После просмотра микрокультур весь материал необходимо подвергнуть автоклавированию.
6 Выдача заключений по результатам лабораторного исследования на особо опасные микозы
После проведения соответствующих этапов лабораторного исследования на особо опасные микозы в определенные сроки можно давать следующие заключения о его результатах. В расчетные сроки не включено время, необходимое для подготовки проб (разбор проб и предварительная очистка, фильтрование, разведение или концентрирование материала, разделение на аликвоты).
Предварительные результаты специфической индикации
При исследовании материала из объектов внешней среды, а также сельскохозяйственной продукции:
- через 2-4 ч, по результатам МФА;
- через 2-6 ч, по результатам РНГА, ИФА;
- через 6-8 ч, по результатам ПЦР.
При исследовании биологического материала от людей и животных:
- через 1-6 ч, по результатам МФА;
- через 2-6 ч, по результатам ИФА;
- через 6-8 ч, по результатам ПЦР;
- через 1-3 суток, по морфологии микрокультур.
Окончательные результаты специфической индикации
При исследовании любого материала, подозрительного на зараженность возбудителями особо опасных микозов, через 2-10 сут на основании:
- результатов МФА и ПЦР с исследуемым материалом из среды накопления.
Окончательные результаты полного лабораторного анализа
При исследовании любого материала, подозрительного на зараженность возбудителями особо опасных микозов, через 15-35 сут на основании:
- получения «чистых» культур особо опасных микромицетов в двух фазах (дрожжевой и мицелиальной);
- морфологии клеток в мазках из выросших колоний;
- патологоанатомической картины у забитых на 14-30 сутки или павших белых мышей, обнаружения паразитической формы возбудителей особо опасных микозов в тканях биопробных животных и морфологии колоний при посеве органов на питательном агаре;
- результатов ПЦР.
Диагноз у человека считают установленным при наличии соответствующей клинической картины, эпидемиологического анамнеза и положительных результатов одного из нижеперечисленных способов:
- выделение из патологического материала культуры микромицетов II группы патогенности и гибель хотя бы одного зараженного лабораторного животного и выделение из его органов культуры со свойствами, характерными для возбудителей особо опасных микозов;
- выделение культуры возбудителей особо опасных микозов из предполагаемого источника.
Хранение штаммов возбудителей особо опасных микозов
Штаммы микромицетов II группы патогенности поддерживаются в сапрофитической фазе путем периодических пересевов на плотных питательных средах. В качестве основной среды используют плотную среду Сабуро с левомицетином (50 г/л), а частота пересевов составляет 1 раз в 4 месяца.
7 Режим работы в лабораториях, работающих с микромицетами II группы патогенности (опасности)
Все работы с возбудителями особо опасных микозов должны проводиться в строгом соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
1. В случае аварии во время работы в лаборатории с заразным материалом, как то: бой посуды с посевами, разбрызгивание из шприца или пипетки жидкостей, содержащих возбудителей глубоких микозов, а также во всех других случаях, ведущих к загрязнению заразным материалом окружающих предметов, одежды и открытых частей тела самих работников, немедленно принимаются следующие меры:
а) если не было разбрызгивания заразного материала в воздухе сотрудник, не выходя из комнаты тотчас же вызывает заведующего лабораторией или руководителя учреждения, включает бактерицидную лампу и одновременно приступает к обеззараживанию дезинфицирующими растворами (5% раствор фенола, лизола, формальдегида) всех открытых частей тела, если на них попал заразный материал или имеется подозрение на его попадание;
б) в соседней комнате с пострадавшего снимается зараженная одежда, в последнюю очередь маска, а находившиеся под одеждой подозрительные на соприкосновение с заразным материалом части тела пострадавшего подвергаются обработке дезинфицирующими растворами;
в) сотрудник, оказывающий помощь пострадавшему, должен быть одет в противочумный костюм 1 типа;
г) в глаза и нос пострадавшему вводят несколько капель 1 % раствора азотно-кислого серебра, рот и горло прополоскивают несколько раз раствором перманганата калия 1:2000;
д) после предварительного обеззараживания пострадавший должен принять душ и надеть чистую одежду;
е) снятая с пострадавшего одежда подвергается дезинфекции;
ж) сотрудник, помогавший потерпевшему аварию, проводит дезинфекцию помещения, где произошла авария, объем и вид которой определяется руководителем учреждения в зависимости от характера аварии;
з) сотрудник, проводивший дезинфекцию после снятия одежды и ее дезинфекции, также принимает душ и надевает чистую одежду;
и) если имело место разбрызгивание зараженного материала (бой посуды с культурой, разрыв шприца и т.п.), сотрудники, находившиеся в комнате, немедленно выходят из нее в соседнее помещение, плотно закрывают за собой дверь, чтобы не иметь дальнейшего контакта с заразным материалом, распыленным в воздухе. После этого осуществляют все вышеуказанные меры дезинфекции и санобработки.
