Научно-методический центр пищевых инфекций методы частной бактериологии (стр. 21 из 55)
Серологически бактерии отличается от остальных видов рода Listeria. Антигенный состав идентичен Listeria murrау. Не патогенны для мышей при внутрибрюшинной или внутримозговой инъекции, но клетки в концентрации 5·108 могут быть токсичны для мышей. Не патогенны для беременных кроликов после внутривенного введения. Не вызывают у кроликов или морских свинок конъюнктивит после закапывания в глаза. Выделяются из фекалий шиншиллы. Естественная среда неизвестна.
Listeria murrау
Назван в честь Е. Мurrау – одного из первых исследователей бактерий рода Listeria.
Прямые палочки размером 0,6-0,8 ´ 7-2,5 мкм. Концы закругленные. Встречаются отдельными парами или короткими цепочками, палочки часто располагаются под углом друг к другу или параллельно вдоль длинной оси. Подвижны при культивировании 20-25°С, неподвижны или слабо подвижны при 37°. Капсулы и споры не образуют. Грамположительны. Неустойчивы к кислотам. Факультативные анаэробы. Хорошо растут на триптозном агаре (Дифко) или на кровяном агаре (Дифко) с добавлением 1%-ной (вес/объем) глюкозы. Колонии небольшие (1-1,5-мм через 24 ч.), круглые, гладкие, маслянистые, немного выпуклые с неизрезанными краями. В отраженном свете колонии имеют серый цвет с голубоватым оттенком; при дневном свете их голубой цвет более яркий, а с увеличением размера после дальнейшей инкубации у них начинает появляться желтый оттенок. Когда с помощью рассеивающего света при микроскопировании изучали колонии на поверхности сред, обнаруживали, что небольшие колонии (0,2 мм) имеют тот же самый зелено-синий оттенок, вызванный, как и у вида Listeria monocytogenes; после 2-дневной инкубации у более крупных колоний обнаруживается оранжево-красный оттенок (Н. Welshimeri. et. al., 1971). При 22-25° инкубации на питательном агаре, содержащем глюкозу, у колоний появляется желтый пигмент. В отсутствии глюкозы пигмента не обнаруживают. Негемолитичны на кровяном агаре. Оптимальная температура роста 30-37°С. Температурные границы роста 1-45°С. Не выдерживают 30-минутного нагревания при 60°С. Каталазоположительны. Оксидазоотрицательны. Чувствительны к пенициллину, тетрациклину, хлорамфениколу, эритромицину, новобиоцину, неомицину; резистентны к сульфаниламиду, полимиксину В, к сульфату колистина и налидиксовой кислоте. Не растут на среде Lardner (1966).
Ферментативный метаболизм глюкозы приводит к образованию L+-молочной кислоты и некоторых других продуктов. Из эксулина, амигдалина, целлобиозы, декстрина, галактозы, глюкозы, глицерина, лактозы, фруктозы, мальтозы, маннита, маннозы, силицина, крахмала и трегалозы образуется кислота, а не газ. Некоторые штаммы образуют кислоту из мелибиозы, рамнозы и сорбита. Из метил-D-глюкозида образуется небольшое количество кислоты. Из адонита, арабинозы, дульцита, эритрита, гликогена, инозита, инулина, мелицитозы, раффинозы, сахарозы и ксилозы кислота обычно не образуется. Лакмусовое молоко показывает слабокислую реакцию и незначительную редукцию. Реакции с метиловым красным и Фогес – Проскауэра положительные.
Эксулин гидролизуют. Гиппурат натрия не гидролизуют. Гидролиз крахмала непостоянен.
Твин-20 гидролизуют медленно (14 дней). Твин-80 не гидролизуют. Медленно образуют дезоксирибонуклеазу, рибонуклеазу и фосфотазу. Ксантин, тирозин и хитин не расщепляют. Целлюлозу, желатин, казеин и молоко не гидролизуют. Индол не образуют. Мочевину не образуют. Некоторые штаммы образуют H2S (обнаруживается с помощью реакции со свинцовой бумагой). Серлогически отличаются от вида Listeria monocytogenes. Антигенный состав идентичен антигенному составу Listeria grayi.
После закапывания в глаза кроликов конъюнктивит не вызывают.
Не патогенны ни при внутривенном введении кроликам, ни при внутрибрюшинной инъекции 108 клеток 20-граммовым мышам.
Выделяли из гниющих листьев злаковых (маис); естественной средой обитания, вероятно, являются почва и растения.
Лабораторная диагностика
Материалы для исследования – кровь, СМЖ, слизь из зева, пунктаты увеличенных лимфатических узлов, у новорожденных дополнительно – меконий, пупочная кровь; секционный материал — кусочки мозга, печени, селезенки, лимфатические узлы. Посевы рекомендуется делать в первые 7-10 сутки болезни; кровь (10мл) и СМЖ (2-5 мл) засевают на 100-150 мл глюкозного, глюкозо-печеночного или глюкозо-глицеринового бульона; инкубируют при температуре 37°С до 3 недель. При посеве на глюкозо-кровяной агар отбирают типичные колонии (прозрачные или роговидные), дающие гемолиз. Также можно проводить посев на триптозный агар и просматривать чашки под микроскопом при косом освещении — суточные колонии листерий имеют сине-зеленую окраску.
Общие положения
Листериоз – инфекционное заболевание из группы зооантропонозов, характеризующееся полиморфностью клинического проявления, в последнее время как пищевая инфекция людей с тенденцией к генерализации, септикопиемии, а так же поражению различных органов и систем жизнедеятельности у людей и животных.
Листериоз относится к числу широко распространенных в мире инфекций, что обусловлено выраженной адаптационной способностью возбудителя. Исследования трех последних десятилетий позволили сформулировать заключение о повсеместном распространении данной инфекции в России.
Материалы для исследования
В бактериологическую лабораторию направляют не менее 200 грамм исследуемого субстрата, упакованного в водонепроницаемую тару и желательно в первые 1-3 часа после отбора. Если время доставки образцов свыше указанного срока, то материал допускается направлять в замороженном виде в термосе со льдом.
Порядок исследования материала
Бактериологическое исследование проводят в соответствии с прилагаемой ниже схемой, а идентификацию выросших колоний - по тестам, указанным в таблице 12. Оптимальным решением является постановка на исследование не одной пробы исследуемого образца, а целой серии в 10-12 проб.
Оценка результатов бактериологического исследования.
При соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм признают как бактериальную культуру вида Listeria monocytogenes.
В случае если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Listeria monocytogenes, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления, хранящейся в холодильнике при +4°С.
Общие сроки бактериологического исследования материала в пределах 7 суток.
Рисунок 9. Принципиальная схема выделения Listeria monocytogenes
Серологические исследования. Обычно ставят РА с листериозным диагностикумом.
Фаготипизация. Используют листериозные фаги L 2А и L4А (ВНИИВВиМ).
Таблица 12. Характеристика биологических свойств листерий, штаммов первой серогруппы (шт. 766) и второй серогруппы (шт. 634)
| Шт. 766 | Шт. 634 | |
| Окраска по Граму | + | + |
| Подвижность: 37°С | – | – |
| 22°С | + | + |
| В-гемолиз | + | + |
| Каталаза | + | + |
| ферментация: | ||
| Лактозы | + | + |
| Сахарозы | + | + |
| Глюкозы | + | + |
| Мальтозы | + | + |
| Маннита | – | – |
| Рамнозы | + | + |
| Дульцита | – | – |
| Арабинозы | – | – |
| Инозита | – | – |
| Сорбита | – | – |
| Салицина | + | + |
| Галактозы | – | – |
| Ксилозы | – | – |
| Раффинозы | – | – |
| Эскулина | + | + |
| Фруктозы | + | + |
| Конъюнктивальная проба (проба Антона) | + | + |
Биологическая проба. Лучше всего использовать белых мышей, иммуносупрессированных кортизоном (4-5 мг в/м за 4ч до заражения); после гибели животного (обычно на 2-6 сут.) производят посев материала из различных органов. Следует помнить, что листерии характерино «холодовое обогащение», и для избежания ошибок в диагностике часть патологического материала следует поместить в стерильные пробирки и хранить в течение 5-10 сут. при температуре 4-6°С, а затем подвергнуть повторному исследованию. Ставят конъюнктивальный тест на морских свинках (проба Антона).
Рецепты и способы приготовления питательных сред для выделения листерий
1. Среда с теллуритом калия
(Бакулов и др., 1970).