Флуоресцентный иммуноанализ с временным разрешением (стр. 3 из 3)

Моноклональные антитела. Доступность антимышиных IgG, меченных европием, позволила разработать простые методики скрининга клонов, продуцирующих антитела. Метод DELFIA дополняет существующие иммуноферментные методы скрининга моноклональных антител.

Внелабораторные анализы. Ощущается необходимость разработки и создания специальных приборов для каждой сферы применения флуоресценции с временным разрешением. Должны выпускаться автоматические флуориметры двух типов. Приборы первого типа должны быть простыми, надежными, способными работать на сухих элементах питания. В будущем приборы этого типа, как и соответствующие реагенты, должны использоваться и в больницах, и на дому. Такой прибор позволит осуществить довольно сложные клинические анализы, например, непосредственно в операционной или на дому, где он даст возможность самим больным контролировать ход лечения. Приборы второго типа должны обеспечивать оценку профилей определяемых веществ на соответствующих стрипах микропланшетов или дисках.

Безразделительные анализы. Куо и др. описали применение конъюгата производного хелата тербия с Антигеном, полученного с помощью бифункционального хелатирующего агента 1 - EDTА. Интенсивность флуоресценции измеряли непосредственно в супернатантной жидкости, содержащей биологический материал, без добавления усиливающего реагента. Недостатком этой методики является ее невысокая чувствительность. Этот недостаток можно преодолеть за счет более эффективных меток. Флуоресцентные метки такого типа могут содействовать созданию безразделительных методов, основанных на принципе усиления или гашения флуоресценции антителами.

Одновременные анализы. На рис.9 представлены спектры эмиссии европия и тербия. Максимумы эмиссии этих лантанидов расположены при различных длинах волн, что создает возможность их одновременного определения с помощью соответствующих фильтров.

Бадор и др. сообщили об использование вропия и самария в флуоресцентном иммунометрическом анализе с временным разрешением для определения FSH. Можно надеяться, что вскоре будут созданы методы одновременного определения нескольких веществ с помощью антител, меченных хелатами различных лантанидов.

Пути повышения чувствительности анализов. Джексон и Экинс теоретически показали, что максимальную чувствительность обеспечивают неконкурентные методы иммуноанализа и что наиболее перспективно в настоящее время для этих целей применение флуоресценции с временным разрешением. Для этого в свою очередь необходимы метки с максимальной удельной активностью и методы иммуноанализа, обеспечивающие минимальную фоновую флуоресценцию.

4. Пути совершенствования флуоресцентного анализа delfia

Флуориметрия с временным разрешением. Основной недостаток флуоресцентного иммуноанализа связан с необходимостью диссоциации иммунного комплекса перед измерением концентрации европия. Эта операция в целом снижает точность анализа. Кроме того, добавление усиливающего раствора повышает фоновый сигнал. Оба этих недостатка можно преодолеть за счет новых высокофлуоресцирующих хелатов и измерения интенсивности флуоресценции твердой фазы. Применение лазеров и твердотельных фотоумножителей также будет способствовать разработке более чувствительных методов анализа.

Применение других типов фотолюминесценции. Фосфоресцентный иммуноанализ, как и флуоресцентный иммуноанализ с временным разрешением, позволяет устранить помехи компонентов пробы и снизить фоновый сигнал. Сидки и Ландон описали несколько методик иммуноанализа с использованием эритрозина в качестве фосфоресцентной метки. Эмиссия эритрозина затухает в течение нескольких микросекунд и характеризуется большим стоксовым сдвигом. Для получения меченых конъюгатов можно применять эритрозинизотиоцианат и те же химические приемы, что и в случае флуоресцеинизотиоцианата.

Выводы

Радиоактивные маркеры сыграли большую роль в разработке различных методов иммуноанализа для определения самых разнообразных соединений. Однако можно ожидать, что наметившаяся тенденция разработки люминесцентных методов иммуноанализа без радиоактивных меток будет развиваться и в будущем. Действительно, чувствительность определения ионов европия очень высока, а удельная активность меченных европием конъюгатов может превышать активность конъюгатов, меченных радиоизотопами. Следовательно, метод DELFIA может обладать большей чувствительностью, чем метод ИРМА. Применяемые в DELFIA реагенты сравнительно безопасны и легко поддаются захоронению. Меченые вещества очень устойчивы и не теряют активности в течение по меньшей мере 1 года. Метод DELFIA успешно применен для разработки двухсайтовых иммунометричёских анализов белков и прямых конкурентных анализов гаптенов.

Можно надеяться, что введение новых флуоресцентных меток и соответствующих приборов будет способствовать разработке методик, которые можно будет выполнять в палатах больниц, поликлиниках и иа дому. Биохимические и физиологические исследования требуют еще большего повышения чувствительности, и здесь может оказаться очень существенным развитие люминесцентного иммуноанализа.