Научно-методический центр пищевых инфекций методы частной бактериологии (стр. 25 из 55)
Абдоминальный актиномикоз наблюдают у 25-50% пациентов; в большинстве случаев первичный очаг локализован в слепой кишке и червеобразном отростке. Прогрессирование процесса сопровождается образованием массивных инфильтратов, симулирующих различные поражения кишечника — злокачественные новообразования, туберкулезный процесс; характерны необычайно обильное образование спаек и развитие спаечной болезни.
Сравнительно редкие поражения — актиномикоз мочеполовой системы, актиномикоз костей (возникает как контактно, так и гематогенно), актиномикоз ЦНС (с развитием менингитов и менингоэнцефалитов) и генерализованный актиномикоз (типа метастазирующего сепсиса).
Лабораторная диагностика
Несмотря на отсутствие особых сложностей, адекватное распознавание актиномикоза остается непростой задачей, что во многом обусловлено неинформированностью клиницистов о его частоте. Наиболее распространенный метод лабораторной диагностики — обнаружение друз Actinomyces в экссудате или гнойном отделяемом из очагов поражения; последние, иначе обозначаемые как серные гранулы (тельца Боллингера) размером в среднем 0,3-2 мм. Они образованы агрегатами мицелия, имеющими вид округлых или овальных базофильных масс с эозинофильными структурами на поверхности. Иногда в мазках можно обнаружить четкообразные атипичные формы Actinomyces israelii, a A. meyeri представлен мелкими неветвящимися клетками. Веское подтверждение диагноза — выделение и идентификация возбудителя (рис. 10).
A. bovis
Возбудитель актиномикоза крупного рогатого скота, реже других видов животных. Естественная среда обитания неизвестна, предположительно, это слизистые оболочки ротовой полости или кишечник животных.
Морфология клетки и тинкториальные свойства типичны для рода. В препаратах из культур обнаруживаются грамположительные палочки, коккобактерии, палочки с утолщенными или разветвляющимися концами, могут присутствовать нити различной длины. В пораженных тканях формируются друзы — скопление клеток с булавовидным утолщением на концах и расходящихся радиально из центра друзы. Центральная часть окрашивается по Граму положительно, периферическая — отрицательно (Спесивцева, 1964).
Рисунок 10. Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителей актиномикозов
Факультативный анаэроб, но в аэробных условиях без добавления СО2 на плотных средах не растет.
На плотных питательных средах образует нитевидные микроколонии за 24 ч при 36°С; позднее — макроколонии диаметром около 2 мм, выпуклые, иногда с вдавленным центром, ровным или волнистым краем, непрозрачные, белые, серо-белые, кремовато-белые, шероховатые или гладкие, мягкие. Рост медленный, типичные колонии формируются к 14-15 дню культивирования. На кровяном агаре вокруг колоний может наблюдаться зона b-гемолиза. В жидких средах образует мучнистый осадок (Курасова, Костин, Малиновская, 1971).
Не образует каталазу, цитохромоксидазу, не редуцирует нитраты и нитриты, тест Фогес-Проскауэра отрицательный, с метиловым красным — положительный. Продуцирует Н2S, не гидролизует ксантин, тирозин, твин-20, 40, 60, 80, крахмал, лецитин, гиппурат, гуанин, желатин, казеин, часть штаммов гидролизует эскулин. Не расщепляет мясо, не разжижает свернутую сыворотку, в молоке образует кислоту, пептонизации нет. Образует ДНКазу (но не липазу и гиалуронидазу). Не деаминирует аргинин, аланин. Расщепляет сахарозу, часть штаммов — мелибиозу, инертен по отношению к раффинозе, рамнозе, салицину, рибозе, сорбиту, трегалозе, ксилозе.
В эксперименте при подкожном, внутрибрюшинном и внутривенном заражении культурой восприимчивы мыши.
A. viscosus
Вызывает некоторые формы актиномикоза у человека, его изолируют при актиномикозе свиней, собак, кошек. Естественная среда обитания — слизистые ротовой полости.
Морфология клетки соответствует общей родовой характеристике.
Факультативный анаэроб. Температурный оптимум 35-37°С. На плотных средах хорошо растет в обычных аэробных условиях и с повышенный содержанием СО2, в анаэробных условиях не растет без наличия в атмосфере СО2.
Микроколонии нитевидные. Макроколонии диаметром до 2 мм и более, плоские или возвышающиеся, с ровным или волнистым краем, с нитевидными отростками, прозрачные или непрозрачные, белые, серо-белые, кремово-белые, шероховатые или гладкие, сухие, мягкие или мукоидные. Гемолитической активностью не обладает.
Образует каталазу. Тесты на редукцию нитратов, цитохромоксидазу, гидролиз эскулина, крахмала, твин-40, 60, закисление и свертывание молока, деаминацию аргинина, образование кислоты из мелибиозы, рибозы, салицина, крахмала, трегалозы варьируют в зависимости от штамма. Положительные реакции с метиловым красным, раффинозой, сахарозой, на сероводород (TSI-arap).
Отрицательные реакции на редукцию нитритов, Фогес-Проскауэра, на гидролиз аденина, казеина, желатина, гуанина, гиппурата, гипоксантина, лецитина, твин-20, -80, тирозина, ксантина. Сыворотку не разжижает, казеин молока не пептонизирует, липазы, ДНКазы, гиалуронидазы не образует. Не деаминирует аланин. Не образует кислоты из мелецитозы, рамнозы, сорбита, сорбозы, ксилозы.
