643.45312116.00001-01 34 01-ЛУ
АНАЛИЗ ФРАКЦИЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ
Руководство пользователя
643.45312116.00001-01 34 01
Листов 30
2006
литера О
643.45312116.00001-01 34 01
СОДЕРЖАНИЕ
1. Введение . . . . . . . . . . 3
1.1. Электрофорез белков сыворотки крови . . . . . 3
1.2. Электрофорез липопротеидов . . . . . . 4
2. Назначение и условия применения . . . . . . 6
2.1. Основные показатели . . . . . . . . 6
2.2. Требования к необходимым техническим средствам . . . 6
2.3. Требования к входной информации . . . . . . 7
3. Подготовка к работе . . . . . . . . 7
4. Описание операций . . . . . . . . 7
4.1. Описание меню . . . . . . . . . 7
4.2. Назначение кнопок на основном экране. . . . . . 8
4.3. Описание программы обработки белковых фракций сыворотки крови . 8
4.4. Описание программы обработки данных электрофореза липопротеидов 16
4.5. Описание программы обработки данных электрофореза фракций ЛДГ . 20
4.6. Описание программы обработки данных электрофореза фракций
Гликозамингликанов . . . . . . . . 20
4.7. Формирование интерфейсов новых анализов . . . . 20
5. Аварийные ситуации . . . . . . . . 23
6. Рекомендации по освоению . . . . . . . 23
7. Инсталляция программы . . . 23
8. Словарь используемых терминов . . . . . . 25
9. Приложения. . . . . . . . . . 26
643.45312116.00001-01 34 01
1. ВВЕДЕНИЕ
В крови человека содержится сложная смесь белков и белково-липидных комплексов, имеющих функциональные отличия. Известно несколько методов фракционирования сыворотки крови. Одним из наиболее информативных является электрофорез, широко используемый в клинических исследованиях, который позволяет определить качественный и количественный состав сыворотки крови.
Электрофорез - это движение заряженных частиц под действием внешнего электрического поля. Основой электрофореза является разная скорость движения молекул в электрическом поле, определяемая размерами и разрядом частиц. Если нанести на ацетатцеллюлозную пленку каплю сыворотки крови и поместить пленку во внешнее электрическое поле, то в результате электрофореза на пленке останется след от движения различных фракций. Этот след представляет собой дорожку, на которой после окрашивания ясно видны места концентрации различных фракций. По этим следам (дорожкам) можно определить процентное содержание и содержание в г/л различных белковых фракций в пробе, а также тип липопротеидограмм по Фредриксону.
1.1. Электрофорез белков сыворотки крови
Методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы можно получить 5 (и более) белковых фракций. Нормальный диапазон величин белковых фракций в зависимости от типа красителя приведен ниже (данные указаны по публикации “Электрофорез белков сыворотки крови. Методические основы и диагностическое значение” В.Н.Титов, В.А.Амелюшкина изд. ОПТИМУМ ПРЕСС Москва 1994).
Таблица 1.
| Белковые | Тип красителя | ||
| фракции | пунцовый С | бромфениловый синий | амидо-черный |
| Альбумины | 56,5 - 66,8 | 53,9 - 62,1 | 57,7 - 69,8 |
| a1-глобулин | 3,5 - 6,0 | 2,7 - 5,1 | 1,4 - 5,4 |
| a2-глобулин | 6,9 - 10,5 | 7,4 - 10,2 | 4,4 - 12,2 |
| b-глобулин | 7,3 - 13,0 | 11,7 - 15,3 | 7,2 - 13,8 |
| g-глобулин | 12,8 - 19,0 | 15,6 - 21,4 | 18,8 - 21,6 |
При многих заболеваниях изменяется процентное соотношение отдельных белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы (диспротеинемия).
Увеличение содержания в крови альфа-глобулинов, включающих в себя белки острой фазы (С-реактивный белок, a1-гликопротеид, a1-антитрипсин, a2-макроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобин и др.), характерно для острых воспалительных процессов. Во фракцию a2-глобулинов входит большинство гликопротеидов. Содержание a2-глобулинов увеличивается также при различных хронических заболеваниях, злокачественных новообразованиях, метастазировании опухолей, травмах, ревматизме, инфаркте миокарда.
Повышение b-глобулинов в сыворотке крови чаще наступает при гиперлипопротеидемиях, застойной желтухе, гепатите, бетамиеломах.
Фракция g-глобулинов состоит главным образом из иммуноглобулинов. Увеличение этой фракции связано с интенсификацией иммунологических процессов при разных патологических состояниях.
Электрофорез белков сыворотки крови имеет диагностическое значение в наблюдении за динамикой патологического процесса, оценке эффективности медикаментозного лечения.
643.45312116.00001-01 34 01
1.2. Электрофорез липопротеидов
Липиды - группа разных по химической природе биологически важных веществ, проявляющих близкие физические и физико-химические свойства.
К липидам относят жиры (нейтральные), именуемые обычно триглицеридами (триацилглицеринами), холестерин (общий, свободный и связанный), фосфолипиды (липиды, содержащие в качестве обязательного компонента фосфор), а также гликолипиды. Большинство липидов обнаруживается в крови не в свободном состоянии, а в качестве белково-липидных комплексов (липротеидов), для разделения которых с успехом могут быть использованы методы электрофореза.
