Смекни!
smekni.com

Научно-методический центр пищевых инфекций методы частной бактериологии (стр. 22 из 55)

К 1 л расплавленного МПА (рН 7,2-7,4) перед разливом в бактериологические чашки добавляют 10 мл 2%-го водно-глицеринового раствора теллурита калия. Добавление к указанной среде 5-10% сыворотки крови крупного рогатого скота улучшает рост листерий.

2. Среда с теллуритом калия и флоромицином или полимиксином

(Бакулов и др. 1970).

К 1 л расплавленного МПА (рН 7,2-7,4) перед разливом добавляют 10 мл 2%-го водно-глицеринового раствора теллурита калия и 0,3-0,5 мл раствора флоримицина или полимиксина (500 тыс. ед. препарата разводят в 10 мл физиологического раствора).

Цвет колонии на среде с теллуритом калия черный.

Предоставленная далее рецептура NN 3-11 предложена Подкомитетом по таксономии листерий и является унифицированной для всех лабораторий, работающих с данным микроорганизмом.

3. Триптозно-фосфатный бульон (ТРВ).

Триптоза 20,0 мг
Декстроза 2,0 г
Хлорид натрия 5,0 г
Динатрий фосфат 2,5 г
Дистиллированная вода 1000,0 мл

Добавьте ингредиенты к воде. Хорошо смешайте. Когда растворится, доведите рН до 7,3. Разлейте и стерилизуйте автоклавированием при 121°С в течение 15 минут.

4. Триптозно-фосфатный бульон с полимиксином В

(Бойсен-Мюллер).

Триптоза 20,0 мг
Декстроза 2,0 г
Хлорид натрия 5,0 г
Динатрий фосфат 2,5 г
Дистиллированная вода 1000,0 мл

Добавьте ингредиенты к воде. Размешайте. Когда растворится, доведите рН до 7,3. Стерилизуйте автоклавированием при 121°С в течение 15 минут. Охладите и добавьте 5,0 г стерильной тиамин-HCl и 3,12 мг полимиксина В к 1 л ТРВ. Перемешайте.

5. Триптозный агар.

Все ингредиенты среды «ТРВ». После растворения добавить бакто-агар «Дифко» – 15,0 г. Стерилизовать автоклавированием при +121°С в течение 15 минут. После охлаждения добавить 5,0 г стерильного тиамин-НСl и перемешать.

6. Сывороточный агар.

После контролирования рН добавьте агар к бульону. Стерилизуйте автоклавированием при +121°С в течение 15 минут. Охладите до +48°..+50°С и добавьте бычью сыворотку. Осторожно перемешайте.

7. Кровяной агар.

Триптоза 10,0 г
Порошок «Лаб-Лемко» (Оксоид) 3,0 г
Хлорид натрия 5,0 г
Бакто-агар (Дифко) 15,0 г
Дистиллированная вода 1000,0 мл

Суспендируйте ингредиенты в воде, кроме агара. Хорошо смешайте. Доведите рН до 7,3-7,4. Добавьте агар и стерилизуйте автоклавированием при 121°С в течение 15 минут. Охладите среду до +48°- +50°С и добавьте 50,0 мл стерильной дефибринированной овечьей (лошадиной) крови. Осторожно смешайте и разлейте в чашки Петри.

8. Бульон Левинталя с трипафлавином и налидиксиновой кислотой

(по Раловичу).

Порошок «Лаб-Лемко» 10,0 г
Пептон 10,0 г
Хлорид натрия 5,0 г
Дистиллированная вода 1000,0 мл
Дефибринированная овечья кровь 50,0 мл

Поместите все ингредиенты в колбу и «проварите» на пару при 100°C в течение 1 часа. Отфильтруйте и доведите рН до 7,4. Стерилизуйте автоклавированием при +121°C в течение 15 минут. Добавьте 2,0 мл 1%-го триптофлавина и 20 мл 2%-го раствора налидиксиновой кислоты. Смешайте, разлейте в пробирки и закупорьте резиновыми пробками.

9. Среда с ацетатом таллия и налидиксовой кислотой (TN).

Питательный бульон 1000,0 мл
Глюкоза 2,0 г
Ацетат таллия 2,0 г
Налидиксовая кислота 40,0 мкг/мл

Налидиксовую кислоту 0,5 г в кристаллах растворяют в 0,5 мл 1%-го раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды и соответствующего объема основной среды перед 15-минутным автоклавированием при +121°С.

10. Среда с тиоцианатом и налидиксовой кислотой (PTN).

Питательный бульон 1000,0 мл
Тиоцианат калия 37,5 г
Налидиксовая кислота 40,0 мкг/мл

Питательный бульон, содержащий тиоцианат калия, стерилизуют в течение 15 минут при +121°С. Затем добавляют налидиксовую кислоту.

11. Агар с триптофлавином и налидиксовой кислотой.

