Критерием эффективности обеззараживания контаминированной посуды является гибель спор тест-микроорганизмов на посуде не менее 100%.
6.4. Исследование спороцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания изделий медицинского
назначения (ИМН), включая эндоскопы
6.4.1. Исследование спороцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания ИМН из различных
материалов (кроме эндоскопов)
В качестве тест-изделий используют стерильные инструменты и ИМН, в т.ч. однократного применения, из различных материалов (металлов, резин, стекла, пластмасс) или имитирующие их тест-объекты. Перечень инструментов должен включать разнообразные по форме, характеру поверхности и используемому материалу изделия (гладкие изделия простой конфигурации; изделия, имеющие замковые части, каналы и полости, имеющие насечки и напыления, изделия извитой формы; изделия, изготовленные из нескольких видов материалов, и т.д.).
На рабочую поверхность тест-изделия (у замковых изделий - также в
область замка, а при наличии каналов и полостей - также в канал изделия)
9
наносят 0,1 мл суспензии, содержащей 2 х 10 спор/мл тест-микроорганизма,
содержащей 40% инактивированной лошадиной сыворотки. Мелкие тест-изделия
для контаминации погружают в эту суспензию на 15 мин. Контаминированные
тест-изделия подсушивают в термостате в течение 20 - 25 мин. При испытании
средств, обладающих фиксирующими свойствами (например, альдегиды),
сыворотку добавляют в количестве 5%.
Дезинфицирующие растворы готовят на питьевой воде комнатной температуры или подогретой до (50 +/- 1) °С.
После подсушивания контаминированные изделия погружают в раствор испытываемого средства, заполняя им все каналы и полости изделий, избегая образования воздушных пробок. Инструменты, имеющие замковые части, погружают раскрытыми, предварительно сделав ими в растворе ДС несколько рабочих движений для лучшего проникновения раствора в труднодоступные участки изделия в области замка. Толщина слоя раствора средства над изделиями должна быть не менее 1 см. Параллельно контаминированные изделия погружают в воду.
Через определенное время (от 15 до 120 мин.) изделия извлекают из раствора и марлевой салфеткой размером 5 х 5 см, пропитанной нейтрализатором, с поверхности изделия делают смывы, салфетку помещают в пробирку с 10 мл того же нейтрализатора на 5 мин., затем переносят ее в пробирку со стерильной питьевой водой и встряхивают с бусами в течение 5 - 10 мин. Для контроля эффективности обеззараживания делают посев смывной жидкости по 0,1 мл на поверхность соответствующей для тест-микроорганизма агаровой питательной среды, а салфетку помещают в бульон. Канал изделия промывают нейтрализатором, и смывную жидкость засевают по 0,1 мл на плотную питательную среду в чашках Петри. Посевы выдерживают в термостате при температуре (37 +/- 1) °С в течение 21 сут. Учет предварительных результатов проводят через 48 ч и окончательных - через 21 сут.
Кратность постановки эксперимента должна быть достаточной для получения статистически достоверных результатов.
Эффективным считают режим (концентрация - время - температура), обеспечивающий 100%-ную гибель спор тест-микроорганизмов на всех изделиях. При наличии положительных проб эксперимент повторяют, увеличивая концентрацию или время воздействия.
6.4.2. Исследование спороцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания эндоскопов
В качестве тест-объектов используют фрагменты эндоскопа или эндоскоп
(гибкий - гастроскоп, жесткий - цистоскоп). По 0,1 мл суспензии, содержащей
9
1 х 10 спор тест-микроорганизмов, наносят с помощью пипетки на наружную
поверхность и в канал эндоскопа, подсушивают в течение 20 мин. Затем
контаминированное изделие погружают в раствор ДС, заполняя полости и каналы
эндоскопа. Через определенное время (от 15 до 60 мин.) изделие извлекают из
раствора и делают смыв с наружной поверхности марлевой салфеткой (5 х 5
см), смоченной в растворе нейтрализатора; салфетку помещают в пробирку с 10
мл того же стерильного раствора нейтрализатора на 5 мин., а затем переносят
ее в пробирку со стерильной питьевой водой и встряхивают с бусами в течение
5 - 10 мин. Канал изделия промывают раствором нейтрализатора и смывную
жидкость засевают на питательный агар. Проводят также контроль микробной
обсемененности использованных для отмыва проб раствора нейтрализатора и
питьевой воды. Кратность постановки эксперимента должна быть достаточной
для получения статистически достоверных результатов.
Эффективным считают режим (концентрация - время - температура), обеспечивающий гибель тест-микроорганизма на всех тест-изделиях и отсутствие тест-микроорганизмов в растворе нейтрализатора. При наличии положительных проб эксперимент повторяют, увеличивая время воздействия, но не более чем до 60 мин.
