Влияние эссенциальных фосфолипидов на структурно-функциональную организацию клеточных мембран т (стр. 2 из 4)
Апробация работы состоялась 18 февраля 1998г. на совместном заседании проблемной комиссии “Медико-социальные и общебиологические проблемы здоровья населения Западно-Сибирского территориально-промышленного комплекса” и кафедры госпитальной терапии с курсом эндокринологии ТГМА. Фрагменты работы доложены на выставке “Медицина и здоровье” (Тюмень, 10-13 сентября, 1996г.), конференции , посвященной 20-летию 2ГКБ (Тюмень, декабрь, 1997), конференции по лечению сердечно-сосудистых заболеваний (Current concepts in the therapy of coronary heart disease. The second update on experimental results and clinical interventions/ Garmich-Partenkirchen, Germany. January, 28-31, 1998).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 5 работ.
Структура и объем диссертации: Диссертация изложена на ... страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов и выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит ... таблиц и ... рисунков.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектом исследования являлись 107 больных ИБС с клиническими проявлениями стабильной стенокардии II-III ФК без тяжелых осложнений (99 мужчин, 8 женщин, средний возраст 53,9±6,6 г.); из них у 65 больных проводилось исследование терапевтического и метаболического эффектов фосфолипидного продукта “Витол”; 42 больных составили группу сравнения. Контрольная группа состояла из 44 практически здоровых лиц - доноров (37 мужчин и 7 женщин, средний возраст 50,2±1,3 г.).
Всем больным проводились общепринятые методы клинического обследования. В период проведения исследования больные не получали аспирин, а также гиполипидемические средства.
Специальные методы исследования
1. Выделение тромбоцитов по методу К.В. Чурина (1991г.) и приготовление липидных экстрактов из взвеси тромбоцитов.
2. Определение содержания фосфолипидов методом тонкослойной хроматографии (В.И. Крылов с соавт., 1978; М. Мейгс, 1975).
3. Определение общего холестерина по методу Златкиса-Зака.
4. Продукты ПОЛ: ШО определялись по методу Bidlack, Ф.З. Меерсон (1979); ДК - по методу В.В. Гаврилова (1988); ТБК-продукты (МДА) - по методу И.Д. Стальной (1977).
5. Показатели антиоксидантной защиты: a-ТФ (Н.Н. Рудакова-Шилина, 1982); СОД (В.П. Верболович, Л.И. Подгорной, 1987); каталаза (M. Karen, Toth et al., 1986; Е. Дубинина с соавт., 1988).
Статистическая обработка данных
Материал диссертации обработан на персональном компьютере Pentium - 100 с помощью пакета статистической обработки данных “Armstat”. Статистическая обработка производилась с использованием t критерия Стьюдента для парных и непарных величин. В обработке данных также использовался корреляционный анализ. Достоверность подсчитывалась с точностью до 0,001. При этом достоверными считали различия при значении p<0,05. Все результаты выражались как M±m.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Особенности липидного состава и ПОЛ в мембранах тромбоцитов у больных ИБС.
У больных стабильной стенокардией по сравнению со здоровыми лицами в клеточных мембранах Тр обнаружено достоверное (p<0,05) возрастание ЛФХ. Параллельно отмечалось статистически значимое (p<0,05) увеличение содержания ОХС, сопровождавшееся ростом соотношения ОХС/ОФЛ по отношению к его уровню у здоровых лиц (Рис 1, 2).
 |  | ||
| Рис. 1. Содержание ОХС в мембранах тромбоцитов | Рис. 2. Соотношение ОХС/ОФЛ в мембранах тромбоцитов | ||
Обращало на себя внимание увеличение доли ЛФХ как продукта метаболизма ФЛ, что согласуется с данными других исследователей (Стукал И.В., Горелюк И.П., 1990) и имеет место при состояниях, сопровождающихся окислительным стрессом, хотя однозначного ответа на вопрос о токсическом или повреждающем эффекте лизофракций нет до сих пор (Биленко М.В., 1989; Грибанов Г.А., 1991). Обогащение ХС мембран Тр отличается увеличением не только жесткости липидного бислоя (Шатилина Л.В. с соавт., 1989; Шалаев С.В., 1993), но и повышением числа мест связывания для эндопероксидов (Бышевский А.Ш., 1996; Gross, 1991).
Таблица 1.
Состояние процессов ПОЛ в мембранах тромбоцитов у больных ИБС (M±m).
| анализируемые показатели, ед. измерения | контрольная группа (n=44) | больные ИБС(n=107) | p |
| ДК, нмоль/мг липидов | 69,5±5,6 | 102,0±7,6 | <0,01 |
| ШО, I/мг липидов | 24,9±1,9 | 33,2±2,6 | <0,05 |
| МДА, нмоль/мг липидов | 6,9±0,9 | 13, 4±2,3 | н/д |
| СОД, у.е. торм/мг белка | 2,2±0,2 | 2,6±0,3 | н/д |
| каталаза , мкмоль/мин/мг белка | 1,5±0,1 | 1,3±0,2 | н/д |
| a-ТФ, нмоль/мл | 3,8±0,3 | 2,6±0,2 | <0.002 |
Параллельно отмечалось достоверное увеличение уровня ДК и ШО, при этом не регистрировалось увеличения содержания МДА. Данные сдвиги не сопровождались изменением активности СОД и каталазы, однако, отмечалось достоверное уменьшение концентрации a-ТФ в клеточных мембранах Тр при стабильной стенокардии (Таб. 1). При этом особое значение имеет обнаруженный дефицит a-ТФ у больных стабильной стенокардией, так как ранее были получены данные о важном значении a-Т в регуляции их функциональной активности Тр (Hendra, 1983; Oda., 1983; Warso, Lands, 1983; Salonen, 1989; Vatassery et al., 1989).
