В контрольных опытах для обработки аналогично контаминированных тест-поверхностей вместо раствора ДС используют стерильную питьевую воду из того же расчета, что и опытные. Жидкость, в которую помещают стерильную марлевую салфетку после взятия смыва с контрольных поверхностей, перед посевом разводят в 100 раз и вносят по 0,1 мл на поверхность питательного агара двух чашек Петри. Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °С. Учитывают результаты через 48 ч (предварительные), а окончательные - через 21 сут.
Оценку результатов контрольных опытов проводят по посеву того разведения, в котором число КОЕ на поверхности питательного агара в чашке Петри составляет от 30 до 300.
После выдерживания посевов в термостате подсчитывают число КОЕ на чашках с агаром, рассчитывают плотность контаминации на 100 кв. см и высчитывают эффективность обеззараживания, принимая количество тест-микроорганизмов, снятых с контрольных тест-объектов, за 100%.
Например, на посевах со 100 кв. см контрольной тест-поверхности обнаружено 148000 КОЕ, а с аналогичного вида опытной тест-поверхности - 20 КОЕ.
148000 - 100%
20 - х х = 20 х 100 : 148000 = 2 : 148 = 0,013%.
Эффективность обеззараживания опытной тест-поверхности составляет:
100 - 0,013 = 99,987%.
Критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-поверхностей объектов, контаминированных тест-микроорганизмом в споровой форме, равен 100%. При необходимости отработанные в лабораторных условиях режимы обеззараживания подлежат апробации на натурных объектах.
6.2. Исследование спороцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания предметов ухода
за больными и игрушек из различных материалов (кроме мягких)
В исследованиях используют тест-объекты (100 кв. см) и предметы ухода за больными из различных материалов: резин на основе натурального и силиконового каучука (медицинская клеенка, грелка, груша); стекла (поильник, плевательница, градусник); пластмасс (грелка, лоток, наконечник для клизм); металлов (таз, стакан для термометра); игрушки (кроме мягких) из резин и пластмасс.
Тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки из различных материалов тщательно моют водой с мылом и щеткой. Тест-объекты стерилизуют паровым или воздушным методом.
9
Готовят суспензию тест-микроорганизма, содержащую 2,0 х 10 спор/мл, к
которой добавляют 40% лошадиной сыворотки, инактивированной при 56 °С в
течение 30 мин. (к 6 мл суспензии прибавляют 4 мл сыворотки).
С помощью одноканального механического дозатора или стеклянной пипетки на поверхность тест-объекта, предмета ухода за больными, игрушки наносят 0,5 мл суспензии спор тест-микроорганизма. Суспензию равномерно распределяют по поверхности (100 кв. см) стерильным стеклянным шпателем. Каналы и полости предмета ухода за больными, игрушек заполняют с помощью шприца. Мелкие игрушки полностью погружают в суспензию. Контаминированные тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки подсушивают при комнатной температуре до полного высыхания (60 - 120 мин.).
Растворы ДС готовят на питьевой воде при комнатной температуре. Обеззараживание осуществляют способом погружения, протирания, орошения. После подсушивания контаминированные тест-объекты, предметы ухода за больными, игрушки, в т.ч. имеющие каналы и полости, погружают в раствор испытуемого ДС или протирают салфеткой, смоченной им. Мелкие игрушки полностью погружают в емкость с раствором ДС, препятствуя их всплытию; крупные игрушки дезинфицируют способом орошения. Норма расхода ДС способом протирания из расчета 100 - 150 мл/кв. м при однократной обработке и 200 - 300 мл/кв. м при двукратной; способом орошения - 150 мл/кв. м при обработке распылителем типа "Квазар" и 300 мл/кв. м - при обработке распылителем типа "Автомакс" или гидропультом. При необходимости обработку способом протирания или орошения повторяют через 5 - 15 мин.
Для контроля эффективности обеззараживания через определенные промежутки времени после дезинфекции (30 - 60 - 120 мин.) тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки извлекают из раствора, делают смывы стерильной марлевой салфеткой (5 х 5 см), увлажненной нейтрализатором (п. 6.1). Салфетки погружают в стерильный раствор нейтрализатора на 5 мин., затем переносят в пробирки (емкости) с бусами и стерильной питьевой водой (10 мл) и встряхивают на шейкере в течение 10 мин. Каналы и полости промывают нейтрализатором (10 мл), который собирают в стерильные пробирки (емкости) и оставляют на 10 мин. для нейтрализации.
