Лабораторный надзор за гриппом и ОРЗ в г. Воронеже и области в 2006 - 2007 гг.
Агеева О.Т., Жарикова О.С.
Грипп и другие ОРЗ остаются до настоящего времени наиболее распространенными, неуправляемыми и единственными действительно массовыми заболеваниями. Грипп и ОРЗ занимают первое место среди инфекций, вызывающих наибольшее количество смертей в мире. («Хит-парад главных убийц» - данные журнала Medical Microbiology, 2004 год )
В структуре инфекционной заболеваемости Воронежской области грипп и гриппоподобные заболевания составляют 91,7% и остаются одной из наиболее актуальных медицинских проблем.
В последние годы эпидемическая ситуация по гриппу осложнилась появлением высокопатогенных антигенных вариантов вируса гриппа «птичьего» происхождения. Хотя вирус в настоящее время еще не приобрел способности к широкой трансмиссии в человеческой популяции, что означало бы начало новой пандемии, вполне вероятно, что человечество стоит на пороге этого события.
В этой ситуации резко повышается значимость лабораторных исследований по гриппу, обеспечивающих возможность раннего распознавания этиологии пандемии, с последующим проведением всего комплекса противоэпидемических и профилактических мероприятий.
Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ осуществляется согласно приказу №373 от 31 марта 2005 года «О совершенствовании системы эпиднадзора и контроля за гриппом и ОРВИ» и Постановления №13 главного государственного санитарного врача по Воронежской области.
Эпидемиологическим отделом Управления Роспотребнадзора определены ЛПУ, которые входят в состав опорной базы и доставляют материал для исследований согласно графика. Информация о выполнении графика и результаты исследований представляются ежемесячно в Управление Роспотребнадзора. Также в еженедельном режиме данные о результатах исследований отправляются в Федеральный центр по гриппу.
Эпидемиологическая ситуация в 2006 году и 10 мес. 2007г в г. Воронеже и области по заболеваемости острыми респираторными вирусными инфекциями складывалась с тенденцией к сезонному росту. Превышение эпидемического порога в 1,1 – 1,5 раза отмечалось в возрастных группах детского населения 3-6 лет и 7-14 лет.
Для расшифровки этиологии очередного подъема заболеваемости гриппом мы применяли комплекс вирусологических и серологических методов, включающий в себя классический метод выделения вирусов гриппа в клеточной культуре МДСК, постановку РТГА с парными сыворотками и исследования методом флюоресцирующих антител.
Выделение вирусов гриппа
Важным преимуществом этого метода является получение инфекционного вируса, который может быть далее использован для антигенного и генетического анализа, а так же выяснения таких важных свойств возбудителя, как чувствительность к химиопрепаратам, неспецифическим ингибиторам, тропизм к разным системам организма хозяина.
Для размножения вирусы, в отличие от бактерий, используют репродуктивный аппарат зараженной клетки и, следовательно, могут размножаться только в живых клетках организма. ВОЗ была рекомендована перевиваемая культура клеток, полученная из почек собаки породы голубой спаниель – клеточная культура МДСК.
Непременным условием успешного выделения вирусов являются правильный сбор клинических материалов и соблюдение условий доставки материалов в лабораторию. Материалом для изоляции вирусов служит отделяемое из глубоких отделов носовой полости, зева, а так же секционные ткани легкого, бронхов и мозга. Материал отбирают в первые 3 дня болезни. Пробирки с материалом незамедлительно доставляют в лабораторию с соблюдением холодового режима.
В 2006 году по результатам исследования материалов от 400 больных нами было выделено 23 вируса гриппа А/Н3N2/. В 2007 году вирусологическим методом были исследованы материалы от 542 больных с выделением 12 штаммов вируса гриппа В, 11 вируса гриппа А/Н3N2/, 16 штаммов гриппа А/Н1N1/.
Все выделенные штаммы были оттипированы в лаборатории диагностическими сыворотками производства НИИ гриппа и отправлены в Федеральный центр по гриппу для дальнейшего изучения.
В 2006 году первые штаммы вирусов были изолированы 20 февраля (на 8 неделе 2006 года). Наиболее высокая частота выделения этих вирусов отмечена в феврале- марте и составила 9,6% и 8,3% соответственно. В апреле выделяемость вирусов снизилась до 5%. Вирусы выделялись во всех возрастных группах, но самый высокий уровень выделения установлен в возрастной группе старше 15 лет.. Достаточно активная циркуляция вирусов гриппа А/Н3N2/ продолжалась до середины апреля. По данным Федерального центра по гриппу все вирусы относятся к эталонному варианту А /Висконсин/67\05.
