Представляет собой Columbia-агар (кровяной агар) с содержанием:
| Глюкозы | 0,05% |
| Полимиксина В | 0,001% |
| Акрифлавина | 0,0005% |
| Хлорида лития | 1,5% |
| Цефтазидима | 0,002% |
| Эскулина | 0,08% |
| Аммоний железо (III) сульфат | 0,05% |
| Маннита | 1,0% |
| Фенолового красного | 0,008% |
(колонии серо-зеленые с черным, с впалым центром и черным ободком на вишнево-красном фоне среды).
(по прописи Lachica, 1990).
Седечно-мозговой агар «Дифко», содержащий:
| Хлористого лития | 0,5% |
| Глицина | 1,0% |
| Цефтазима | 50,0 мкг/мл |
(колонии с синеватым оттенком)
(по прописи Leighton, 1979).
Триптознофосфатный бульон с
| Ацетатом таллия | 200,0 мкг/л |
| Налидиксовой кислоты | 50,0 мкг/л |
(по прописи Jay, 1987).
| Триптон | 20,0 г |
| Хлористый натрий | 10,0 г |
| Д-глюкоза | 5,0 г |
| Дрожжевой экстракт | 2,0 г |
| ТРИС | 7,0 г |
| Агар | 15,0 г |
| 1,2-циклогексанедион | 3,0 г |
| Налидиксовая кислота | 45,0 мкг |
| Фенилэтиловый спирт | 1,0 мл |
| Дистиллированная вода | 1000,0 мл |
рН – 8,2
(по прописи Lucas et. al., 1990).
| Агар с переваром бычьего сердца и мозга «Дифко» | 52,0 г/л |
| Хлорид лития | 15,0 г/л |
| Эскулин | 0,75 г/л |
| Акрифлавин гидрохлорид | 0,005 г/л |
| Дистиллированная вода | 1000,0 мл |
Смесь автоклавируют при +121°C 15 минут, охлаждают до 45°C и добавляют:
| Стерильный цитрат железа аммония | 70 мл 0,7% |
| Теллурит калия | 10 мл 2,0% |
| Полимиксин В | 10 мл 0,1% |
| Натриевая соль нефтазидимапентагидрата | 10 мл 0,2% |
На разлитую в чашки Петри среду проводят посевы, инкубируют при +37°C, затем чашки с колониями охлаждают до +4°C и добавляют 8 мл расплавленного и охлажденного до +45°C агара верхнего слоя, в состав которого входят:
| Сухой бульон из перевара бычьего сердца и мозга «Дифко» | 37,0 г/л |
| Агар | 3,0 г/л |
| Хлористый натрий | 8,0 г/л |
| Суспензия эритроцитов барана | 50,0 мл/л |
Через 14 часов инкубации при 30°C появляется зона гемолиза.
(по прописи Merck).
| Триптоза | 20,0 г/л |
| D-глюкоза | 1,0 г/л |
| Хлористый натрий | 5,0 г/л |
| Витамин В1 | 0,005 г/л |
| Трипафлавин | 0,01 г/л |
| Налидиксовая кислота | 0,04 г/л |
| Агар-агар | 13,0 г/л |
рН - 7,4
(по прописи Merck)
| Пептон | 23,0 г/л |
| Крахмал | 1,0 г/л |
| Хлористый натрий | 5,0 г/л |
| Агар-агар | 13,0 г/л |
| Эскулин | 1,0 г/л |
| Аммонии железо (III) сульфат | 0,5 г/л |
| Хлористый литий | 15,0 г/л |
рН – 7,0
Каждая из указанных питательных сред не лишена недостатков. Часть этих методов, способов и питательных сред дает отличные результаты в некоторых лабораториях, но не во всех. Это можно объяснить различным качеством применяемых химикатов.
Бактерии рода Erysipelothrix
Род Erysipelothrix — прямые или слегка изогнутые палочковидные бактерии (0,8-2,5´0,2-0,4 мкм), имеющие тенденцию образовывать длинные нити длиной до 60 и более мкм; последние могут утолщаться и содержать гранулы. Неподвижны, спор и капсул не образуют; хемоорганотрофы; грамположительны, но в старых культурах могут изменять отношение к окраске по Граму. Факультативные анаэробы; каталазоотрицательны; ферментативная активность слабая — ферментируют глюкозу и некоторые углеводы с образованием кислоты; на кровяных средах дают a-гемолиз. Широко распространены в природе, паразиты рыб и теплокровных.
Типовой вид — Erysipelothrix rhusiopathiae; Такахаши с соавт. (Takahashi et. аl., 1987) описали второй вид — Е. tonsillarum, отличающийся от первого лишь степенью гомологии ДНК. Все штаммы данного вида принадлежат к одному серовару и маловирулентны для свиней.
Erysipelothrix rhusiopathiae открыли Пастер и Тюилье (1882), Леффлер (1886) как возбудитель рожи свиней и Розенбах (1884) как возбудитель ползучей эритемы Бейкера или эризипелоида. Идентичность обоих микроорганизмов установил Вилявин (1955).
Erysipelothrix rhusiopathiae устойчив во внешней среде и распространен повсеместно; на разлагающихся органических субстратах может сохраняться месяцами, а в трупах — до года. При высушивании погибает в течение 3 недель, на прямом солнечном свету — за 12 суток; кипячение убивает его в течение 3-5 минут. Неустойчив к действию дезинфектантов. Резервуар — грызуны, насекомоядные и домашние животные, включая птиц (куры, утки, индейки, голуби и др.). Эризипелоид животных — природно-очаговая нетрансмиссивная инфекция; возбудитель может сапрофитировать на различных сортах мяса и рыбы, человек заражается контактным путем, а заболеваемость носит выраженный профессиональный или бытовой характер. В группу риска относят рыбаков, лесорубов, работников боен, ветеринаров и т.д.
Грамположительная мелкая палочка, часто образующая нитевидные формы; в мазках обычно располагается парами, реже одиночно. Хорошо растет на простых слабощелочных средах; оптимальная среда для культивирования — сахарный бульон; через 10-15 ч отмечают помутнение, через 40-48 ч образуется белый осадок. Растет в температурных пределах 16-41°С, наиболее быстро при температуре 37°С, но наибольший выход клеток получают после культивирования при 33°С. Через 24-48 ч рост скудный, в виде мелких, трудно различимых S-колоний; его несколько усиливает добавление глюкозы и сыворотки. Переход в авирулентные R-формы наблюдают при длительном культивировании на искусственных средах. Нитраты не восстанавливает, эскулин не гидролизует; не ферментирует мальтозу, маннит, рамнозу, глицерин, салицин. Выделяют два варианта возбудителя — suis (свиной) и murisepticum (мышиный); первый также патогенен для голубей и не ферментирует сахарозу, второй непатогенен для голубей и ферментирует сахарозу; по прочим свойствам, в том числе по патогенности для белых мышей, оба штамма идентичны. На желатине через несколько суток культивирования образует тонкие нити, перпендикулярные линии укола, что придает культуре вид ершика для мытья посуды.
По антигенной формуле бактерии данного вида разделяются на три группы: F, B, N. Общим видовым антигеном является антиген N. Антиген В обладает протективными свойствами. От больных свиней чаще всего выделяют штаммы сероварианта А.
Патогенез поражений изучен недостаточно; возбудитель проникает через кожу при ее травматизации; реже наблюдают проникновение через слизистую оболочку зева и ЖКТ. Возникновению заболевания способствуют мацерация и длительное охлаждение кожи. Инкубационный период не превышает 1-2 суток. В месте проникновения возбудителя (в фокусе микро- или макротравмы) возникают ограниченные эритематозные темно-красные или розовато-синюшные пятна диаметром от 1 до 5-10 см. Для очагов характерен эксцентрический рост; по мере роста центр поражений бледнеет, а периферия остается ярко окрашенной; эритема быстро растет (в среднем на 1 см/сут), более выраженно продвигаясь в проксимальном направлении. Гистологически выявляют отек дермы, иногда и подкожной клетчатки, акантоз, периваскулярные и перигландулярные мононуклеарные инфильтраты. У больных возникают отеки и болезненность суставов; в процесс могут быть вовлечены регионарные лимфатические узлы. Для заболевания характерно быстрое течение (обычно не более 2 недель), но артралгии и артропатии могут продолжаться дольше и часто рецидивируют. Перенесенное заболевание не вызывает развития стойкого иммунитета, возможны случаи повторного заражения. При нарушениях иммунитета либо при заражении большой дозой возбудитель может лимфо- и гематогенно диссеминировать в различные органы, вызывая метастазирующий сепсис, пневмонии, менингоэнцефалиты, и приводить к гибели больного.
Обычно клинический диагноз не вызывает затруднений; при необходимости для дифференциальной диагностики с рожистым воспалением проводят посев содержимого очагов (лучше кусочек измененной кожи). Посев производят на обычные питательные среды (рост в виде мелких колоний наблюдают через 18-24 ч при 37°С) с последующей микроскопией выросших колоний. Существенный признак — способность Erysipelothrix rhusiopathiae образовывать H2S и вызывать почернение среды Олькеницкого, что нехарактерно для большинства грамположительных палочек. При генерализованных формах проводят бактериологическое исследование крови (дополнительно при секции — печени, селезенки, увеличенных лимфатических узлов) и ставят биологическую пробу с белыми мышами, иммуносупрессированными кортизоном (4-5 мг в/м за 4 ч до подкожного заражения). Мыши погибают через 3-5 суток, и из органов легко выделить возбудитель.
Питательные среды для культивирования Е. rhusiopathiae