Стерильные и асептические лекарственные формы.
Стерильные (безмикробные) лекарственные формы готовят в асептических условиях и стерилизуют. К ним относятся растворы для инъекций, глазные капли, препараты для детей до 1 года.
Асептические лекарственные формы готовят в асептических условиях без стерилизации.
Асептика - предупреждение попадания микробов в лекарственный препарат. Асептические и стерильные лекарственные формы готовят в асептических условиях:
1. Требования к помещению.
Помещение называется асептический блок. Уборка в нем производится 1раз в смену с использованием дезинфицирующих растворов (хлорамин Б - 1%, перекись водорода - 3%). Для стерилизации воздуха и поверхностей применяют бактерицидные лампы. Отбор проб для бактериологического исследования (силами центров ГСЭН) различных объектов в аптеках проводится не менее 2 раз в квартал. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова Микробное число воздуха в асептическом блоке не должно превышать 500 - 750 до и 1000 МК/м3 после работы, а золотистого стафилококка, плесневых и дрожжевых грибов не должно быть в 250л воздуха ни до, ни после работы.
2.Требования к аптечной посуде, дистиллированной воде. Они обрабатываются в автоклаве (120 ° - 1атм. - 45 мин. или 132 °- 2 атм. - 20 мин).
3. Требование к персоналу. Персонал работает в стерильной одежде ( халат, шапочка, бахилы, марлевая повязка), обрабатывает руки дезраствором.
4 ( 0,5% р-р хлорамина Б или этанол - 80%). В стерильных лекарственных формах содержание микроорганизмов не допускается, в асептических - допускается не более 10-15 в 1г (мл).
Нормативными документами, регламентирующими санитарный режим аптечных организаций и микробиологический контроль качества лекарственных средств являются:
- «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках», 1985 г.;
- Приказ МЗРФ № 53 от 25.03.94 года "Об усилении контроля качества лекарственных средств";
- Приказ №118 от 14.06.94 года "Об аккредитации региональных (территориальных) контрольно-аналитических лабораторий (центров контроля качества лекарственных средств) и сертификации лекарственных средств в Российской Федерации";
- Приказ № 309 МЗ РФ от 21 октября 1997г. «Об утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)» (см. придажение№3).
5. Объекты санитарно-бактериологического обследования в
аптеках
В аптеках согласно инструкции, утвержденной приказом Министерства здравоохранения, не менее двух раз в квартал осуществляется бактериологический контроль, объектами которого служат:
· вода дистиллированная;
· инъекционные растворы до и после стерилизации;
· глазные мази после стерилизации;
· глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной основе;
· сухие лекарственные вещества, используемые для приготовления инъекционных растворов;
· нестерильные лекарственные формы;
· аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие материалы;
· инвентарь, оборудование, руки, санитарная одежда персонала;
· воздух аптечных помещений.
6. Определение микрофлоры в лекарственных формах
При исследовании лекарственных форм осуществляют:
· определение общего микробного числа (микробная обсемененность);
· определение бактерий группы кишечной палочки;
· определение дрожжевых и плесневых грибов;
· определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов.
Общее микробное число (ОМЧ) – количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г (мл) препарата, определяют по числу выросших колоний.
Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья
В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2, который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин. Из полученного смыва готовят четыре десятикратных разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000), для посева в связи с большой обсемененностью растительного сырья используют два последних (1: 1000 и 1: 10000) разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва, после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 370С 24 - 48 ч. Производят подсчет выросших колоний на поверхности и в глубине агара. Полученное число колоний следует умножить на степень разведения.
Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств
Инъекционные растворы, глазные капли, лекарственные средства для новорожденных, другие лекарственные препараты, стерилизуемые в процессе их изготовления, засевают неразведенными в тиогликолевую среду для определения микробной обсемененности и среду Сабуро для выявления дрожжевых и плесневых грибов. Посевы на тиогликолевой среде выдерживают 14 суток при 370С, на среде Сабуро 14 суток при 240С. Учет результатов посевов проводят по отсутствию видимых изменений в посевах.
Определение микробной обсемененности готовых лекарств
Жидкие лекарственные формы разводят стерильным физиологическим раствором 1:10 (или 1:100) и засевают в объеме 0,5 мл на МПА в чашке Петри. 1г порошка или таблеток помещают в пробирку с 10 мл физиологического раствора и после растворения производят посев на МПА.
Мягкие лекарственные формы (мази, пасты) в количестве 1 г взвешивают в асептических условиях, переносят в пробирки с 10 мл стерильного 1,4% раствора натрия гидрокарбоната для диспергирования, которое производят вращательным движением пробирки между ладонями в течение 2-4 мин., 0,5 мл полученного раствора засевают на МПА в чашках Петри. Чашки с посевами помещают в термостат на 48 ч, затем подсчитывают число колоний и определяют количество бактерий в 1 мл или 1 г образца.
Определение общего количества грибов
Определение общего количества грибов проводят на твердой среде Сабуро, на которую засевают 0,5 мл цельного или разведенного 1:10 препарата. Посевы инкубируют при 240С в течение 5 суток, затем подсчитывают число выросших колоний и определяют количество грибов в 1 мл (1 г) препарата.
Качественное определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов
1. Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae (роды Escherichia, Salmonella, Shigella).
Посев лекарственных средств производят на среду Эндо и висмут -сульфитный агар. Идентификацию энтеробактерий осуществляют следующим образом: если в образце обнаружены грамотрицательные неспоровые палочки, дающие отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментирующие глюкозу и восстанавливающие нитраты в нитриты, исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.
2. Определение патогенных стафилококков.
Определение патогенных стафилококков производят посевом на желточно - солевой агар. На этой среде патогенные стафилококки вызывают расщепление лецитина, проявляющееся в образовании вокруг колоний зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. Выделенную чистую культуру исследуют на наличие плазмокоагулазы.
3. Выявление Pseudomonasaeruginosa.
Осуществляют на среде с глицерином. Синегнойная палочка на этой среде образует зеленоватые флуоресцирующие колонии, выделяющие в среду сине - зеленый пигмент.
4. Выявление протея. Производят посевом на МПА по Шукевичу.
Наличие условно - патогенных и патогенных микроорганизмов в лекарственных препаратах недопустимо. В соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания приняты следующие критерии оценки микробной обсемененности лекарственных средств (табл. 2)
Таблица 2
Нормативы предельно допустимого содержания
непатогенных микроорганизмов в лекарственных формах
| Лекарственные средства | Содержание микроорганизмов в 1 г/мл |
| Инъекционные растворы перед стерилизацией, не позднее 1,5 ч после приготовления | Не более 30 |
| Инъекционные растворы после стерилизации | Стерильны |
| Глазные капли, средства для новорожденных | Стерильны |
| Дистиллированная вода для приготовления стерильных растворов | Не более 15 |
| Препараты для местного применения (на кожу, слизистую носа, гинекологические) | Не более 100, в том числе не более 10 грибов |
| Пероральные препараты | Не более 1000, в том числе не более 100 грибов |
Определение пирогенности
Пирогенность (повышение температуры тела) обусловлена наличием в стерильных лекарственных препаратах продуктов распада бактерий (липополисахаридов). Стерильные инъекционные растворы должны быть апирогенны.
Определение пирогенности проводят на здоровых кроликах обоего пола, не альбиносах, весом 2,5-3,0 кг, содержащихся на полноценном рационе. Испытуемую дистиллированную воду или лекарственные средства вводят трем кроликам в ушную вену в количествах и растворителях, предусмотренных соответствующими инструкциями.
Воду для инъекций и раствор лекарственного средства считают непирогенными если сумма повышений температуры у 3 кроликов меньше или равна 1,40С. Если сумма превышает 2,20С, то испытуемые растворы считают пирогенными. В случаях, когда сумма повышений температуры у 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,20С, испытание проводят на 5 кроликах. В этом случае раствор считают непирогенным, если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,70С.
Таблица 3. Требования к микробиологической чистоте
| №№п/п | Наименованиеобъекта контроля | Требования к микробиологической чистоте | Нормативный документ |
| 1 | Вода очищенная | Не более 100 микроорганизмов в 1 мл при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus | ФС 42-2619-97 |
| 2 | Вода для инъекций | Апирогенность | ФС 42-2620-97 |
| 3 | Инъекционные растворы после стерилизации* | Стерильность | ГФ Х1, вып.2,стр.187 |
| 4 | Глазные капли после стерилизации | Стерильность | ГФ Х1, вып.2,стр.187 |
| 4.1 | Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной воде | Стерильность | ГФ Х1, вып.2,стр.187 |
| 5 | Основное сырье (субстанции) для производства стерильных препаратов | Не более 100 микроорганизмов в мл при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus | ГФ Х1, вып.2,стр.187 |
| 6 | Лекарственные средства для новорожденных (растворы для внутреннего и наружного применения, глазные капли, масла для обработки кожных покровов) | Стерильность | Приказ МЗ СССР от 19.10.82 «Об усилении контроля за санитарным состоянием родильных домов, детских лечебно-профилактических учреждений и аптек» |
| 7 | Детские лекарственные средства (от 0 до 1 года) | Не более 50 бактерий и грибов в 1г или 1 мл при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus | Изменение к статье ГФ Х1, вып.2, стр.187 «Методы микробиологического контроля лекаственных средств»(1995г.)Методические указания по приготовлению стерильных растворов в аптеках (1994г.) |
*Интервал времени от начала изготовления раствора до стерилизации не должен превышать 3-х часов.
ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
1. Интернет
2. Микробиология и иммунология / Под ред.А.А.Воробьева.- М.: Медицина, 2001г.
3. Методические рекомендации «фитопатогенная микрофлора. микробиологические методы исследования лекарственного сырья и готовых лекарственных форм» для студентов фармацевтического факультета по предмету «микробиология» (Омская государственная медицинская академия 2005год)