6.2.4 Обработка результатов.
Массовую долю глиоксаля Х, %,вычисляют по формуле
,
где: 0,01451 - масса глиоксаля, соответствующее 1 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации точно С (NaOH)=0,5 моль/дм3,г;
- объем раствора гидроокиси натрия концентрации точно С(NaOH)=0,5 моль/дм3, израсходованный на титрование глутарового альдегида и глиоксаля в анализируемом препарате, см ;
- объем раствора гидроокиси натрия концентрации точно С(NaOH)=0,5 моль/дм3, израсходованный на титрование глутарового альдегида в анализируемом препарата, см;
m - масса пробы анализируемого препарата, г;
Объем раствора гидроокиси натрия концентрации точно С(NaOH)=0,5 моль/дм3, израсходованный на титрование глутарового альдегида в анализируемом препарате,см3,вычисляют по формуле
, где
0,02503 - масса глутарового альдегида, соответствующее 1см3 раствора гидроокиси натрия концентрации точно С(NaOH)=0,5 моль/дм3, г;
Хглут - массовая доля глутарового альдегида, %, определенная по п.6.1.2.2.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, абсолютное расхождение между которыми не превышает допустимое расхождение, равное 0,1 масс. %.
Допускаемая относительная суммарная погрешность результатов анализа ±15% при доверительной вероятности Р=0,95.
6.3. Определение массовой доли алкилдиметилбензиламмоний хлорида.
Для количественного определения алкилдиметилбензиламмоний хлорида применяется двухфазное титрование. Четвертичное аммониевое соединение титруют с помощью анионного стандартного раствора (натрия лаурилсульфата) при добавлении смешанного индикатора из катионного красящего вещества (эозин БА или эозин Н) и анионного красящего вещества (метиленовый голубой). Титрование проводится в двухфазной системе (вода и хлороформ).
6.3.1. Аппаратура, материалы, реактивы.
Цилиндры 3-2-25 по ГОСТ 1770-74.
Колбы мерные 2-2-250 и 2-2-1000 по ГОСТ 1770-74.
Бюретка 5-2-25 по ГОСТ 29251-91.
Пипетки 2-2-20 по ГОСТ 29169-91 и 2-2-10 по ГОСТ 29227-91.
Стаканчик для взвешивания СВ-24/10 по ГОСТ 25336-82
Колбы конические КН-1-250-24/29 ТХС по ГОСТ 25336-82.
Воронка В-56-80 ХС по ГОСТ 25336-82.
Натрий лаурилсульфат ТУ ЕРЗ 8П-67-67.
Метиленовый голубой (индикатор).
Эозин БА по ТУ 6-09-07-1600-87 или эозин Н по ТУ 6-09-183-75.
Хлороформ по ГОСТ 20015-88.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Спирт этиловый синтетический рекгификованный по ТУ 9182-010-3059311-93.
Кислота серная по ГОСТ14262-78,2,5М раствор.
6.3.2.Подготовка к анализу.
6.3.2.1.Приготовление 0,005 М раствора натрий лаурилсульфата.
1,442 г высушенного натрия лаурилсульфата (3 часа при 50°С) взвешивают с точностью до 5 знака и растворяют в 100 дистиллированной воды. Раствор переводят в литровую мерную колбу и дополняют дистиллированной водой до калибровочной метки.
6.3.2.2.Приготовление раствора смешанного индикатора.
Раствор А: 1,40 г эозина БА или эозина Н растворяют в 10 см3 воды в мерной колбе вместимостью 500 см3, приливают 5 см'3 уксусной кислоты, доводят объем раствора этиловым спиртом до метки и перемешивают.
Раствор Б: 0,08 г индикатора метиленового голубого растворяют в 170 см воды в стакане вместимостью 400см3, прибавляют 30 см2 концентрированной серной кислоты и перемешивают.
Растворы А и В хранят в отдельных склянках. Для приготовления раствора смешанного индикатора к одной части раствора А и перемешивают.
Раствор смешанного индикатора готовят непосредственно перед проведением анализа в необходимом количестве.
6.3.3 Проведение анализа.
В стаканчике с притертой пробкой берут навеску препарата массой около 1,2 г. Массу анализируемой пробы записывают с точностью до четвертого десятичного знака. Навеску количественно с помощью дистиллированной воды переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и доводят объем дистиллированной водой до калибровочной метки.
В коническую колбу с притертой пробкой вносят 20 см3 этого раствора, 4 см3 дистиллированной воды, 20см3 хлороформа, 5 см3 0,1 н серной кислоты и 1 см3 свежеприготовленного раствора смешанного индикатора и проводят титрование 0,005 М раствором натрия лаурилсульфата. После прибавления каждой порции раствора натрия лаурилсульфата колбу закрывают притертой пробкой и сильно встряхивают. Титрование проводят до окрашивания хлороформного слоя в красно-фиолетовый цвет (после появления окраски водного слоя от светло зеленого до желтоватого цвета объем прибавляемого раствора натрия лаурилсульфата должен быть не более 0,1 см3).
6.3.4. Обработка результатов.
