Температура плавления студня, содержащего 0,85% абсолютно сухого агара, не ниже 80ºС.
Прочность студня (в граммах), содержащего 0,85% абсолютно сухого агара, не менее 300.
Падение прочности после нагревания в течение 2 часов раствора, содержащего 0,85% абсолютно сухого агара, не более 10%.
Влаги не более 18%. Золы не более 4,5%. Азотистых веществ (N∙6.25) не более 1%. Йода, мышьяка, солей тяжелых металлов (свинец, цинк и олово) не должно быть. Веществ, нерастворимых в горячей воде, не более 0,3%. Веществ, растворимых в воде комнатной температуры, не более 10% [18].
Судан III. С22Н16N4O (М. в.352,40). Коричневый порошок с зеленым металлическим блеском. Нерастворим в воде, растворим в хлороформе, ледяной уксусной кислоте, трудно растворим в спирте, эфире, эфирных маслах [18].
Бромкрезоловый пурпурный (Бром-о-крезолсульфофталеин). C21H16Br2O5SМ. в.540,2.
Белый или желтовато-розовый мелкокристаллический порошок. Мало растворим в воде, растворим в спирте, растворах едких и углекислых щелочей и растворе аммиака.
Переход окраски от бледно-желтого к пурпурно-фиолетовой, в пределах рН 5,2-6,8.
Растворы индикатора.1.0,1г растертого индикатора растворяют в 20мл теплого спирта и доводят водой до 100мл.2.0,1г индикатора растирают в ступке с 3,7мл 0,05н. раствора едкого натра и после его растворения доводят свежий прокипяченный и охлажденный водой до 250мл [18].
Бромтимоловый синий (дибромтимолсульфофталеин). C27H28Br2O5S.М. в.624,4.
Белый мелкокристаллический порошок. Очень мало растворим в воде, легко - в спирте, эфире, растворах едких и углекислых щелочей и растворе аммиака.
Переход окраски от желтой через зеленую в синюю, в пределах рН 6,0-7,6.
Растворы индикатора.1.0,1г растертого индикатора растворяют в 20мл теплого спирта и после охлаждения доводят водой до 100мл.2.0,1г индикатора растирают в ступке с 3,2мл 0,05н раствора едкого натра и после его растворения доводят свежепрокипяченной и охлажденной водой до 250мл [18].
Метиловый оранжевый (4-диметиламиноазобензол-4’-сульфонат натрия). C14H14N3NaO3S.М. в.327,34.
Кристаллический порошок оранжевого, иногда с коричневым оттенком цвета. Трудно растворим в воде, легче растворим в горячей воде, практически нерастворим в спирте.
Переход окраски от красной через оранжевую к желтой в пределах рН 3,0-4,4.
Растворы индикатора.0,1г растертого индикатора растворяют в воде и доводят водой до 100мл.
Насыщенный раствор индикатора в ацетоне. К 0,025г индикатора прибавляют 100мл ацетона и время от времени встряхивают, через час фильтруют [18].
Фенолфталеин.
Переход окраски от бесцветной к красной в пределах рН 8,2-10,0. Раствор индикатора 1г индикатора растворяют в спирте и доводят спиртом до 100мл [18].
Вода дистиллированная. Н2О.М. в.18,02.
Бесцветная прозрачная жидкость без запаха и вкуса. рН от 5,0 до 6,8. Кислотность и щелочность. К 10мл воды прибавляют 1 каплю раствора метилового красного; появляется желтое окрашивание, переходящее в розовое от прибавления не более 0,05мл 0,01н раствора соляной кислоты. Сухой остаток.100мл выпаривают досуха и сушат при 100-105ºС до постоянного веса. Остаток не должен превышать 0,001%.
Хранение. В асептических условиях, в доверху заполненных флаконах, не более 24 часов [18].
Приготовление геля и агаровых пластинок
Агаровый гель готовится 2% концентрации в предварительно тарированном стеклянном или эмалированном сосуде, плотно закрытом крышкой. Изрезанный агар (ГОСТ 6470-53) заливается очищенной водой и оставляется на 30 минут для набухания.
Набухший агар нагревается до кипения, доводится до необходимой массы и к теплому гелю добавляется 5% реактива Эрлиха состава: п-диметиламинобензальдегида 0,5г, кислоты хлористоводородной концентрированной и этанола 95% по 15мл и н-бутанола - 90мл.
Приготовленный таким образом агаровый гель разливается в чашки Петри с горизонтальной поверхностью дна (d=98-100мм, h=20мм), которые выставляются на столе, предварительно выверенном по горизонтальному уровню с помощью ватерпаса. Агар разливается в чашки двумя порциями по 10 и 15мл. После застывания агара (первой порции) на ее поверхность, в каждую чашку помещаются три металлических цилиндра (из нержавеющей стали или стекла с наружным диаметром 8мм и высотой до 10мм), и заливается второй слой агара. После застывания агара цилиндрики осторожно вынимаются. И в образовавшиеся углубления (колодцы) помещаются исследуемые образцы мази [20].
