Биохимическое исследование крови. Материалы, методика, интерпретация результатов биохимии
Исследуемый материал: сыворотка, реже плазма.
Взятие: Натощак, обязательно перед проведением диагностических или лечебных процедур. Кровь берется в сухую, чистую пробирку (одноразовую) (пробирка с белой или красной крышкой). Используют иглу с большим просветом (без шприца, исключения только при трудных венах). Кровь должна стекать по стенке пробирки. Плавно перемешать, плотно закрыть. НЕ ТРЯСТИ! НЕ ВСПЕНИВАТЬ!
Сдавливание сосуда во время взятия крови должно быть минимальным.
Несколько слов о пункции яремной вены. Часто, в практике, случается, что, повозившись пятнадцать минут с венами полумертвого животного, врачи отчаиваются. СДАВАТЬСЯ ВСЕГДА РАНО!!! Один из чудеснейших способов взять кровь, даже при коллапсе, - венепункция ярёмной вены. Особенно прекрасно работает у «никаких» котов с уремией, когда они уже не могут сопротивляться. Важное условие – шерсть в месте пункции лучше сбрить лезвием (лучше видно). Положение животного на боку. Откидываем назад голову (ассистент). Нажимаем указательным пальцем в яремный желоб, небольшой массаж, и … видим прекрасную, очаровательную венку. Продолжая прижимать вену, берем кровь шприцом 2-5 мл с иглой 0,7-0,8. Особенно не любят подобные процедуры владельцы животных и упертые безграмотные врачи. Не устаю повторять: сотни раз брал кровь (и вводил лекарства) через ярёмную вену. ОСЛОЖНЕНИЙ НЕ БЫЛО!!!
Главное, касаемо, в том числе, и пункции мочевого пузыря: стоит ли пренебрегать лёгким и удобным для всех методом, если никогда не делал его, или боишься? Каждый выбирает для себя.
Хранение: Сыворотка или плазма должны быть отделены как можно быстрее. Если есть возможность, отцентрифугируйте на месте. Хранится материал в зависимости от требуемых для исследования показателей от 30 минут (при комн. температуре) до нескольких недель в замороженном виде (сыворотка или плазма, размораживать пробу можно только один раз).
Доставка: Пробирки должны быть подписаны. Доставить кровь следует в кротчайшие сроки по возможности в сумке-холодильнике. НЕ ТРЯСТИ!
НЕЛЬЗЯ доставлять кровь в шприце.
Факторы, влияющие на результаты:
- при долгом сдавливании сосуда повышаются при исследовании концентрации белков, липидов, билирубина, кальция, калия, активности ферментов,
- плазму нельзя использовать для определения калия, натрия, кальция, фосфора и т.д.,
- следует учитывать, что концентрация некоторых показателей в сыворотке и плазме различна
Концентрация в сыворотке больше чем в плазме: альбумин, ЩФ, глюкоза, мочевая кислота, натрий, ОБ, ТГ, амилаза
Концентрация в сыворотке равна плазме: АЛТ, билирубин, кальций, КФК, мочевина
Концентрация в сыворотке меньше чем в плазме: АСТ, калий, ЛДГ, фосфор
- гемолизированная сыворотка и плазма не пригодна для определения ЛДГ, Железа, АСТ, АЛТ, калия, магния, креатинина, билирубина и др.
- при комнатной температуре через 10 минут отмечается тенденция к снижению концентрации глюкозы,
- высокие концентрации билирубина, липемия и мутность проб завышают значения холестерина,
- билирубин всех фракций снижается на 30-50%, если сыворотка или плазма подвергаются воздействию прямого дневного света 1-2 часа,
- физические нагрузки, голодание, ожирение, прием пищи, травмы, операции, внутримышечные инъекции вызывают повышение ряд ферментов (АСТ, АЛТ, ЛДГ, КФК),
следует учитывать, что у молодых животных активность ЛДГ, ЩФ, амилазы выше, чем у взрослых.
Ферменты.
Ферменты – основные биологические катализаторы, т.е. вещества природного происхождения, ускоряющие химические реакции. Также, ферменты принимают участие в регуляции многих метаболических процессов, обеспечивая тем самым соответствие обмена веществ изменённым условиям. Почти все ферменты являются белками. В зависимости от реакционной и субстратной специфичности, различают шесть основных классов ферментов (оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы и лигазы). Всего, на настоящий момент, известно более 2000 ферментов.
Каталитическое действие фермента, т.е. его активность, определяют в стандартных условиях по увеличению скорости каталитической реакции по сравнению с некаталитической. Скорость реакции обычно указывают как изменение концентрации субстрата или продукта за единицу времени (ммоль/л в секунду). Другой единицей активности является Международная единица (Ед.) – количество фермента, превращающего 1 мкмоль субстрата в 1 минуту.
Для клиники основное значение имеют следующие ферменты:
Аспартатаминотрасфераза (АСТ, АсАТ)
Внутриклеточный фермент, участвующий в обмене аминокислот. В больших концентрациях содержится в печени, сердце, скелетной мускулатуре, мозге, эритроцитах. Высвобождается при повреждении ткани.
Референтные интервалы:
для собак – 11 – 42 Ед.;
для кошек – 9 – 29 Ед.
для лошадей – 130 – 300 Ед.