Положительной считается проба, показывающая характерный рост тест-микроорганизма на питательных средах; изменение жидкой питательной среды (помутнение, осадок, хлопья и т.д.) и характерный рост при посеве и пересеве на плотную питательную среду или обнаружение тест-микроорганизма в растворе применявшегося нейтрализатора.
Режим дезинфекции, разработанный на имитаторах канала эндоскопа, проверяют при обеззараживании эндоскопа, контаминированного тест-микроорганизмом. При необходимости эффективность разработанного режима проверяют в практических условиях.
Критерием эффективности ДС (режим применения ДС) при обеззараживании ИМН (включая эндоскопы) является 100%-ная гибель спор тест-микроорганизма.
6.5. Исследование спороцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания белья, одежды,
спецодежды и других объектов из ткани
Исследования с ДС проводят в целях оценки эффективности его для обеззараживания белья и других объектов из ткани, чистых и загрязненных кровью или выделениями (фекалии, моча, мокрота).
Оценку эффективности ДС для обеззараживания белья, одежды, спецодежды и
других объектов из ткани осуществляют с помощью стерильных тест-объектов,
представляющих собой кусочки бязи размером 2 х 2 см. Бязь предварительно
готовят и обеззараживают так же, как батист. Контаминируют стерильные
9
тест-объекты суспензией тест-микроорганизмов, содержащей 2 х 10 спор/мл,
из расчета 20 мл на 10 тест-объектов. Через 30 мин. тест-объекты
закладывают в бязевые мешочки размером 5 х 8 см (по 2 шт. в каждый),
которые закрывают в виде конверта.
Раствор испытываемого ДС на питьевой воде комнатной температуры или подогретой до (50 +/- 1) °С готовят из расчета 5 л на 1 кг белья. Ветошь, имитирующую белье, поштучно погружают в емкость с раствором испытываемого ДС так, чтобы между слоями ткани не образовывалось воздушных прослоек, препятствующих процессу дезинфекции. Одновременно между слоями белья распределяют (сверху, в середине и внизу) мешочки с контаминированными тест-объектами. Через заданное время мешочки извлекают одновременно из трех слоев. Тест-объекты вынимают из мешочка стерильным пинцетом, помещают на 5 мин. в емкость с раствором соответствующего нейтрализатора, затем переносят в стерильную питьевую воду и высевают в бульон Хоттингера (pH 7,2). Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °С в течение 48 ч. Предварительный учет результатов проводят через 48 ч, а окончательный - через 21 сут. В контрольных опытах белье погружают в стерильную питьевую воду. Мешочки с тестами закладывают так же, как и в опыте. При получении 100%-ной гибели тест-микроорганизма в опытах по обеззараживанию белья без белковых загрязнений переходят к опытам по обеззараживанию белья, загрязненного выделениями.
Для определения эффективности ДС при обеззараживании белья, одежды,
спецодежды и других объектов из ткани, загрязненных кровью, выделениями
(фекалии, мокрота, моча и др.), в лабораторных условиях используют бязевые
тест-объекты, которые контаминируют из расчета 30 мл суспензии на 10
тест-объектов тестовой суспензией спор с добавлением 40% инактивированной
9
сыворотки (6 мл суспензии, содержащей 2 х 10 спор тест-микроорганизма
смешивают с 4 мл инактивированной сыворотки) или 40% фекальной эмульсии (6
мл суспензии спор тест-микроорганизма смешивают с 4 мл 40% фекальной
эмульсии). Для приготовления фекальной эмульсии 8 г фекалий растирают в
ступке с 20 мл воды. Количество суспензии спор тест-микроорганизма,
содержащей сыворотку или фекалии, готовят из расчета 30 мл на 10
тест-объектов. Контаминированные тест-объекты подсушивают в термостате при
(37 +/- 1) °С в течение 20 - 25 мин. или 1,5 - 2 ч при комнатной
температуре до полного высыхания. Методика проведения эксперимента
аналогична опытам с чистым бельем.
Критерием эффективности ДС при обеззараживании белья, одежды, спецодежды и других объектов из тканей является 100%-ная гибель спор тест-микроорганизмов на тест-объектах.
При изучении эффективности обеззараживания изделий из синтетических тканей (капрон, ацетат, периацетат, лавсан и др.) используют тест-объекты из этих тканей размером 5 х 5 см, т.к. микроорганизмы не проникают в структуру этих тканей и смываемость их в 2 раза больше, чем с батистовых тест-объектов.
6.5.1. Исследование спороцидной эффективности камерного метода обеззараживания
Камерный метод используют для обеззараживания одежды, обуви, постельных принадлежностей, мягких игрушек и др.
В качестве тест-микроорганизма используют B. cereus в виде суспензии,
9
содержащей 2 х 10 спор/мл, которой контаминируют тест-объекты из батиста,
бязи и других материалов, соответствующих обеззараживаемым объектам.
Контаминированные тест-объекты закладывают в стерильные конверты из