В 2007 году первые штаммы вирусов гриппа были изолированы 2 февраля (на 6 неделе 2007 г). Наиболее высокая частота выделения была отмечена также в феврале-марте. Причем вирусы гриппа В преобладали в структуре выделенных штаммов в феврале, а вирусы гриппа А/Н3N2/ и гриппа А/Н1N1/ в марте-апреле. Таким образом в 2007 г сезонный подъем заболеваемости гриппом был смешанной этиологии: с преобладанием вирусов гриппа В в начале сезонного подъема и последующей активизацией (уже весной 2007 года) вирусов гриппа А/Н3N2/ и А/Н1N1/. По результатам антигенного анализа вирусы гриппа А/Н1N1/ были подобны эталону А/Соломоновы Острова/3/06, гриппа А/Н3N2/-эталону А\Висконсин/67\05, гриппа В-эталону В/ Малайзия\2506/04.
Иммунофлуоресцентный анализ
Прямой метод иммунофлуоресцентного анализа позволяет идентифицировать антигены вирусов гриппа и других возбудителей ОРВИ непосредственно в инфицированных клетках. К числу преимуществ метода относится его простота и возможность быстрого анализа клинических материалов с распознаванием широкого круга возбудителей, включая вирусы гриппа, парагриппа, респираторно-сентициальный вирус, аденовирусы.
Этот метод наиболее эффективен в острой фазе заболевания (первые 3 дня). Важнейшим этапом исследования является получение полноценного материала, содержащего достаточно много эпителиальных клеток, которые выстилают глубокие отделы нижних носовых ходов и служат местом репликации вирусов. Необходимо отметить, что ближайшие ко входу отделы носовой полости выстланы плоским или переходным эпителием. Респираторные вирусы не размножаются в этих клетках.
Иммунофлюоресцентным методом за отчетный период было проанализировано 2584 клинических материалов от больных ОРВИ. В 2006 году частота диагностирования гриппа А/Н3N2/ составила 9,7%, гриппа В – 0,5%. Наиболее высокий уровень диагностирования отмечен в феврале и марте и составил 6,7% и 16,5% соответственно. В 2007 году грипп А/Н3N2/ диагностировался с частотой 1,9 %, грипп А/Н1N1/- 4,2%, грипп В -3,9%. Пик заболеваемости совпал с максимальной частотой МФА диагностирования вирусов гриппа. Активную роль в этиологии ОРВИ занимали аденовирусы (12,6% в 2006 году и в 2007 году), вирусы парагриппа (4,5% в 2006 году, 2,7% в 2007 году), респираторно-синцитиальный вирус (1,1% в 2006 году, 0,6% в 2007 году), которые, в отличие от вирусов гриппа, циркулировали на протяжении всего сезона.
Серологический анализ
Серологические реакции, такие, как реакция торможения гемагглютинации
(РТГА), применяются для определения уровня специфических антител в сыворотках больных ОРЗ с целью ретроспективного подтверждения диагноза.
В 2006 году результаты ретроспективных серологических исследований подтвердили данные МФА о ведущей роли вируса А/Н3N2/ в динамике развития эпидемии. Диагностический прирост антител во второй сыворотке выявлен у 24,1% обследованных. Участие вируса гриппа В в заболеваемости сезона 2006 года было незначительным. Грипп В выявлялся у 0,9% обследованных.
В 2007 году смешанный характер эпидемии с участием вируса гриппа А/Н3N2/, А/Н1N1/ и гриппа В был также подтвержден серологической диагностикой.
Диагностическое нарастание титров антител к вирусу гриппа А/Н3N2/ было выявлено у 9,9% больных, к вирусу гриппа А/Н1N1/ у 8,8 % больных и к вирусу гриппа В у 7,8 % больных.
Таким образом можно сделать следующие выводы :
1. Благодаря использованию комплекса методов серологической и вирусологической диагностики удалось расшифровать очередной подъем заболеваемости гриппом и ОРВИ и подтвердить важность адекватного выбора биологического объекта для культивирования вируса.
2. Эпидемический подъем заболеваемости ОРВИ в сезон 2006 года был обусловлен циркуляцией вируса гриппа А/Н3N2/. В 2007 году эпидемический подъем заболеваемости был смешанной этиологии с участием вирусов гриппа А/Н3N2/, А/Н1N1/ и гриппа В.
3. Активную роль в этиологии ОРВИ занимали аденовирусы, вирусы парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус.