| Определяемая величина | Средняя арифметическая, мг/мл | Дисперсия | Среднее квадратическое отклонение | Средняя арифметическая ошибка | Р | tp | Точность прямых измерений | Доверительный интервал, мг/мл | Относительная ошибка (погрешность), % |
| Телята до приема молозива | 0,495 | 0,0017 | 0,04 | 0,024 | 0,05 | 3,182 | 0,076 | 0,42-0,57 | 15,3 |
| Телята суточного возраста | 1,115 | 0,007 | 0,027 | 0,015 | 0,05 | 3,182 | 0,048 | 1,07-1,16 | 4,3 |
| Телята 2-3-дневного возраста | 1,8225 | 0,01 | 0,1 | 0,017 | 0,05 | 3,182 | 0,54 | 1,28-2,36 | 2,96 |
| Телята 9-10-дневного возраста | 2,0275 | 0,017 | 0,13 | 0,19 | 0,05 | 3,182 | 0,60 | 1,43-2,63 | 2,96 |
Значение Е. coliв патогенезе диареи новорожденных телят и исключительная важность кормления их молозивом, увеличивающем резистентность к колиинфекции указывали Th. Smith and R. B. Little, 1922; Th. Smith and R.B. Little, 1922bеще в 20-х годах нашего столетия. Первоначальным фактором, связанным с восприимчивостью телят к Е. coliинфекции, является отсутствие в их сыворотке иммуноглобулинов [С. С. Gay, S. M. Parish, T. C. McGuire 1982].
| Определяемая величина | Средняя арифметическая, мг/мл | Дисперсия | Среднее квадратическое отклонение | Средняя арифметическая ошибка | Р | tp | Точность прямых измерений | Доверительный интервал, мг/мл | Относительная ошибка (погрешность), % |
| Телята до приема молозива | 0,0375 | 0,01 | 0,1 | 0,002 | 0,05 | 3,182 | 0,006 | 0,032-0,044 | 16,0 |
| Телята суточного возраста | 0,5275 | 0,06 | 0,24 | 0,015 | 0,05 | 3,182 | 0,048 | 0,48-0,57 | 9,09 |
| Телята 2-3-дневного возраста | 0,705 | 0,03 | 0,19 | 0,011 | 0,05 | 3,182 | 0,035 | 0,67-0,74 | 4,96 |
| Телята 9-10-дневного возраста | 0,77 | 0,06 | 0,24 | 0,014 | 0,05 | 3,182 | 0,045 | 0,72-0,81 | 5,84 |
У некоторых телят, которые получали молозиво, этот дефицит имеет место подчеркивал C. C. Gay, 1984. По-видимому, некоторые из этих телят утрачивали способность к абсорбции иммуноглобулинов из молозива в течение 4-6 ч после рождения. Факторы, контролирующие абсорбцию гамма глобулинов у новорожденных телят и потеря гаммаглобулинов из их сыворотки, не известны. Потеря гаммаглобулинов из сыворотки телят случается при экскреции в мочу и фецес при нормальном катаболизме. Количество гаммаглобулинов, экскретирующихся в фецес, заметно увеличивается у телят при диареи.
Телята меньше 2-недельного возраста не продуцируют антител после энтеробактериальной О-антигенной (Е. coli) инокуляции. Способность реагировать на антигенную инокуляцию зависит от возраста телят и естественно от иммуногена [С. С. Gay, 1971].
Глобулиновая фракция молозива, ответственная за защиту телят не была идентифицирована, несмотря на то, что различные антитела, имеющиеся в молозиве, трансформируются в сыворотку неонатальных телят [R. Aschaffenburg, S. Bartlett, S. K. Kon, P. Terry, S. Y. Thompson and D. M. Walker, 1949a; R. Aschaffenburg, S. Bartlett, S. K. Kon, D. M. Walker, C. Briggs, E. Cotchin and R. Lovell, 1949b].
Антигены приготовили из трех серотипов Е. coli. Серотипы О78:К80; О119:К69; О137:К79 были изолированы от телят с инфекционной диареей в учхозе «Кетросу» района Анений Ной. Бактерии выращивали на МПА 8-10 ч при 37° С в бактериальных матрацах. Клетки смывали из агара стерильным физиологическим раствором хлорида натрия и бактериальную суспензию автоклавировали при 120° С в течение 2 ч для разрушения К-антигена. Густую отмытую суспензию смешивали с ацетоном в отношении 1:5 до появления коагуляции (свертывания). Плотную часть материала отбирали на воронке Бюхнера промытой один раз ацетоном и затем высушенной эфиром. Препарат был высушен на воздухе и сохраняли при 4° С.
Сухой порошок применяли для приготовления суспензии антигена, добавляя 1 мг высушенных ацетоном бактерий к 1 мл барбиталового буферам [E. Neter, 1957].
Молозиво получали от 23 коров при первом доении после отела.
Двадцать три пробы цельного молока получали от коров средней лактации, сравнивая уровень антител с уровнем в молозиве из того же стада (коровника). Молочную сыворотку приготовляли из молозива и молока и тестировали на антитела, тем же методом что и сыворотку крови. Пробы крови отбирали у телят вскоре после рождения с интервалом 12-24 ч. Кровь выдерживали при комнатной температуре до появления сгустка и сыворотку отделяли в течение 6 ч. Пробы сыворотки крови, молозива и молока хранили при –20° С до тестирования.