Определение скорости высвобождения лекарственных веществ из мази
Мази, содержащие лекарственное вещество с различной степенью дисперсности, помещают в лунки двух чашек с агаром. Чашки нумеруют или указывают степень измельчения. Мазь в лунки переносят с помощью стеклянной палочки, осуществляя контроль за тем, чтобы был хороший контакт с агаром. Мази с плотной или вязкой консистенцией перед использованием следует тщательно растирать или выдержать 30 минут при температуре 30ºС. Чашки помещают в термостат с температурой 37ºС.
Лекарственное вещество высвобождается из мази, диффундирует в агаровый гель, образуя с реактивом окрашенную зону. Через 1-2-3 часа, с помощью линейки (лучше - штангенциркуля) измеряют диаметр окрашенной зоны. В случае необходимости (при образовании эллипса) измеряют больший и меньший диаметр, и определяют среднее значение диаметра окрашенной зоны. Полученные результаты записывают в дневник и подвергают математико-статистической обработке.
Средняя ошибка среднего арифметического вычисляется по формуле
m= ±∑аk,
где:
m - средняя ошибка среднего арифметического диаметров окрашенных зон;
∑ - сумма;
а - цифровые значения отклонений диаметров зон от среднего арифметического со знаком "+" или "-";
k- величина, зависящая от числа вариантов, то есть количества опытов (n) для каждого образца мази. В данном случае равна 0,29004 при n=3 [20].
Определение стабильности
Для проверки стабильности и качества мази использовался метод расслаивания - центрифугирование.
На электронных весах отвешивается по 5г мази с каждой модели, помещая их в пробирки. Пробирки устанавливаем в держатели центрифуги.
На первом этапе таймер центрифуги устанавливается на 10 минут на скорость вращения - 500 об/мин. Через 10 минут вынимаем пробирки и, при достаточном освещении, проверяем мази на расслаивание. В случае изменения однородности мазей - разделения их на отдельные компоненты - производят измерение высоты расслоившихся фракций и описание их по внешнему виду.
На втором этапе таймер устанавливается на 10 минут, а скорость вращения центрифуги - 1000 об/мин. По истечении времени проводят те же действия: замеры, определения, что и на первом этапе. На последующих этапах увеличивают только число оборотов. 2000, 3000 об/мин и т.д. Число оборотов увеличивают до тех пор, пока не произойдет расслаивание во всех взятых мазях. По результатам данного опыта мы можем судить о сравнительной стабильности или нестабильности мазей.
Приготовление индикаторов
Фенолфталеин.1г индикатора растворяют в спирте и доводят спиртом до 200мл [18].
Метилоранж.0,1г растертого индикатора растворяют в воде и доводят водой до 200мл [18].
Бромкрезоловый пурпуровый.1.0,1г растертого индикатора растворяют в 20мл теплого спирта и доводят водой до 100мл.2.0,1г индикатора растирают в ступке с 3,7мл 0,05н. раствора едкого натра и после его растворения доводят свежий прокипяченный и охлажденный водой до 250мл [18].
Бромтимоловый синий.1.0,1г растертого индикатора растворяют в 20мл теплого спирта и после охлаждения доводят водой до 100мл.2.0,1г индикатора растирают в ступке с 3,2мл 0,05н раствора едкого натра и после его растворения доводят свежепрокипяченной и охлажденной водой до 250мл [18].
Судан III.0,1г индикатора растворяем в аммиаке и доводим до 100мл 95% спиртом [18].
Агар (агар-агар).2г агара заливаем 98мл холодной воды, оставляем на 30 минут (для набухания). В течение 15 минут выдерживаем на водяной бане, при температуре около 100ºС. Затем заливаем в чашки Петри и оставляем до полного застывания [18].
Первым этапом работы стал подбор оптимального состава мази мумие на основе бентонитовой глины. Нами были предложены шесть моделей мазей мумие на основе бентонитовой глины. Состав моделей в таблице 1.
Таблица 1 Состав модели мазей мумие на основе бентонитовой глины
| № | Наименование ингредиентов | Номера моделей | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | ||
| Состав, в% | |||||||
| 1 | Мумиё | 7,5 | 7,5 | 7,5 | 7,5 | 7,5 | 7,5 |
| 2 | Вода | 27 | 7 | 7 | 27 | 7 | 7 |
| 3 | Ланолин | 1,1 | 1,1 | 1,1 | 1,1 | 1,1 | 1,1 |
| 4 | Вазелин | 40,5 | 60,4 | 60,4 | 40,4 | 52,4 | 52,4 |
| 5 | Глина белая | 24 | 24 | - | - | 24 | - |
| 6 | Глина голубая | - | - | 24 | 24 | - | 24 |
| 7 | Глицерин | - | - | - | - | 5 | 5 |
Приготовление мазей мумие на основе бентонитовой глины осуществлялось следующим образом: мумие растворяли в воде.
Приготовление основы. Отдельно готовили сплав ланолина и вазелина, затем в сплав добавляли глину при активном перемешивании. При приготовлении моделей № 5 и 6 глицерин добавляли в сплав вазелина и ланолина до добавления глины.
В приготовленную основу частями добавляли раствор мумие в воде.
Выбор состава мази мумиё из предложенных моделей производили по биологической доступности мумиё из моделей мази
Определение биологической доступности полученных моделей мазей мумие на основе бентонитовой глины, по методике описанной в пункте 2.2