Полученную смывную жидкость и смывную жидкость из каналов вносят по 0,1 мл на поверхность питательного агара двух чашек Петри и равномерно распределяют стерильным шпателем по поверхности среды. В контрольных опытах вместо раствора ДС используют стерильную питьевую воду.
Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °С. Предварительные результаты учитывают через 48 ч, а окончательные - через 21 сут.
Критерием эффективности ДС при обеззараживании тест-объектов, предметов ухода за больными и игрушек из различных материалов (кроме мягких), контаминированных тест-микроорганизмом в споровой форме, является 100% гибель тест-микроорганизмов.
6.3. Исследование спороцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания посуды столовой,
лабораторной и из-под выделений
Для определения спороцидной эффективности ДС, предназначенных для обеззараживания посуды, в качестве тест-объектов используют набор столовой и чайной посуды: тарелки, стаканы, кружки из различного материала (фарфор, фаянс, алюминий, стекло, пластик, посуда, покрытая эмалью); столовые приборы: ножи, вилки, ложки из различного материала (нержавеющая сталь, алюминий, пластик), посуду одноразового использования и набор лабораторной посуды, представляющий тест-объекты из стекла и пластмасс: предметные и покровные стекла, пипетки, чашки Петри, планшеты для иммунологического анализа и другое; посуда из-под выделений (мочеприемники, подкладные судна). Перед экспериментом посуду и столовые приборы моют водой с мылом и щеткой, затем высушивают.
В качестве тест-микроорганизмов для контаминации посуды используют наиболее устойчивый к данному ДС вид спор. Чаще всего для разработки режима дезинфекции посуды используют B. cereus, а затем эффективность разработанного режима проверяют с использованием микроорганизмов, встречающихся на посуде, в зависимости от цели исследований.
На посуду (площадь 100 кв. см) пипеткой наносят взвесь
9
тест-микроорганизмов из расчета 0,5 мл споровой взвеси, содержащей 2 х 10
спор/мл. Культуру равномерно распределяют по поверхности посуды стеклянным
шпателем. Столовые приборы погружают в бактериальную суспензию на 1 - 2
мин., оставляя неконтаминированными их ручки. Контаминированную посуду
подсушивают (до полного высыхания) при комнатной температуре (60 - 120
мин.) и относительной влажности воздуха 50 - 60% (при работе с B. anthracis
подсушивают посуду не более 20 мин.).
Для разработки режимов обеззараживания посуды с остатками пищи при контаминации используют суспензию микроорганизмов, смешанную с овсяной, манной или другой кашей, сваренной на молоке со сливочным маслом (к 10 г каши добавляют 1 мл 2-миллиардной взвеси спор). Для имитации загрязнения чайной посуды используют кисель (к 10 г киселя добавляют 1 мл 2-миллиардной взвеси спор), лабораторной посуды - 40% инактивированной сыворотки; посуды из-под выделений - 20%-ную эмульсию кала, предварительно растертого в ступке.
Обработку столовой, чайной, лабораторной посуды, столовых приборов проводят способом погружения в дезинфицирующий раствор. Растворы готовят на питьевой воде. Температура испытуемого раствора 18 - 20 °С. При необходимости изучают эффективность растворов ДС при температуре (50 +/- 1) °С.
Дезинфицирующий раствор должен полностью заполнять и с избытком покрыть всю посуду и приборы (из расчета не менее 2 л на 1 комплект). Время обеззараживания посуды от 15 до 240 мин. в зависимости от вида тест-микроорганизма и наличия загрязнения.
Через определенные интервалы времени (например, 15, 30, 60 мин. и т.д.) извлекают по одному предмету разных наименований (например, тарелка, стакан, предметное стекло, нож и т.д.) из дезинфицирующего раствора и стерильной марлевой салфеткой (5 х 5 см), смоченной в растворе нейтрализатора, соответствующего данному ДС, тщательно протирают контаминированную часть каждого контаминированного объекта и погружают в 10 мл этого же нейтрализатора на 5 мин., затем салфетку переносят в пробирку со стерильной питьевой водой и бусами. Время отмыва марлевой салфетки - 10 мин. при постоянном встряхивании. После отмыва марлевую салфетку погружают в питательный бульон. Смывную жидкость по 0,1 мл вносят на поверхность питательного агара в 2 - 3 чашки Петри (по 0,1 мл в каждую и распределяют стерильным шпателем по всей поверхности среды). Посевы помещают в термостат при температуре (37 +/- 1) °С. Учет результатов проводят через 48 ч в течение 21 сут.
Контролем служит аналогично контаминированная посуда, которую погружают не в дезинфицирующий раствор, а в такой же объем стерильной питьевой воды.