2.2.7.1. Серологический тест. Сыворотку инактивировали при 56° С в течение 30 мин для разрушения комплементной активности. Все сыворотки, в том числе молозивные и молочные, абсорбировали с эритроцитами барана, исключая какие либо антитела к эритроцитам. Агглютинирующие антитела определяли по методу E. Neter, E. A. Gorzynski, R. M. Gino, O. Westphal and O. Luderwitz, 1956, за исключением того, что эритроциты барана были утилизированы и был приготовлен антиген, высушенный ацетоном.
Антиглобулиновый тест применяли для определения титра не агглютинирующих антител [E. Neter, 1957] используя антиглобулиновую (бычью) сыворотку. Все титрации проводили в двукратном разведении, ранг серии от 2-2 до 2-11, применяя 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл 2 % суспензии антигена с эритроцитами барана, которые были промыты 3 раза после антигенной абсорбции.
Агглютинационный тест учитывали после 10-120 минутной выдержки при комнатной температуре.
Антиглобулиновый тест определяли после инкубации в термостате при 37° С в течение 1 ч и выдержки в холодильнике при 4° С в течение 12 ч.
Высшее сывороточное разведение, которое имело хорошо выраженную агглютинацию, учитывали как титр этой сыворотки. Чувствительность антител к 2-меркаптоэтанолу определяли инкубированием сыворотки на 0,1М растворе CH2SH‑CH2OH, при 37° С в течение 30 мин. Резистентность к этой обработке была взята как показание, что антитела не являются макроглобулинами.
2.2.7.2 Абсорбционный тест. Определение специфичности антител абсорбционным методом было проведено с сывороткой молозива и крови телят. Сывороточные образцы получали от телят через 12-24 ч после кормления молозивом, и были разделены по уровню антител против трех антигенов. Сыворотку молозива и сыворотку крови телят абсорбировали с каждым из трех серотипов Е. coli, которые инкубировали в колбе-матраце на МПА.
| Антиген | Тест | Количество проб | Образцы с положительным результатом, % | Средний титр |
| О78:К80 | Агглютинационный | 15 | 93 | 7,86±0,93 |
| Антиглобулиновый | 15 | 100 | 9,07±0,98 | |
| О119:К69 | Агглютинационный | 14 | 100 | 8,43±0,99 |
| Антиглобулиновый | 13 | 100 | 9,46±1,21 | |
| О137:К79 | Агглютинационный | 16 | 100 | 9,62±0,71 |
| Антиглобулиновый | 17 | 100 | 10,23±0,99 |
Микроорганизмы смывали из агара барбиталовым (вероналовым) буфером и центрифугировали при 12000 об/мин в течение 30 мин. Затем бактерии прибавляли к сыворотке крови телят и молозивной сыворотке — 2×1011 бактерий на 1 мл пробы. Абсорбцию проводили при 37° С в течение 60 мин и суспензию центрифугировали при 12000 об/мин в течение 30 мин. Супернатант сыворотки крови телят и молозивной сыворотки удаляли из массы клеток и выдерживали при ‑20° С до тестирования.
Пробы имели достоверный титр антител против всех трех антигенов за исключением 2-х проб, которые не имели агглютинирующих антител против О78:К80, но имели антитела, обнаруживаемые антиглобулиновым тестом в титрах 7-8. В двух других образцах сыворотки молозива отсутствовали антитела, выявляемые антиглобулиновым тестом против О-антигена О137:К79, но имели агглютинирующие антитела в титрах от 2 до 5. Высшую среднюю активность агглютинирующих и антиглобулиновых антител отмечали против О137:К79.
Затем в порядке уменьшения активности антител к О-антигену были О119:К69 и О78:К80.
Титры агглютинирующих и антиглобулиновых антител в сыворотке молока были значительно меньшими, чем в сыворотке молозива и, в дополнение, сфера действия антител была более ограниченной. Учитывали только средний титр антител реагирующих против специфических О-антигенов Е. coli: О78:К80, О119:К69, О137:К79 (табл. 2.14; 2.15).
| Антиген | Тест | Количество проб | Образцы с положительным результатом, % | Средний титр |
| О78:К80 | Агглютинационный | 15 | (3) 20 | 3,0±0 |
| Антиглобулиновый | 15 | (12) 80 | 3,75±0,94 | |
| О119:К69 | Агглютинационный | 14 | (3) 21,4 | 2,67±0,57 |
| Антиглобулиновый | 13 | (7) 50 | 3,86±0,90 | |
| О137:К79 | Агглютинационный | 16 | (4) 25 | 3,25±0,50 |
| Антиглобулиновый | 17 | (13) 76,47 | 4,31±1,08 |
2.2.7.3. Уровень антител против О-антигенов Е. coli в сыворотке крови новорожденных телят.Активность антител не была обнаружена в сыворотке неонатальных телят перед кормлением молозивом. После выпаивания молозива сывороточные образцы от 23 телят взаимодействовали с одним или тремя тестированными О-антигенами. Количество сывороточных проб и процент положительных тест реакций представлен в табл. 2.16, из которой следует, что некоторые сыворотки реагировали только в антиглобулиновом тесте, в агглютинационном тесте реакция была отрицательной. Все сыворотки тест позитивные в агглютинационном опыте, тестировались и в антиглобулиновой реакции. Обработка исследованных сывороток этантиолом показала примерно те титры антител, которые были определены агглютинационным и антиглоблииновым методами.