Изучение структурно-функциональных параметров клеточных мембран Тр проводилось с учетом факторов риска ИБС.
Показатели липидной структуры и активности ПОЛ в мембранах Тр у больных ИБС с сопутствующей артериальной гипертонией не имели достоверных различий от таковых у больных без гипертонии.
У пациентов с повышенным весом (ИМТ >25кг/м2) было установлено достоверное (p<0,05) увеличение ОХС и индекса ОХС/ОФЛ по сравнению с больными с нормальным (ИМТ<25кг/м2) весом (Рис 3).
Рис. 3. Содержание ОХС у больных c повышенным весом и больных, потреблявших избыточное количество жиров
У больных ИБС с ИМТ более 25 кг/м2 по сравнению с пациентами с нормальным (ИМТ <25 кг/м2) весом (таб. 2) наблюдалось увеличение ДК (p<0,001) и МДА (p<0,002) на фоне более низкого содержания ШО (p<0,001). По-видимому, ожирение оказывает влияние на способность мембран к утилизации продуктов липопероксидации.
Таблица 2.
ПОЛ и антиоксидантная защита в мембранах тромбоцитов у больных стабильной стенокардией в зависимости от ИМТ
| анализируемые показатели, ед. измерения | ИМТ 20-25 кг/м2 (n=57) | ИМТ >25 кг/м2 (n=50) | р |
| ДК, нмоль/мг липидов | 64,22±4,5 | 110.1±8,2 | <0,001 |
| МДА, нмоль/мг липидов | 9,9±0,9 | 12,1±1,7 | <0,002 |
| ШО, I/мг липидов | 56,98± | 34,33±2,8 | <0,001 |
| СОД, у.е. торм/мг белка | 2,0±0,3 | 2,3±0,2 | н/д |
| каталаза , мкмоль/мин/мг белка | 1,2±0,06 | 1,5±0,3 | н/д |
| a-ТФ, нмоль/мл | 2,2±0,2 | 2,2±0,2 | н/д |
У больных с избыточным потреблением животного жира содержание ОХС и соотношения ОХС/ОФЛ были достоверно (p<0,05) выше, чем у больных ИБС с оптимальным потреблением жиров (Рис.3).
Особого внимания заслуживает достоверное увеличение содержания ОХС (p<0,01), а также соотношения ОХС/ОФЛ (p<0,05) в мембранах Тр у курящих больных ИБС.
Рис. 4. Содержание ШО в мембранах Тр у курящих больных ИБС
Кроме того, у курящих больных стабильной стенокардией (Рис. 4) было установлено достоверное повышение уровня ШО (p<0,01), что согласуется с данными Harats et al. (1990) о том, что курение непосредственно может вызывать окислительный стресс.
Согласно данным корреляционного анализа, были получены определенные взаимосвязи между количеством выкуриваемых сигарет и содержанием ОХС (rxy=+0,367, p<0,05), ШО (rxy=+0,312, p<0,05) и a-ТФ (rxy=-0,422, p<0,05) в мембранах Тр. Эти результаты, в какой-то мере, согласуются с данными Brezinka and Padmos (1993) о том, что риск внутрикоронарного тромбоза достоверно связан с количеством выкуриваемых сигарет.
Таблица 3.
Содержание ЛФХ фракции в клеточных мембранах тромбоцитов в зависимости от наличия факторов риска
| показатели, ед. измерения | больные ИБС | P | |
| некурящие (n=50)0,015±0,003 | курящие (n=57)0,026±0,004 | <0,05 | |
| ЛФХ, мкмоль/мл | ИМТ 20-25 кг/м2 (n=57)0,021±0,002 | ИМТ >25 кг/м2 (n=50)0,031±0,003 | <0,01 |
| не злоупотребляли жирами (n=39)0,013± | злоупотребляли жирами (n=68)0,028±0,003 | <0,02 | |
Увеличение содержания ЛФХ (Таб. 3) как продукта метаболизма ФЛ происходит при воздействии курения, ожирения и избытка животных жиров, как и при других состояниях, сопровождающихся окислительным стрессом (Биленко М.В., 1989; Грибанов Г.А., 1991).
Особого внимания заслуживают наиболее выраженные значения корреляционной зависимости (p<0,001) с отрицательным вектором между ОХС плазмы и ОФЛ (rxy=-0,344) мембран Тр, ФХ (rxy=-0,512) , ФЭА (rxy=-0,343), СФМ (rxy=-0,523) и ФС (rxy=-0,72), что свидетельствует о существенной зависимости концентрации основных фракций ФЛ от уровня ХС плазмы.
Обнаружена прямая корреляционная зависимость (p<0,001) между уровнем ОХС плазмы и накоплением метаболитов ПОЛ - ШО (rxy=+0,357) и МДА (rxy=+0,105).
При проведении корреляционного анализа была установлена отрицательная зависимость между возрастом больных и содержанием ОФЛ (rxy=-0,37; p<0,01) и ФС (rxy=-0,251; p<0,05) в тромбоцитарных мембранах.
Таким образом, клеточные мембраны Тр у больных стабильной стенокардией характеризуются накоплением ЛФХ, ОХС, активацией ПОЛ на фоне сниженной активности неферментативного звена антиоксидантной защиты. Гиперхолестеринемия, ожирение, избыточное потребление животных жиров, артериальная гипертония и курение усугубляют нарушения в структурно-функциональной организации клеточных мембран Тр у больных ИБС, что подтверждает их роль как факторов прогрессирования ИБС и риска артериальных тромбозов.