Фармакогностичне дослідження надземної частини кульбаби лікарської (taraxacum officinale wigg.) та розробка способів аналізу біологічно активних речовин (стр. 4 из 6)

хв.

Рис.3. Хроматограма екстракту квіток кульбаби лікарської.

хв.

Рис. 4. Хроматограма екстракту коренів кульбаби лікарської.

Із застосуванням методу УФ-спектрофотометрії розроблено методику аналізу суми флавоноїдів в сировині кульбаби лікарської в перерахунку на лютеолін. Проаналізовано сировину листя та квіток кульбаби лікарської, зібраної в різних регіонах України (табл. 5). Встановлено, що вміст флавоноїдів в сировині квіток кульбаби лікарської коливається в межах від 0,4913±0,0360 % до 0,7106±0,0740 %.

Вміст суми флавоноїдів в сировині листя кульбаби лікарської коливається в межах від 0,1821±0,0135 % до 0,2235±0,0183 %.

Таблиця 5

Вміст суми флавоноїдів та вільного лютеоліну в сировині квіток кульбаби лікарської, зібраної в різних областях України

Сировина кульбаби лікарської,n=6	Вміст в сировині,
	Cума флавоноїдів (%)	Лютеолін (%)
Квітки, Черкаська обл., 2003 р.	0,711 ±0,074	0,332±0,009
Квітки, Київська обл., 2002 р.	0,514 ± 0,024	0,183±0,008
Квітки, Київська обл., 2003 р.	0,574±0,036	0,207±0,007
Квітки, Житомирська обл., 2003 р.	0,538±0,043	0,193±0,006
Квітки, Волинська обл., 2003 р.	0,491±0,036	0,190±0,004
Квітки, Херсонська обл., 2003 р.	0,528±0,015	0,205±0,006
Листя, Черкаська обл., 2006 р.	0,214 ±0,016	-
Листя, Київська обл., 2005 р.	0,205 ± 0,015	-
Листя, Київська обл., 2006 р.	0,224 ± 0,018	-
Листя, Волинська обл., 2006 р.	0,193 ± 0,019	-
Листя, Херсонська обл., 2006 р.	0,182±0,014	-

З використанням методу ВЕРХ розроблено методику аналізу вмісту флавоноїду лютеоліну в сировині та препаратах квіток кульбаби лікарської. Проаналізовано сировину квіток кульбаби лікарської, зібрану в різних регіонах України (табл. 5). Встановлено, що вміст лютеоліну в сировині квіток кульбаби лікарської коливається в межах від 0,1830±0,0084 до 0,3315±0,0091 %.

За допомогою методу УФ-спектроскопії розроблена методика аналізу полісахаридів в сировині кульбаби лікарської. Встановлено, що найбільший вміст полісахаридів знаходиться в коренях кульбаби лікарської – 33,73±2,68 %, менший вміст в квітках – 7,70±0,48 %, найменшу кількість полісахаридів знайдено в сировині листя кульбаби лікарської – 2,79±0,23 %.

Досліджено залежність вмісту БАР в сировині надземної частини кульбаби лікарської від фази вегетації. Встановлено, що для максимального вмісту БАР листя та квітки кульбаби лікарської треба збирати в фазу масового цвітіння рослини.

Стандартизація сировини та препаратів кульбаби лікарської

Розроблені науково обгрунтовані рекомендації щодо виготовлення водно-спиртових настойок та екстрактів з сировини квіток, листя та трави кульбаби лікарської з оптимальним вмістом БАР.

Встановлено, що оптимальними умовами екстракції БАР із сировини надземної частини кульбаби лікарської (квітки, листя, трава) є трикратна екстракція подрібненої до розміру 0,5 – 2 мм сировини 40 % або 70 % спиртом протягом 45 хв у співвідношенні (маса сировини : об’єм екстрагенту) 1:20.

Встановлені макроскопічні та мікроскопічні ознаки квіток та листя кульбаби лікарської.

Розроблено проект АНД „Квітки кульбаби лікарської”, який регламентує макроскопічні та мікроскопічні ознаки, параметри ідентифікації, втрату в масі при висушуванні (не більше 13 %), вміст загальної золи (не більше 10 %), вміст золи, нерозчинної в 10 % розчині кислоти хлористоводневої (не більше 2 %), вміст цикорієвої кислоти (не менше 0,5 %), вміст лютеоліну ( не менше 0,15 %).

За розробленим проектом АНД проаналізовано 5 серій сировини квіток кульбаби лікарської.

Розроблено проект АНД „Листя кульбаби лікарської”, який регламентує макроскопічні та мікроскопічні ознаки, параметри ідентифікації, втрату в масі при висушуванні (не більше 13 %), вміст загальної золи (не більше 10 %), вміст золи, нерозчинної в 10 % розчині кислоти хлористоводневої (не більше 2 %), вміст цикорієвої кислоти (не менше 1 %).

За розробленим проектом АНД проаналізовано 5 серій сировини листя кульбаби лікарської.

Розроблено проект АНД „Корені кульбаби лікарської”, який регламентує макроскопічні та мікроскопічні ознаки, параметри ідентифікації, втрату в масі при висушуванні (не більше 14 %), вміст загальної золи (не більше 8 %), вміст золи, нерозчинної в 10 % розчині кислоти хлористоводневої (не більше 4 %), вміст цикорієвої кислоти (не менше 0,2 %), вміст полісахаридів ( не менше 25 %).

За розробленим проектом АНД проаналізовано 5 серій сировини коренів кульбаби лікарської.

Дослідження біологічної активності потенційних лікарських засобів на основі кульбаби лікарської

Вивчення біологічної активності екстрактів листя, квіток та коренів кульбаби лікарської було виконано в Державній установі „Інститут фармакології та токсикології” АМН України.

Дослідження гострої токсичності та протизапальних властивостей проводили в відділі протизапальних та анальгезуючих засобів при консультативній допомозі к.б.н. Ядловського О.Є. В результаті проведення токсикологічних досліджень встановлено, що водно-спиртові екстракти коренів, квіток та листя кульбаби лікарської за величиною ЛД₅₀при внутрішньошлунковому введенні відносяться до ІVкласу токсичності (практично нетоксичні речовини).

Проведені дослідження на моделі карагенінового набряку у мишей дозволили виявити наявність протизапальних властивостей у водно-спиртових екстрактах коренів, листя та квіток кульбаби лікарської, при цьому екстракт листя кульбаби лікарської не поступається за вказаною активністю настойці горіха грецького.

Вивчення антирадикальної, антиоксидантної та геномозахисної дії проводили у відділі біохімічної фармакології під керівництвом та консультативною допомогою д.м.н. Літвінової Н.В. Дослідження, що були проведені invitro на моделі дифенілпікрилгідразилу та invivo на ізольованих фракціях репресованого хроматину і транскрипційно активних хроматину клітин печінки щурів продемонстрували, що вищезазначені лікувальні властивості в різній мірі притаманні всім досліджуваним екстрактам кульбаби, при цьому водно-спиртовий екстракт листя кульбаби лікарської не поступається за своїми антиоксидантними та геномозахисними властивостями настоянці горіха грецького.

За результатами проведених досліджень як перспективні препарати з протизапальними, антиоксидантними та геномозахисними властивостями запропоновано для застосування настойки, екстракти та лікарські чаї на основі сировини листя кульбаби лікарської.

Дослідження багатокомпонентних фітокомпозицій, до складу яких входить кульбаба лікарська

Для розробки методологічних підходів для ідентифікації та стандартизації кульбаби лікарської в багатокомпонентних фітокомпозиціях як об'єкт для дослідження нами було взято розроблену в Державній лабораторії з контролю якості лікарських засобів ДУ „Інститут фармакології та токсикології” АМН України фітокомпозицію “Кардіосед”. Вона має такий склад: трави астрагалу шерстистоквіткового – 20 г; трави меліси лікарської – 20 г; трави кульбаби лікарської – 20 г; плодів глоду – 30 г; плодів фенхелю – 10 г; коренів та кореневищ валеріани лікарської – 20 г; спирту етилового 70 % – достатня кількість для доведення до об'єму 1 л.

З використанням методу ВЕРХ нами було запропоновано стандартизацію компонентів кульбаби лікарської в фітокомпозиції за наявністю та вмістом цикорієвої кислоти, яка присутня в усіх частинах кульбаби лікарської.

На рис. 5 представлені хроматограми фітокомпозиції „Кардіосед” та контрольної фітокомпозиції, що відрізняється за складом від „Кардіоседу” відсутністю трави кульбаби лікарської. Хроматограми відрізняються одна від другої тим, що на хроматограмі фітокомпозиції “Кардіосед” присутній пік цикорієвої кислоти, на хроматограмі ж контрольної фітокомпозиції вказаний пік відсутній.

хв.

Рис. 5. Хроматограма складних фітокомпозицій:

1 – фітокомпозиція “Кардіосед”;

2 – контрольна фітокомпозиція без додавання трави кульбаби лікарської.

Встановлено, що вміст цикорієвої кислоти в фітокомпозиції „Кардіосед” становить 0,0080±0,0004 %.

Таким чином, нами була показана можливість стандартизації сировини кульбаби лікарської за наявністю та вмістом цикорієвої кислоти в присутності трави астрагалу шерстистоквіткового, трави меліси лікарської, плодів глоду колючого, плодів фенхелю та коренів з кореневищами валеріани лікарської.

За допомогою методів ТШХ та УФ-спектрофотометрії розроблено методики визначення діючих речовин в складній фітокомпозиції „Кардіосед”. Визначені якісні та числові показники якості фітокомпозиції: ідентифікація компонентів валеріани лікарської; ідентифікація компонентів астрагалу шерстистоквіткового; вміст суми флавоноїдів (не менше ніж 0,05 %); вміст ефірних олій (не менше ніж 0,1 %); відносна густина (0,895 – 0,901); сухий залишок (не менше ніж 1,8 %); вміст спирту (не менше ніж 66,5 %); вміст важких металів (не більше ніж 0,001%).

Були також розроблені методики визначення цикорієвої кислоти в препаратах кульбаби лікарської, що присутні на фармацевтичному ринку України. В усіх проаналізованих об'єктах була ідентифікована цикорієва кислота. Результати проведених досліджень представлені в табл. 6.

Таблиця 6

Вміст цикорієвої кислоти в препаратах кульбаби лікарської

Препарат	Вміст цикорієвої кислоти, %
Збір „Гепатофіт”	0,0067±0,0004
Збір „Детоксифіт”	0,0153±0,0008
Збір „Нефрофіт”	0,0049±0,0003
Збір „Тоніфіт”	0,0125±0,0010
Краплі „Тонзилгон® Н”	0,00061±0,00005

ВИСНОВКИ