Повышено: Некроз клеток печени любой этиологии, острые и хронические гепатиты, некроз сердечной мышцы, некроз или травма скелетных мышц, жировая дистрофия печени, поражение тканей мозга, почек; применение антикоагулянтов, витамина С
Понижено: Диагностического значения не имеет (редко при недостатке пиридоксина (Витамина В6).
АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗА (АЛТ, АлАТ)
Внутриклеточный фермент, участвующий в обмене аминокислот. В больших концентрациях содержится в печени, почках, В мышцах – в сердце и скелетной мускулатуре. Высвобождается при повреждении ткани, особенно при поражении печени.
Референтные интервалы:
для собак – 9 – 52 Ед.;
для кошек – 19 – 79 Ед.
для лошадей – 2,7 – 20,0 ЕД;
Повышено: Некроз клеток, острые и хронические гепатиты, холангит, жировая дистрофия печени, опухоли печени, применение антикоагулянтов
Понижено: Диагностического значения не имеет
Креатинфосфокиназа (КФК, КК)
КФК состоит из трёх изоферментов, состоящих из двух субъединиц, М и В. Скелетная мускулатура представлена изоферментом ММ (КФК-ММ), мозг – изоферментом ВВ (КФК-ВВ), миокард содержит около 40% изофермента МВ (КФК-МВ).
Референтные интервалы:
для собак – 32 – 157 Ед;
для кошек – 150 – 798 Ед.
для лошадей – 50 – 300 Ед.
у молодняка в период роста активность ЛДГ увеличивается в 2 – 3 раза.
Повышено: Инфаркт миокарда (2-24 ч; высокоспецифична КФК-МВ). Травмы, операции, миокардит, мышечные дистрофии, полимиозит, судороги, инфекции, эмболии, тяжелая физическая нагрузка, повреждение тканей мозга, кровоизлияние в мозг, наркоз, отравление (в т.ч. снотворными), кома, синдром Рейе. Незначительное увеличение при застойной сердечной недостаточности, тахикардии, артритах.
Понижено: Диагностического значения не имеет.
Гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ)
ГГТ присутствует в печени, почках, поджелудочной железе. Тест крайне чувствителен в отношении заболеваний печени. Установление высокого значения ГГТ используется для подтверждения печеночного происхождения активности сывороточной щелочной фосфатазы.
Референтные интервалы:
для собак – 1 – 10 Ед.;
для кошек – 1 – 10 Ед.
для лошадей – 1 – 20 Ед.
Повышено: Гепатит, холестаз, опухоли и цирроз печени, поджелудочной железы, постинфарктный период;
Понижено: Диагностического значения не имеет.
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)
ЛДГ – фермент, катализирующий внутреннюю конверсию лактата и пирувата в присутствии НАД/НАДН. Широко распространен в клетках и жидких средах организма. Повышается при разрушении тканей (искусственно завышается при гемолизе эритроцитов при неправильном взятии и хранении крови). Представлен пятью изоферментами (ЛДГ1 – ЛДГ5)
Референтные интервалы:
для взрослых собак – 23 – 164 Ед.;
для взрослых кошек – 55 – 155 Ед.
для взрослых лошадей – 100 – 400 Ед.
у молодняка в период роста активность ЛДГ увеличивается в 2 – 3 раза.
Повышено: Повреждение ткани миокарда (2 – 7 сутки после развития инфаркта миокарда), лейкозы, некротические процессы, опухоли, гепатиты, панкреатиты, нефриты, мышечные дистрофии, повреждения скелетной мускулатуры, гемолитическая анемия, недостаточность кровообращения, лептоспироз, инфекционный перитонит кошек.
Понижено: Диагностического значения не имеет
Холинэстераза (ХЭ)
ХЭ содержится преимущественно в сыворотке крови, печени, поджелудочной железе. ХЭ плазмы крови - внеклеточный фермент гликопротеиновой природы, образующийся в клетках паренхимы печени.
Референтные интервалы:
собаки - от 2200 Е/л
кошки – от 2000 Е/л
Повышено: Диагностического значения не имеет.
Понижено: Подострые и хронические заболевания и поражения печени (в связи с нарушением синтеза ХЭ гепатоцитами), отравления фосфорорганическими соединениями.
АМИЛАЗА (ДИАСТАЗА)
Амилаза гидролизирует сложные углеводы. Альфа-амилаза сыворотки происходит первично из поджелудочной железы (панкреатическая) и слюнных желез, активность фермента возрастает при воспалении или обструкции. Некоторую амилазную активность имеют и другие органы – тонкий и толстый кишечник, скелетная мускулатура, яичники. У лошадей амилаза представлена, в основном, бета – фракцией.
Референтные интервалы:
для собак (альфа-амилаза) – 685 - 2155 Ед;
для кошек (альфа-амилаза) – 580 - 1720 Ед.
для лошадей (бета-амилаза) – 4,9 - 16,5 Ед.
Повышено: Панкреатит, паротит, почечная недостаточность (острая и хроническая), отравления, сахарный диабет, острый гепатит, первичный биллиарный цирроз печени, заворот желудка и кишечника, перитонит, нарушение электролитного обмена.
Понижено: Некроз поджелудочной железы, тиреотоксикоз, отравление мышьяком, барбитуратами, тетрахлорметаном; применение антикоагулянтов.
Фосфатаза щелочная (ЩФ)
Щелочная фосфатаза содержится в печени, костях, кишечнике и плаценте. Для дифференциации активности ЩФ (печень или кости) используется определение ГГТ (увеличено при заболеваниях печени, и без изменений при заболеваниях костей).