Таким образом, власть на Дону высочайшими распоряжениями превращалась в наследственную и бесконтрольную. Пользуясь этим, атаман и верхушка стали расхищать войсковую землю.
Придя к власти, Екатерина II постаралась навести порядок на Дону и ограничить власть атамана Ефремова. В 1764 г. она потребовала от атамана сведения, «по каким указам захватили чиновники земли? Сколько доходу войскового и как и куда он употреблялся?». 19 марта 1766 г. был издан указ Екатерины II о размежевании земли Войска Донского от всех соседних земель. Тем же указом было велено отнять земли, захваченные самим атаманом Ефремовым. У всех других старшин и казаков, незаконно владеющих землями, земли изъять и «употребить на пользу общую». Для межевания земли Войска Донского в 1766 г. была послана Межевая комиссия. Так же была назначена комиссия для проверки экономического положения на Дону. Взаимоотношения между верхушкой казачества и центральной властью снова стали обостряться. Опыт войн России XVIII в., особенно опыт Семилетней войны показали сильные и слабые стороны русской армии. Современники отметили малое количество регулярной легкой кавалерии, которая вербовалась русским правительством из сербов и венгров. Сербские и венгерские гусары были профессиональными воинами, но не были так надежны, как русские солдаты, не испытывали к России особых патриотических чувств.
В 1765 г. было решено создать регулярные гусарские полки из слободских казачьих полков. Слободские казачьи полки, как мы помним, были составлены из запорожских и украинских казаков, первыми перешедших на сторону России в XVIII в. и расселенных в «слободах» в верховьях Северского Донца. Всего было создано пять гусарских полков - Сумский, Изюмский, Ахтырский, Харьковский и Острогожский.
Так было положено начало « регулярству», когда из вольных поселенцев, несущих службу по казачьему обычаю, стали создавать регулярные кавалерийские части, служащие по принципу рекрут-, ского набора. Хотя новые гусарские полки отличались высокой боеспособностью и вскоре прославились на всю Россию, слободское население было недовольно своим новым положением. Волна переселенцев хлынула на Дон и далее на свободные земли. Но донские казаки уже неохотно принимали их в свое сообщество, а донская казачья верхушка видела в пришельцах прежде всего рабочие руки для своих земель и хуторов. Cоздание новых казачьих частей. Переведя часть казачьих полков в «регулярство», правительство пыталось еще более упорядочить службу и организацию других казачьих частей, приблизить ее к регулярной. Так, в 1765 г. власти безуспешно пытаются запретить уральским казакам посылать вместо себя на службу заместителей-наемников.
Создаются новые казачьи формирования. Все казаки, служащие по сибирским городам и на Сибирской линии, в 1763 г. объединяются под общим наименованием «Сибирская линия казаков».
Хоперские казаки, возвратившиеся на эту реку после разорения при подавлении Булавинского восстания, объединяются в Хоперский полк (1767 г.). Из переселившихся на Кавказ донских и волгских казаков образуется Моздокский полк (1770 г.); чугуевские казаки, не вошедшие ранее в Чугуевский полк, сводятся в Чугуевскую легкоконную команду (1769 г.). Бахмутский конный казачий полк и вовсе обращается в «регулярство» - переформировывается в Луганский пикинерный полк.
В 1769 г. впервые вводится единообразная форма для отдельных казачьих частей. Первыми ее получают полки, состоящие из донских казаков и расположенные в южных городах, - Азовский, Таганрогский и казачий крепости св. Дмитрия.
Участие казаков в русско-польско-турецкой войне. В начавшейся в 1768 г. новой войне с Турцией, которая была осложнена борьбой с польскими конфедератами, основная тяжесть военных действий легла на донских казаков. 22 тыс. воинов выставило Войско Донское. Ни одно другое казачье войско России не имела таких сил. Кроме того, к началу войны 2 тыс. донских казаков находились в Польше и под руководством А.В. Суворова вели борьбу против конфедератов. Один полк донских казаков находился в крепости св. Дмитрия, часть полков под командованием генерала Медема вместе с калмыками и яицкими казаками действовала на Кавказе. В этой войне особенно отличились казачьи полки Агеева, Бузина, Денисова, Дмитриева, Иловайского, Карпова, Леонова, Мартынова и др. Здесь проявился талант Федора Петровича Денисова, Ивана Федоровича и Матвея Ивановича Платовых.
Донские казаки приняли участие в сражении при Ларге и Кагуле, совершили рейд на Измаил, где у стен крепости разбили большой турецкий отряд. Часть казаков в составе 1-й русской армии громила турок у устья Дуная, штурмовала Силистрию. Вторая часть во главе с походным атаманом Себряковым в составе 2-й русской армии выступила в поход на Крым. В этом походе впервые отличился молодой Матвей Платов. Русская пехота начала штурм Перекопа, а казачья конница вброд через залив Сиваш обошла турок и татар и ударила с тыла. За участие в этом сражении Матвей Платов был награжден и в 20 лет стал войсковым старшиной и командиром полка. Крым был занят русскими войсками.
В 1774 г. был заключен Кучук-Кайнарджий-ский мирный договор, по которому Россия получила выход в Черное море между устьями Буга и Днепра.
Во второй половине XVIII в. казаки больше стали проявлять себя не как участники морских набегов, а как легкая конница. Они быстро освоили уникальный боевой порядок - лаву, который использовался в степи еще со скифских времен. На первый взгляд казачья конница была беспорядочно рассыпана, но наметанный глаз мог определить звенья по 10-12 человек из казаков-«односумов», которые знали друг друга с детства и понимали все без слов. По беззвучному знаку командира они могли сомкнуться стеной, рассыпаться, броситься слева или справа на перехват, налететь по очереди звеньями или все сразу. Каждое звено знало своего лучшего рубаку, он бросался первым, а остальные прикрывали ему тыл и бока. Лучшие казаки составляли «крылышки» построения, оберегали лаву от обхода, внезапной атаки, а лучшие из лучших держались сзади, были «маяком» — подвижным резервом, к которому прибегали в самом крайнем случае. В таком боевом порядке казачий полк был непобедим.