Этим методом рекомендуется исследовать такие продукты переработки рыбы, как фарш, жареная, заливная, вяленая рыба.
Большинство метацеркарий трематод, встречающихся в рыбе, не опасно для здоровья человека. Для выявления возбудителей заболеваний человека необходима дифференциальная диагностика. В первую очередь ориентируются на размер и форму обнаруженной цисты, характер ее оболочек; положение личинки в цисте (подвижность <*>) и ее строение, в т.ч. размер, цвет и форму экскреторного пузыря (рис. 1).
--------------------------------
<*> Характерная для метацеркарий описторхисов подвижность внутри цисты может быть выявлена не только в свежевыловленной рыбе, но и в течение нескольких дней после, подвижность может восстанавливаться и после промораживания рыбной продукции, недостаточного по времени для гибели личинки, при повышении температуры до 37 град. C.
| Рисунок не приводится. | Циста, выделенная из тканей - Размер 0,17-0,25 x 0,21-0,33 мм. - Овальная, реже округлая форма. - Оболочка двуслойная, тонкая, прозрачная. Внутренняя по всему периметру прилегает к наружной. - Экскреторный пузырь крупный, до 1/3 части тела. В лучах проходящего света в виде большого темного пятна. - Метацеркария лежит в цисте в изогнутом положении, которое меняется из-за почти постоянного энергичного движения личинки. - Размер освобожденной от цисты личинки - 0,44-1,36 x 0,15-0,30 мм. Ротовая присоска (РП) - 0,07-0,1 мм; брюшная присоска (БП) - 0,09-0,14 мм. Тело личинки не пигментировано, покрыто шипиками до уровня БП <*>. Пищевод длинный (в два раза длиннее фаринкса). Развилка кишечника лежит на равном расстоянии от переднего конца тела и БП. Зачатки семенников лежат наискось один к другому по краям экскреторного пузыря. |
| Рисунок не приводится. | Цисты, полученные методом переваривания тканей в искусственном желудочном соке. |
--------------------------------
<*> Шипики легко отрываются при извлечении личинки из цисты и видны не всегда. Рассмотреть их без извлечения личинки из цисты не удается.
Рис. 1. Морфология метацеркарий Opisthorchis felineus
Определение трематод до вида по строению цисты возможно только при достаточном навыке исследователя. В противном случае для уточнения видовой принадлежности трематод целесообразно извлечь метацеркарию из цисты.
Тщательно отделенную от окружающих тканей цисту помещают на стекло в каплю воды или физиологического раствора. Оболочку ее разрывают тонкими иглами (лучше энтомологическими булавками N 00) или легким надавливанием покровного стекла. Если при этом личинка сама не выходит из цисты, то ее вымывают водой из пипетки. Выход метацеркарий из цист можно стимулировать, воздействуя дуоденальным содержимым человека или животных или трипсином.
При обнаружении личинок описторхисов в рыбной продукции, в т.ч. при оценке эффективности ее обеззараживания, необходимо определить их жизнеспособность, т.к. потенциальную опасность для здоровья человека представляют только живые личинки гельминтов.
В первую очередь можно ориентироваться на морфологические признаки и двигательную активность. Метацеркарий описторхисов, выделенных из тканей рыбы с помощью препаровальной иглы, помещают в каплю теплой воды или физиологического раствора (37-40 град. C) на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под малым и большим увеличением микроскопа. Явное нарушение целостности оболочек цист, грубые изменения внутреннего строения личинки, распад ее содержимого, разрушение экскреторного пузыря являются признаками гибели метацеркарий. Наличие даже самых слабых самостоятельных движений личинки свидетельствует о ее жизнеспособности. Отсутствие движения еще не свидетельствует о гибели. Движение можно стимулировать слабым придавливанием метацеркарий покровным стеклом.
Далее можно воспользоваться методом химического воздействия (с использованием химических раздражителей). Вызвать движение личинок можно, воздействуя дуоденальным содержимым, полученным при зондировании человека, либо желчью животных, либо трипсином (0,5% раствор, приготовленный на физрастворе: 0,5 г трипсина растворяют в 100 мл физраствора). На выделенных метацеркарий наносят несколько капель химического реагента так, чтобы полностью покрыть личинок. Для ускорения эксцистирования предметное (часовое) стекло с личинками можно слегка подогреть над пламенем спиртовки, или внести предварительно подогретый до 37-40 град. C трипсин (или желчь), либо поставить в термостат с t = 37 град. C на 10 мин. Через несколько секунд под воздействием химического раздражителя начинается выход личинок из цист и их активное движение, что служит показателем жизнеспособности. Процесс эксцистирования личинок контролируют под микроскопом типа МБС. Отсутствие в течение 30 мин. всякой двигательной реакции свидетельствует о гибели личинок. Для определения жизнеспособности личинок гельминтов можно использовать и метод переваривания тканей рыбы в искусственном желудочном соке.