Известны два серовара (1,2), отличающиеся по физиологическим характеристикам. В пределах данного вида выделяют группу атипичных штаммов. Близки по своим свойствам группы актиномицетов, имеющих статус промежуточных между видами A. naeslundii и A. viscosus.
В эксперименте патогенен для мышей и хомяков.
A. hordeovutaeris
Обнаруживают при висцеральных абсцессах, перитонитах, артритах у собак.
Морфология бактериальной клетки типична для родовой характеристики.
Факультативный анаэроб, растет на плотных средах в аэробных и анаэробных условиях при избытке СО2 в атмосфере. Температурный оптимум 35-37°С. Рост стимулирует добавление в питательные среды 10—20% фетальной сыворотки крови.
Микроколонии нитевидные, макроколонии (14 дней культивирования) размером около 2 мм, приподнятые, с волнистым краем, с нитевидными отростками, непрозрачные, белые, серо-белые, кремово-белые, шероховатые, сухие или мягкие.
Обладает слабой каталазной активностью, гидролизует эскулин, образует кислоту из мелибиозы, раффинозы (слабо), трегалозы, ксилозы, не утилизирует рамнозу и рибозу.
A. pyogenes
Ранее вид описывали под названием Corynebacterium pyogenes. Обусловливает гнойные процессы у животных, в том числе маститы коров, перитониты свиней. Среда обитания — слизистые оболочки.
Морфология клеток типична для родовой характеристики.
Факультативный анаэроб. Температурный оптимум 35-37°С. На поверхности плотных питательных сред в анаэробных условиях растет при избытке СО2 в атмосфере.
Нитевидные микроколонии не образует, макроколонии имеют диаметр около 2 мм и более, выпуклые, с ровными краями, непрозрачные, белые или серо-белые, гладкие, мягкие; вокруг колоний на кровяном агаре просматривается зона b-гемолиза.
Каталазу не образует, нитриты и нитраты не редуцирует, сероводород не образует, гидролизует казеин и желатин, не гидролизует аденин, эскулин, гуанин, гипоксантин, лецитин, твин-20, 60, 80, тирозин, ксантин. Часть штаммов гидролизует крахмал и твин-40. Молоко закисляет, свертывает, пептонизирует. липазу, гиалуронидазу не образует, синтезирует ДНКазу. Не деаминирует аланин, аргинин. Образует кислоту из рибозы и крахмала, часть штаммов расщепляет с образованием кислоты мелецитазу, сорбит, трегалозу, ксилозу. Микроорганизм инертен по отношению к мелибиозе, раффинозе, рамнозе, салицину, сахарозе.
Фильтраты культур токсичны при внутреннем введении для лабораторных животных.
A. naeslundii, A. odontolyticus и A. meyeri изолируют при различных патологических состояниях человека. О патогенности A. howellii., A. denticolens данных не имеется.
A. suis
Вид с неопределенным положением. Изолируют при актиномикозе молочной железы свиней.
Бактериальные клетки представляют грамположительные палочки дифтероидной формы, иногда кокковидной, V-, Y- или Т-формы, короткие или длинные нити.
Факультативный анаэроб. Температурный оптимум 35-37°С. На плотных питательных средах в аэробных условиях при избытке СО2 растет хорошо. В анаэробных условиях удовлетворительно растет без СО2 и при его избытке.
Колонии гладкие, непрозрачные, размером до 2 мм, выпуклые, центр может иметь углубление, края волнистые с отростками, цвет белый, серо-белый. Могут быть шероховатыми или гладкими, сухими или мягкими.
Каталазу не продуцирует, нитраты редуцирует, тест Фогес-Проскауэра отрицательный, с метиленовым красным — положительный, желатин не гидролизует. Образует кислоту из раффинозы, салицина, крахмала, сахарозы, трегалозы, часть штаммов не образует кислоту из рамнозы, сорбита, ксилозы.
A. humiferis
Обитатель почвы, имеет статус вида «incertae sedis». Патогенными свойствами не обладает.
Питательные среды для культивирования актиномицетов
Питательные среды и условия культивирования актиномицетов подбирают с учетом отношения конкретного вида к молекулярному кислороду, потребности в сыворотке крови и некоторых ростовых факторах.
Сердечно-мозговой бульон (пропись фирмы «Дифко», 1982). В 1000 мл дистиллированной воды растворяют мозгового отвара (сухого) — 12,5 г, сердечного отвара — 5,0 г, протеазопептона — 10,0 г, декстрозы – 2,0 г, натрия хлорида—5,0 г, двунатриевого фосфата -2,5 г. Устанавливают рН 7,4, стерилизуют при 121°С 15 минут.
Сердечно-мозговой агар. Готовят на основе сердечно-мозгового бульона, добавляя 2% агара.
Среды пригодны для культивирования A. israelii и A. bovis (Conant, 1950).
Czapek Dox-агар (пропись фирмы «Дифко», 1982). В 1000 мл дистиллированной воды растворяют натрия нитрата — 2,0 г, калия хлорида — 0,5 г, магния глицерофосфата — 0,5 г, железа сульфата — 0,35 г, калия сульфата — 0,35 г, сахарозы — 30 г, агара — 12 г. Стерилизуют при 115°С 20 минут, рН 6,8.