Триптозный агар «Дифко» 41,0 г
Налидиксовая кислота 0,04 г
Дистиллированная вода 1000,0 мл

Налидиксовую кислоту 0,8 г растворяют в 10 мл NaOH. Затем, добавляя дистиллированную воду, доводят до 100,0 мл. 5 мл этого раствора, содержащего налидиксовую кислоту, добавляют к основной среде для получения конечной концентрации 40 мкг/мл. После 15-минутной стерилизации при +120°С среду охлаждают до 70°C. Акрифлавин нейтральный растворяют в стерильной дистиллированной воде для получения 0,5% (вес/объем) раствора. Два миллилитра этого раствора добавляют к среде, содержащей триптозно-налидиксовую кислоту, чтобы получить конечную концентрацию в 10 мкг/мл. Среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам.

12. Мак Брайда листериозный агар MLA

(по прописи Lovett, 1988).

Фенилэтаноловый агар «Дифко» 35,5 г/л
Глицинангидрид 19,0 г/л
Хлористый литий 0,5 г/л
Овечья кровь 5 %

13. Модифицированный листериозный агар Мак Брайда

(по прописи Lovett, 1988)

Среда МLА, но вместо овечьей крови добавляют 0,2% циклогексамида.

14. Селективный агар Мак Брайда

(по прописи Schidt et. al., 1988)

Казеин пептон с триптическими добавками 15,0 г/л
Пептон соевой муки 5,0 г/л
Хлористый натрий 5,0 г/л
Фенилэтиловый спирт 2,5 г/л
Глицин 10,0 г/л
Хлористый литий 0,5 г/п
Агар 15,0 г/л
Дистиллированная вода 1000,0 мл
рН – 7,3

15. Обогащенная среда для выделения листерий

(по прописи Lee, McClain, 1986).

В питательную среду добавляют:

Протеаза пептона 5 г/л
Триптон 5 г/л
Порошок «Лаб-Лемко» 5 г/л
Экстракт дрожжей 5 г/л
Na2HPO4 12 г/л
NaCl 20 г/л
КН2РО4 2,35 г/л
Эскулин 1 г/л
Налидиксовая кислота 20 мкг/л
Акрифлавин 20 мкг/л

16. Агаровая среда для выделения листерий

(по прописи Rodriquez et. al.).

Пептон 3,0 г/л
Неопептон 3,0 г/л
Протеаза пептона 3,0 г/л
Хлористый натрий 5,0 г/л
Эскулин 1,0 г/л
Na2HPO4 · 2Н2О 12,0 г/л
Аммоний-железо сульфат 1,0 г/л
Акрифлавин 0,012 г/л
Налидиксовая кислота 0,050 г/л
Агар 15,0 г/л

17. Среда для выделения листерий (LPM)

Фенилэтаноловый агар «Дифко» 35,5 г/л
Глицин ангидрид 10,0 г/л
Хлористый литий 5,0 г/л
Моксалат 20 мкг/л

18. Селективная среда FDA

(по прописи Schidt et. al., 1988).

Триптический перевар (BBL) 30,0 г/л
Экстракт дрожжей 6,0 г/л
Акрифлавин-HCl 16,0 мг/л
Налидиксовая кислота 40,0 мг/л
Циклогексамид 50,0 мг/л

19. Листериозная селективная среда FDA/IDF-FIL

(по прописи Merck).

Казеиновый пептон 17,0 г/л
Пептон Sojmeal 3,0 г/л
D+ глюкоза 2,5 г/л
Хлористый натрий 5,0 г/л
КН2РО4 2,5 г/л
Дрожжевой экстракт 6,0 г/л
РН – 7,3

20. Среда LEB

Триптикасоевый бульон 1000,0 мл
Экстракт дрожжей 6,0 г/л
К2НРО4 2,5 г/л

Автоклавировать 15 минут при 121°C. Перед применением добавить (после стерилизации фильтрацией) в объеме 0,5% раствор

Акрифлавина-HCl 3,0 мл/л
Налидиксовой кислоты 8,0 мл/л
Раствор 1% циклогексамида в этаноле 40% 5,0 мл/л

21. Селективно-обогащенная среда для листерий

(по прописи Rodriquez et. al., 1985).

Пептон 5,0 г/л
Неопептон 5,0 г/л
Порошок «Лаб-Лемко» 10,0 г/л
Рамноза 2,0 г/л
Хлористый натрий 50,0 г/л
Na2HPO4 · 2H2O 53,22 г/л
КН2РО4 1,35 г/л
Налидиксовая кислота 0,05 г/л
Трипановый голубой 0,08 г/л

22. Селективная среда PAL CAM

(по прописи Merck).

Пептон 23,0 г/л
Крахмал 1,0 г/л
Хлористый натрий 5,0 г/л
Агар-агар 13,0 г/л
Эскулин 0,8 г/л
Аммоний железо (III) сульфат 0,5 г/л
D-маннит 10,0 г/л
Феноловый красный 0,08 г/л
Глюкоза 0,5 г/л
Хлористый литий 15,0 г/л
рН – 7,0

23. Селективная среда для выделения листерий (PAL CAM)

(по прописи Netten et. al., 1989).