Массовую долю алкилдиметилбензиламмоний хлорида вычисляют по формуле:
, где
0,001805 - масса алкилдиметилбензиламмоний хлорида, соответствующая 1 см3 раствора натрия лаурилсульфата концентрации точно С (C12H25SO4Na) = 0,005 моль/дм3,мг;
V - объем раствора натрия лаурилсульфата концентрации точно (C12H25SO4Na) = 0,005 моль/дм3 израсходованный на титрование, см3;
Р - кратность разведения анализируемой пробы, равная 12,5
m - масса анализируемой пробы, г;
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, абсолютное расхождение между которыми не превышает допускаемое расхождение, равное 0,2 масс. %.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ОЦЕНКИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ
АКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА "ЛИЗАФИН-СПЕЦИАЛЬ"
ЗАО "ПЕТРОСПИРТ" (САНКТ-ПЕТЕРБУРГ, РОССИЯ)
Исследования проведены на основании договора № 33/1-2002 от 20 февраля 2002 г. о проведении НИР на тему "Оценка эффективности дезинфицирующего средства "Лизафин специаль", (шифр "Петро-1").
Основной объем экспериментальных лабораторных исследований выполнен на базе 33 отдела (разработки и оценки средств обеззараживания) НИИЦ (МБЗ) ГНИИИВМ МО РФ. Практическая апробация проведена в условиях микробиологической лаборатории указанного отдела, предназначенной для работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности, в процессе ее повседневной деятельности.
Дезинфицирующий препарат "Лизафин-специаль" был испытан в качестве средства для дезинфекции различных поверхностей помещений, лабораторной посуды, санитарно- технического оборудования а также совмещенной дезинфекции и предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения (ИМН).
Оценка специфической биологической активности препарата в лабораторных условиях проводились путем обеззараживания по рекомендованным режимам тест-объектов, искусственно зараженных модельными штаммами микроорганизмов с плотностями заражения порядка п-105-п-106 КОЕ/см". Таким образом моделировались максимально возможные уровни естественной контаминации изделий медицинского назначения и поверхностей в ЛПУ.
В качестве тест-микроорганизмов использовали стандартные штаммы, рекомендованные для оценки дезинфектантов в системе Минздрава и МО РФ - S.aureus (906),Е.coli (1257), рекомендованные ВОЗ референс-штаммы международной системы стандартов-S.aureus (ATCC 25923), P.aeruginosa (ATCC 27853), госпитальные штаммы P.aeruginosa и S.aureus с повышенной устойчивостью к хлорамину, а так же Candida albicans.
К взвеси микробов добавляли 20-40% инактивированной нормальной лошадиной сыворотки в качестве белковой нагрузки.
При оценке обеззараживающего действия препарата "Лизафин-специаль" на различные поверхности при их искусственном заражении в качестве тест-объектов использовали стекло, кафель, металл окрашенный, линолеум, керамическую плитку и т.п. материалы, наиболее часто встречающиеся в медицинских учреждениях.
При оценке препарата в качестве средства дезинфекции (раздельной и совмещенной с предстерилизационной очисткой) ИМН в лабораторных условиях использовали лабораторное стекло, резиновые и силиконовые шланги, пластиковые наконечники для пипеток, а также режущий и другой инструментарий,в том числе с замковыми частями.
После подсыхания микробной взвеси тест-объекты, моделирующие различные поверхности, протирали ветошью, смоченной в дезинфицирующем растворе или орошали из распылителей АО-2 и "Росинка". Расход рабочего раствора составлял до 300 мл м" в зависимости от вида поверхности и способа обработки. Образцы лабораторной посуды погружали в дезраствор полностью. По окончании экспозиции тест-объекты промывали стерильной водопроводной водой. Для контроля эффективности дезинфекции использовали методы посевов-отпечатков на агаровые пластинки и смывов. Результаты дезинфекции учитывали после инкубирования посевов в термостате в течение - 24-48 ч. Каждый опыт сопровождался контролями плотности заражения и контролем отсутствия бактериостатического действия.
Тест-объекты при оценке качества ИМН, совмещенной с предстерилизационной очисткой заражали микробной взвесью с добавлением донорской крови. После подсушивания проводили их дезинфекцию, совмещенную с предстерилизационной очисткой по утвержденным режимам. Эффективность обеззараживания определяли методом смывов с последующим высевом смывной жидкости на чашки Петри с простым питательным агаром. После термостатирования при 37"С учитывали результаты по абсолютному количеству обеззараженных проб и в процентах. Оценку полноты очистки от биологических загрязнений проводили с помощью азопирамовой пробы в остатках смывной жидкости.
Анализ результатов подтверждает высокую надежность режимов обработки, рекомендованных для поверхностей (0,1% раствор, экспозиция 60 мин.),лабораторной посуды (0,5% раствор, экспозиция 30 мин. - для кандидозов и 60 мин - для вегетативных форм бактерий), изделий медицинского назначения при дезинфекции, совмещенной с предстерилизационной очисткой (1,0% раствор, экспозиция 60 мин.) при которых обеспечивалась 100% эффективность обеззараживания в отношении вегетативных форм бактерий и грибов, включая госпитальные штаммы с повышенной устойчивостью к хлорамину.