В зависимости от плотности и электрофоретической подвижности липопротеиды классифицируются на липопротеиды высокой плотности (ЛПВП, или альфа-ЛП), липопротеиды низкой плотности (ЛПНП, или бета-ЛП), ), липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП, или пре-бета-ЛП) и хиломикроны (ХМ).
Состав и некоторые свойства липопротеидов сыворотки крови
Таблица 2.
| Критерии оценки липопротеидов (ЛП) | Типы липопротеидов | Хиломикроны | ||
| альфа-ЛП (ЛПВП) | бета-ЛП (ЛПНП) | пре-бета-ЛП (ЛПОНП) | ||
| Плотность (кг/л) | 1,063-1,21 | 1,01-1,063 | 1,01-0,93 | < 0,95 |
| Молекулярная масса (дальтоны) | от 180 000 до 380 000 | 2 200 000 | 3 000 000 - 128 000 000 | - |
| Размер молекул и частиц (нм) | 7,0 - 10,0 | 10,0 - 30,0 | 200,0 | > 200,0 |
| Всего белков (%) | 50 - 57 | 21 - 22 | 5 - 12 | 2 |
| Всего липидов (%) | 43 - 50 | 78 - 79 | 88 - 95 | 8 |
| Свободный холестерин (%) | 2 - 3 | 8 - 10 | 3 - 5 | 2 |
| Эстерифицированный холестерин (%) | 19 - 20 | 36 - 37 | 10 - 13 | 4 - 5 |
| Фосфолипиды (%) | 22 - 24 | 20 - 22 | 13 - 20 | 4 -7 |
| Холестерин (общий) | 1,0 | 2,3 | 0,9 | 1,1 |
| Триглицериды (%) | 4 - 8 | 11 - 12 | 50 - 60 | 84 - 87 |
Липопротеидеграмма, полученная методом электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке, в зависимости от используемого буфера позволяет идентифицировать 4-5 фракций белково-липидных комплексов: хиломикроны, остающиеся на старте, бета-, пре-бета- и альфа-липопротеиды. При использовании трис-гиппуратного буфера возможно наблюдать также наиболее быстро движущийся комплекс альбумина со свободными жирными кислотами (при использовании буферных растворов других типов этот комплекс не отходит от фракции альфа-ЛП).
Для классификации полученных липопротеидеграмм обычно пользуются таблицей Фредриксона (Таблица 3).
643.45312116.00001-01 34 01
Таблица 3
| Тип | Холе-стерин плазмы | Тригли-цериды плазмы | a-ЛП | Преb-ЛП | b-ЛП | хило-мик-роны | Комментарии | Клинические проявления первичные | Клинические проявления вторичные |
| норма | |||||||||
| Гиперхиломик- | В детском возра- | Алкоголизм, ди- | |||||||
| ронемия. | сте (гепатоспле- | абет. ацидоз, ди- | |||||||
| I | + | ++++ | Избыток хило- | номегалия, абдо- | сглобулинемия, | ||||
| микрон | минальная коли- | гипотиреоз, | |||||||
| ка, панкреатит) | панкреатит | ||||||||
| Гипер-b-липо- | Ранний атероск- | Избыток жиров | |||||||
| протеидемия. | лероз (коронаро- | в питании, гипо- | |||||||
| IIa | + или | N | Избыток ЛПНП | склероз, инфаркт | реоз, заболева- | ||||
| ++++ | (Повышена b- | миокарда, коагу- | ния печени, неф- | ||||||
| фракция) | лопатия), ксантоматоз. | ротич. синдром, порфирия.0 | |||||||
| Гипер-b-липо- | ИБС и инфаркт | Диабетический | |||||||
| протеидемия. | миокарда в срав- | ацидоз, заболе- | |||||||
| IIb | + или | + или | Избыток ЛПНП и | нительно раннем | вания печени, | ||||
| ++++ | ++++ | ЛПОНП (Повы- | возрасте, бугор- | болезнь Тэнжи | |||||
| шена преb- и осо- | чаиые ксантомы. | ||||||||
| бенно b-фракция) | |||||||||
| Гипер-b- и ги- | Ранний атеро- | ||||||||
| пер-пре-b-липо- | склероз, коро- | ||||||||
| III | ++ | ++ | протеидемия | нарная недоста- | |||||
| (дисбета-липо- | точность, | ||||||||
| протеидемия). | ксантоматоз | ||||||||
| Гипер пре-b-ли- | Ранний атеро- | Алкоголизм, | |||||||
| попротеидемия | склероз, ИБС, | синдром Кушин- | |||||||
| IV | N или | + или | Избыток ЛПОНП | поражение пери | га, диаб. ацидоз, | ||||
| + | ++++ | (Повышена преb- | ферич. сосудов. | панкреатит | |||||
| фракция) | |||||||||
| Гипер преb- и | Ожирение, пан- | Алкоголизм, | |||||||
| гиперхиломик- | креатит, анги- | диабетич. аци- | |||||||
| V | + | ++ | ронемия | опатии | доз, нефротич. | ||||
| Избыток хиломи- | синдром, | ||||||||
| крон и ЛПОНП | панкреатит | ||||||||
| (Повышена преb-фракция) |
1.3. Программное средство “Анализ фракций сыворотки крови” используется для обработки результатов электрофореза сыворотки крови. Применяется в клинико-диагностических и научных лабораториях медицинских учреждений и институтов.