Кроме того, определить жизнеспособность метацеркарий трематод можно окрашиванием 0,3%-м раствором розоловой кислоты (аурина) (0,3 г розоловой кислоты растворяют в 100 мл 70 град. спирта).
Кусочки мышц с личинками освобождают от жира. На ткань наносят 2 капли розоловой кислоты, а через 2 мин. - 0,1 N раствор КОН, равномерно распределяя его по ткани. Избыток жидкости с препарата снимают фильтровальной бумагой. Накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Ткань рыбы окрашивается в розовый цвет, живые личинки совершенно не окрашиваются, а мертвые становятся розовыми.
Приложение N 3
ПАТОГЕНЕЗ И КЛИНИКА ОПИСТОРХОЗА
В патогенезе острой фазы описторхоза ведущими являются токсико-аллергические реакции, развивающиеся в ответ на антигены паразита (прежде всего выделяемые метацеркариями при миграции и дальнейшем развитии). Генерализованные аллергические реакции в острой стадии заболевания развиваются на основе пролиферативных процессов в лимфатических узлах и селезенке, пролиферативно-эксудативных реакций в коже, слизистых оболочках дыхательных путей, пищеварительного тракта. При массивных заражениях могут развиваться эрозивно-язвенный гастродуоденит, аллергический гепатит, миокардит, энцефалопатии. В основе органных поражений лежит диффузный или очаговый грануломатоз и клеточная пролиферация в стенках сосудов и строме органов.
В патогенезе хронической стадии описторхоза ведущую роль играют повторные заражения, ведущие к развитию относительно ограниченных пролиферативных процессов в билиарной системе, портальных трактах, поджелудочной железе, в слизистой оболочке пищеварительного тракта. Развиваются пролиферативный холангит и перихолангит, провоцирующие хронический холестаз, фиброз стенок холангиол, субкапсулярные и внутрипеченочные холангиоэктазы. Имеет значение и механическое затруднение оттока желчи, вызываемое телами паразита, их яйцами. Могут образовываться желчные камни, вследствие чего возникают приступы желчно-каменной болезни. При тяжелых хронических инвазиях интенсивный фиброз тканей, окружающих желчные протоки, может привести к развитию цирроза печени и даже к портальной гипертензии. Механическое повреждение тканей и раздражение рецепторов желчных протоков вызывают развитие дискинезии желчевыводящих путей. Изменения в паренхиме печени носят преимущественно дистрофический характер, что наряду с прогрессирующим фиброзом органа может формировать хронический холангиогепатит доброкачественного течения.
Патологические процессы в поджелудочной железе при описторхозе развиваются вследствие жизнедеятельности самих гельминтов, а также вызываемых ими аллергических реакций, которые приводят к отеку органа и нарушению оттока панкреатического сока. Наиболее часто возникает хронический пролиферативный каналикулит, периканаликулярный фиброз, кистевидные расширения канальцев. Эти изменения имеют аллергическую природу, поскольку развиваются и без наличия паразитов в поджелудочной железе. Аденоматозные изменения эпителия желчных и панкреатических протоков могут трансформироваться в холангиокарциному.
Диффузное поражение печени при описторхозе чаще наблюдается у больных с B (III) группой крови, эрозивно-язвенный дуоденит - у людей с 0 (I) группой.
Характер и степень проявления клинических симптомов зависят от интенсивности инвазии и длительности паразитирования, частоты повторных заражений, а также от состояния иммунной системы хозяина. У неиммунных лиц инкубационный период при описторхозе составляет 2-4 недели. В клиническом течении болезни различают острую и хроническую фазы.
В острой стадии описторхоз протекает как острый аллергоз. Выявляются следующие признаки: повышение температуры тела, эозинофилия от 10-20 до 60-80%, лейкоцитоз, гепатомегалия, боли в животе, чаще в эпигастрии и правом подреберье, миалгии и артралгии, полиморфные кожные высыпания, летучие инфильтраты в легких, слабость и повышенная утомляемость.
Клиническая картина хронического описторхоза проявляется симптомокомплексом, характерным для хронического рецидивирующего холецистита с гипотонией желчного пузыря, гастродуоденитом, панкреатитом. Ведущими симптомами являются: боли в эпигастрии и правом подреберье, иррадиирующие в ключицу и лопатку, тошнота, плохая переносимость острой и жирной пищи, горечь во рту.
Клинические проявления описторхоза существенно отличаются у коренных жителей очагов и приезжих. Острая стадия описторхоза развивается только у пришлого населения, у коренных жителей заболевание носит первично-хронический характер. Развитие острой стадии и степень ее выраженности зависит от иммунного статуса заразившегося и дозы инвазионного материала. Острая стадия инвазии, по сути, является аллергозом с разнообразными проявлениями от стертых форм до генерализованных реакций с множественными органными поражениями. Выделяют стертую, легкую, средней тяжести и тяжелую форму острого описторхоза.