Метод 1 (метод Гинзберга)
Для определения эфирного масла используют прибор, изображенный на рисунке 1. ГФ XI, вып. 1, с. 290.
Методика. Навеску измельченного сырья помещают в широкогорлую круглодонную или плоскодонную колбу вместимостью 1000 мл, приливают 300 мл воды и закрывают резиновой пробкой с обратным шариковым холодильником. В пробке укрепляют металлические крючки, на которые при помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный приемник так, чтобы конец холодильника находился над воронкообразным расширением приемника, не касаясь его. Приемник должен свободно помещаться в горле колбы, не касаясь стенок, и отстоять от уровня воды не менее чем на 50 мм. Колбу с содержимым нагревают и кипятят в течение времени, указанного в соответствующей нормативной документации на лекарственное растительное сырье. Объем масла в градуированной части приемника замеряют после окончания перегонки и охлаждения прибора до комнатной температуры. Содержание эфирного масла в объемно-весовых процентах (X) в пересчете на абсолютно-сухое сырье вычисляют по формуле:
| Х = | V Ð 100 Ð 100 | , где | ||
| m Ð (100 – W) | ||||
| V | – объем эфирного масла, в миллилитрах; | |||
| m | – масса сырья, в граммах; | |||
| W | – потеря в массе при высушивании сырья, в процентах. | |||
ЗАДАНИЕ 2. Анализ эфирных масел
1. Изучите методики определения качества эфирных масел по органолептическим свойствам и физико-химическим показателям по методикам, изложенным в общей фармакопейной статье (ОФС) ГФ XI, вып. 1, с. 287–288.
2. Проведите определение качества предложенного образца эфирного масла по органолептическим свойствам и физико-химическим показателям в соответствии с методиками ГФ XI, вып. 1, с. 287–288.
3. Составьте схему методик, запишите их в виде таблицы, объясняя каждый этап определения.
| Показатель качества эфирного масла | Методика определения | Результат анализа и заключение о соответствии эф. масла требованиям НД |
| 1. Подлинность: - цвет и прозрач-ность; - запах; - вкус. | Путем сравнения со стандартным образцом того же наименования. Нанесением на фильтровальную бумагу. | |
| 2.Чистота (нали-чие примесей): - спирта; - жирных; - мин. Масел. | ||
| 3. Показатель преломления. | ||
| 4. Химические константы: -кислотное число; -эфирное число. |
3. Сделайте заключение о соответствии эфирного масла требованиям соответствующей НД.
Объекты исследования:
1. Пихтовое масло (ВФС 42-2109-92);
2. Мятное масло (ГФ Х, статья 477, с. 488);
3. Эвкалиптовое масло (ГФ Х, статья 475, с. 486).
1. Определение подлинности образца эфирного масла (ГФ XI, вып. 1, с. 287)
а) Определение цвета и прозрачности анализируемого образца, проводят путем сравнения его со стандартным образцом того же наименования (при его отсутствии сравнение проводят с описанием внешних признаков эфирного масла в НД).
б) Определение запаха
2 капли масла наносят на полоску фильтровальной бумаги длиной 12 см и шириной 5 см. Через каждые 15 минут сравнивают запах испытуемого образца с запахом контрольного образца, нанесенного таким же образом на другую полоску фильтровальной бумаги. В течение одного часа запах должен быть одинаков.
в) Определение вкуса анализируемого образца проводят путем прикладывания к языку полоски фильтровальной бумаги с нанесенной на нее каплей эфирного масла.
2. Определение посторонних примесей (чистота)
а) Определение примеси спирта
2-3 капли эфирного масла наносят на воду, налитую на часовое стекло и наблюдают. На черном фоне не должно быть заметного помутнения вокруг капель масла;
1 мл эфирного масла наливают в пробирку, закрывают рыхлым комочком ваты, в середину которого помещен кристалл фуксина, и доводят до кипения. При наличии спирта пары его растворяют фуксин и вата окрашивается в фиолетово-розовый цвет.
б) Определение примеси жирных и минеральных масел
1 каплю эфирного масла наносят на фильтровальную бумагу: при наличии примеси жирного масла после испарения эфирного масла остается жирное пятно.
3. Определение показателя преломления
Показатель преломления определяют при помощи рефрактометра.
ä Показатель преломления – это отношение скорости распространения света в воздухе к скорости распространения света в испытуемом растворе. Перед определением рефрактометр необходимо проверить с помощью воды, показатель преломления которой равен 1,3330 при 20°С.
4. Определение химических констант (ГФ ХI, вып. 1, с. 191)
а) Определение кислотного числа
ä Кислотное число – это количество миллиграммов КОН, необходимое для нейтрализации свободных кислот в 1 г исследуемого вещества. Обычно количество кислот в эфирном масле незначительно, но при длительном хранении в результате окислительных процессов количество свободных кислот в эфирном масле увеличивается.
Методика. 1мл эфирного масла помещают в колбу вместимостью 250 мл и растворяют в 10 мл 95% этилового спирта, предварительно нейтрализованного по фенолфталеину 0,1 моль/л раствором NaOH (если нужно нагревают с обратным холодильником на водяной бане до полного растворения). Прибавляют 1–2 капли раствора фенолфталеина и титруют при постоянном перемешивании 0,1 моль/л NaOH до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30сек. 1 мл 0,1 моль/л NaOH соответствует 5,61 мг КОН.
Кислотное число Кч вычисляют по формуле:
| Кч= | V Ð 5,61 | , где | |||
| m | |||||
| V | – объем раствора NaOH (0,1 моль/л), израсходованный на титрование, в миллилитрах; | ||||
| m | – масса навески эфирного масла, в граммах; в данной методике объем эфирного масла (1 мл) | ||||
| 5,61 | – количество миллиграммов КОН, соответствующее 1 мл раствора NаОН (0,1 моль/л). | ||||
б) Определение эфирного числа (ГФ XI, вып. 1, с. 288)
ä Эфирное число – это количество миллиграммов КОН, пошедшее на омыление сложных эфиров, содержащихся в 1 г эфирного масла.
Эфирное число определяют в растворе, полученном после определения кислотного числа. К этому раствору прибавляют 10 мл спиртового раствора КОН (0,5 моль/л), соединяют колбу с воздушным холодильником (диаметр трубки 1 см, длина 70-100 см) и нагревают на водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спиртового раствора. По окончании омыления в колбу добавляют 20 мл воды и избыток КОН титруют раствором хлористоводородной кислоты (0,5 моль/л) до обесцвечивания раствора (индикатор фенолфталеин).
Эфирное число (X1) вычисляют по формуле:
| X1 = | V Ð 28,05 | , где | |||
| m | |||||
| V | – количество миллилитров раствора хлористоводородной кислоты (0,5 моль/л), израсходованное на титрование исследуемого вещества; | ||||
| m | – навеска масла, в граммах; | ||||
| 28,05 | – количество миллиграммов КОН, соответствующее 1 мл раствора КОН (0,5 моль/л). Полученные данные занести в протокол анализа эфирного масла и сравнить с требованиями ФС на данное эфирное масло, сделать заключение о его качестве (соответствие требованиям нормативного документа). | ||||
|
| |||||
IV. Учебно-материальное обеспечение
Литература:
1.Государственная фармакопея СССР. X-е изд. – М.: Медицина, 1968. – 1079 с.
2. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1987. – С. 191, 287–291.
3. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М: Медицина, 1989. – С. 226, 325.
4. Калинкина, Г.И., Исайкина, Н.В., Коломиец, Н.Э. Методы фармакогностического анализа лекарственного растительного сырья. – Ч. II. Химический анализ: Учебное пособие. – Томск, 2008. – 54 с.
5. Фармакопейные статьи на анализируемые лекарственное сырье (Трава тысячелистника, Побеги багульника и др.) и эфирные масла (мятное, эвкалиптовое, пихтовое).
6. Образец протокола анализа (лекарственного сырья, эфирного масла).
Материальное обеспечение:
Наглядные пособия
1. Таблица «Классификация терпеноидов».
2. Схема лабораторной установки «Получение эфирного масла методом перегонки с водяным паром».
3. Схема «Анализ эфирных масел».