Интерферон выделяют из культуральной среды. Возможно повторное стимулирование культуры и повторное продуцирование интерферона.
ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ ЛЕЙКОЦИТАРНЫЙ ИНТЕРФЕРОН
Характеристика готового продукта,