2. В случае подозрения на инфицирование пострадавший должен находиться под наблюдением терапевта или инфекциониста в течение 3 недель с обращением внимания на явления со стороны дыхательных путей, эритематозные высыпания и другие симптомы.
3. Вопрос о применении профилактического лечения решается в каждом конкретном случае.
Профилактическое лечение может быть назначено лишь при подозрении на массивное заражение спорами грибов при аварии с разбрызгиванием заразного материала в большом объеме.
4. В случае подозрения, что сотрудник учреждения заболел кокцидиоидомикозом, гистоплазмозом, бластомикозом или паракокцидиоидомикозом, руководитель учреждения обязан немедленно сообщить об этом руководству Роспотребнадзора.
8 Профилактика особо опасных микозов
Специфическая профилактика особо опасных микозов до сих пор не разработана.
Экстренная профилактика особо опасных микозов путем введения медикаментозных средств не применяется. Гуморальные антитела при микозах хотя и формируются, но защитной роли не играют.
Наиболее эффективными в эндемичных очагах глубоких микозов являются меры личной и общественной профилактики. Они связаны с возможностью предотвращения аэрогенного попадания грибов в организм. Для этого используются обычные респираторы.
Общественные меры профилактики (особенно при кокцидиоидомикозе) связаны с увлажнением почвы, асфальтированием площадок, примыкающих к жилищу и т.д. В эндемичных очагах гистоплазмоза рекомендуется ликвидация мест скопления птиц (особенно, скворцов).
Учитывая высокую опасность внутрилабораторных заражений возбудителями особо опасных микозов, при работе с ними предусмотрены меры безопасности, регламентированные санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
Агар Сабуро
- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1,0 г
- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 4,0 г
- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%
- Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – до 100 мл
- Левомицетин (хлорамфеникол) – 0,005%
Агар Чапека
- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 20,0 г
- Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, чда,
ГОСТ 2493-75 – 1,0 г
- Натрий азотнокислый, хч, ГОСТ 4168-70 – 3,0 г
- Калий хлористый, хч, ГОСТ 4234-77 – 0,5 г
- Магний сернокислый, 7-водный, хч, ГОСТ 4523-77 – 0,5 г
- Железо (II) сернокислое, 7-водное, хч, ГОСТ 4148-78 – 0,015 г
- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%
- Водопроводная вода – 1 л
Среда Фрэнсиса
- Мясной бульон – 1000 мл
- Дефибринированная кровь (кроличья или лошадиная) – 8%
- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%
- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 1%
- Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%
- L-Цистеин, ч, ТУ 6-09-3251-73 – 0,1%
- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%
Среда применяется для выращивания дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза из мицелиальной, реже для хранения музейных культур дрожжевой фазы возбудителя.
Сердечно-мозговой агар
- Вытяжка из говяжьего мозга – 20%
- Вытяжка из говяжьего сердца – 25%
- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%
- Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%
- Натрий фосфорнокислый двузамещенный, чда, ГОСТ 11773-76 – 0,25%
- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 0,2%
- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%
Среда применяется для культивирования дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза.