Методические указания к выполнению лабораторных работ для студентов специальностей 270900 “Технология мяса и мясных продуктов” и 271100 “Технология молока и молочных продуктов” дневной и заочной форм (стр. 7 из 8)
Меласса – побочный продукт производства сахара из сахарного тростника и сахарной свеклы, богатый углеводами, ценными органическими и минеральными веществами, аминокислотами, витаминами. Содержание сахарозы до 60%.
Молочная сыворотка - очень богата различными биологически активными соединениями, она содержит в среднем 70-80% лактозы, 7-15% белковых веществ, 2-8% жира, 8-10% минеральных солей. Кроме того, молочная сыворотка имеет в своем составе значительное количество витаминов, гормонов, органических кислот, микро- и ультрамикроэлементы.
Наличие в молочной сыворотке легко усвояемых многими видами микроорганизмов источников углеродов, а также различных ростовых факторов выдвигает ее в ряд наиболее ценных питательных сред для получения продуктов микробного синтеза. Большое значение имеет и то обстоятельство, что применение молочной сыворотки не требует специальной сложной подготовки, а культуральная жидкость после выращивания микроорганизмов может быть использована в пищевых и кормовых целях без обработки.
При всестороннем использовании микробной массы, полученной на молочной сыворотке, была выявлена ее высокая технологическая и экономичность для мясного и молочного животноводства, птицеводства и целого ряда других направлений.
ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ
П е р в о е з а н я т и е
1. Определение рН питательной среды.
2. Определение титруемой кислотности питательной среды.
3. Определение содержания сухих веществ в питательной среде.
4. Определение аминного азота.
5. Приготовление посевной суспензии и засев питательной среды.
7. Установка колб на качалки.
Определение рН питательной среды
Проводят с помощью иономера.
Определение титруемой кислотности питательной среды
В колбу на 100 мл отбирают 10 мл молочной сыворотки, добавляют 20 мл дистиллированной воды, 3-4 капли фенолфталеина и оттитровывают 0,1 н раствором NaOH до слабо-розовой окраски.
Титруемую кислотность питательной среды (К), в градусах Тернера, рассчитывают по формуле:
К = V1× 10 , (4.1)
где К – титруемая кислотность, °Т; V1 - объем 0,1 н раствора NaOH мл, пошедшего на титрование 10 мл питательной среды; 10 - коэффициент пересчета на 100 мл питательной среды.
Определение содержания сухих веществ в питательной среде
Проводят с помощью рефрактометра.
Определение аминного азота питательной среды йодометрическим
методом
В мерную колбу объемом 50 мл пипеткой вносят 10 мл молочной сыворотки, добавляют 3-4 капли тимолфталеина и по каплям 1 н раствор NaOH до появления бледно-голубой окраски. К слабощелочному раствору из цилиндра при помешивании приливают 30 мл суспензии фосфата меди, содержимое колбы доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через плотный фильтр. Фильтрат должен быть совершенно прозрачным. 10 мл фильтрата пипеткой переносят в коническую колбу, добавляют 0,5 мл уксусной кислоты, 1 г йодида калия и перемешивают. Выделившийся йод титруют из микробюретки 0,01 н раствором тиосульфата натрия, прибавляя в конце титрования 1-2 капли раствора крахмала. Окончание титрования определяют по исчезновению синей окраски.
Количество аминного азота (Х) вычисляют по формуле:
 X = | а × 0,28 V × 10× 100 50 | , (4.2) |
где Х – количество аминного азота, мг/100 мл; а - количество 0,01 н раствора тиосульфата натрия, пошедшее на титрование, мл; V - объем исследуемой жидкости, взятый на анализ, мл.
Приготовление посевной суспензии и засев питательной среды
Проводят так же, как и в предыдущих работах.
Установка колб в термостат
Каждую колбу подписывают (группа, фамилия, продолжительность культивирования) и устанавливают в термостат на 3, 5, 7 суток при температуре 25-27°С.
В т о р о е з а н я т и е
1. Определение прироста биомассы гриба-продуцента.
2. Определение рН культуральной жидкости.
3. Определение титруемой кислотности культуральной жидкости.
4. Определение содержания сухих веществ в культуральной жидкости.
5. Определение аминного азота в культуральной жидкости.
6. Определение белка в биомассе колориметрическим методом.
8. Заполнение журнала наблюдений.
Определение прироста биомассы гриба-продуцента
На аналитических весах взвешивают предварительно высушенные до постоянной массы фильтры. Содержимое колб фильтруют через фильтр, при этом выросшую биомассу гриба шпателем переносят на фильтр. Биомассу на фильтре сушат в сушильном шкафу при температуре 130°С в течение 1 часа. Высушенные таким образом фильтры с биомассой охлаждают в эксикаторе и взвешивают на аналитических весах. Массу сухого мицелия (В), г, рассчитывают по формуле:
В = В2 - В1, (4.3)
где В1 - масса пустого фильтра, г; В2 - масса фильтра с биомассой, г.
Определение рН культуральной жидкости
Проводят с помощью иономера.
Определение титруемой кислотности культуральной жидкости
В колбу на 100 мл отбирают 10 мл отфильтрованной жидкости, добавляют 20 мл дистиллированной воды, 3-4 капли фенолфталеина и оттитровывают 0,1 н раствором NaOH до слабо-розового окрашивания. Кислотность рассчитывают так же, как и на первом занятии.
Определение содержания сухих веществ в культуральной жидкости
Проводят с помощью рефрактометра.
Определение аминного азота в культуральной жидкости
Проводят йодометрическим методом (см. первое занятие).
Определение белка колориметрическим методом
Около 0,5 г исследуемого измельченного в муку образца взвешивают на аналитических весах с точностью до + 0,001г и помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, снабженную пробкой. В колбу добавляют пипеткой 50см3 раствора гидроксида натрия концентрацией 0,1 моль/дм3. Колбу закрывают пробкой и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 15 мин. Затем вытяжку центрифугируют 10 мин. при частоте вращения 6000 мин-1. 5 см3 прозрачного центрифугата пипеткой переносят в мерную колбу на 50см3 и содержимое колбы доводят до метки сульфосалициловой кислотой. Параллельно готовят контрольный образец. Для этого 5см3 дистиллированной воды переносят в мерную колбу на 50см3 и содержимое колбы доводят до метки сульфосалициловой кислотой.
При нефелометрическом анализе получение точных результатов зависит от порядка и скорости смешивания растворов. Поэтому после добавления сульфосалициловой кислоты колбы быстро переворачивают 2-3 раза (не более), растворы наливают в кюветы с толщиной слоя 5мм и измеряют величину оптической плотности растворов при длине волны 550 нм. Замеры следует проводить сразу после добавления кислоты, т.к. частицы белка быстро агрегируют. По величине оптической плотности белковой вытяжки определяют массовую долю белка с помощью калибровочного графика (рис.4.1).
Массовую долю белка (Х, %) рассчитывают по формуле:
Б ·100
Х=---------- , (4.4)
1000 · n
где Б-содержание белка в навеске, мг; n - навеска, взятая на определение, г.
| Сутки | РН | Титруемая кислотность, ° Т | Прирост | Аминный азот | Экономический | Содержание | Сухие в-ва, % | |||
 выращивания | до | после | до | после | биомассы, г | до | после | коф-т | белка, % на сухие в-ва | до после |
| культивирования | культивирования | культивирования | культивирования | |||||||
 |  |
В, г М, %