В лабораторных условиях проведены опыты по изучению гисто-морфологических реакций в легких, трахее, селезенке, печени, фабрициевой сумке и вилочковой железе от 48 бройлеров 60—100-дневного возраста через 3, 7, 10, 20 и 30 дней после аэрозольной вакцинации против ИЛТ при одновременном введении РАВ.
До введения РАВ базилика на фоне гиповитаминозов и кокцидиоза отмечено значительное снижение показателей общей резистентности и морфофункционального состояния иммунокомпетентных органов. У 86% использованных в опыте цыплят имелись гистологические проявления иммуносупрессии, причем у 40% бройлеров подавление функции иммунитета было весьма значительным (иммуносупрессия IV—V степени).
После однократной обработки цыплят с выраженными проявлениями иммуносупрессии первые 3 дня наблюдались слабые признаки активации фабрициевой сумки. Уменьшилось количество фолликулов с признаками иммуносупрессии. Через 8 дней после обработки аэрозолем масла базилика количество цыплят, у которых гистологически определялось состояние иммуносупрессии фабрициевой сумки, сокращалось с 86 до 25%. В фолликулах увеличивалось число лимфоцитов и бластов.
Наиболее четко признаки иммуностимуляции проявлялись на 14-й день опыта. Размеры фолликулов имели примерно в 2 раза большую величину, чем в контроле. Происходило дальнейшее улучшение заполнения коркового вещества фолликулов лимфоцитами. Корковое вещество было представлено 7,34 рядами клеток (Р<0,001). Отмечено достоверное увеличение ширины коркового слоя вилочковой железы.
Как показали исследования, стимулирующее действие аэрозоля масла базилика проявляется лишь при использовании 50 мг/м.куб. не более чем в двукратной повторяемости с интервалом 1 день.
При гистологическом изучении состояния фабрициевой сумки и вилочковой железы у цыплят до вакцинации и у части контрольных птиц, не подвергавшихся вакцинации, выявлены изменения, свидетельствующие о наличии у них иммуносупрессивного состояния.
У цыплят, иммунизированных вакциной с добавлением 50 и 75 мг/м.куб. масла базилика, уже на 3-й день после обработки отмечалась активация лимфоидных структур фабрициевой сумки. На 8-й день были очень четко выражены различия между группами, получавшими и не получавшими масло базилика в составе аэрозоля с вакциной. У цыплят, которым вводили масло базилика, показатели морфофункционального состояния фолликулов фабрициевой сумки были примерно на 25% выше, чем у цыплят контрольной группы.
Более сильная реакция с активацией 75—100% фолликулов наблюдалась в фабрициевой сумке уже на 3-й день после введения вакцины с добавлением 75 мг/м.куб. масла базилика. Признаки четкой активации фолликулов фабрициевой сумки после введения одной вакцины регистрировались лишь на 14-й день.
Добавление масла базилика в состав вакцины из расчета 50 и особенно 75 мг/м.куб. благоприятно отражалось на морфологическом состоянии слизистой оболочки респираторного тракта и легких. При этом ослаблялись проявления десквамативного катара и гиперсекреции, которые развивались при введении цыплятам одной вакцины.
В 1963 г. в окрестностях Рима был обнаружен саркофаг с телом молодой девушки, погребенной около 1800 лет назад. Когда саркофаг вскрыли, присутствующие были поражены хорошо сохранившимися мягкими тканями, бровями, ресницами, волосами, заплетенными в косу. От мумии исходил аромат. Впоследствии выяснилось, что одним из основных компонентов бальзамического состава, обладающего большой бактерицидной активностью, был эвкалипт.
Консервирующее действие бальзамических веществ на ткани умерших в течение тысячелетий поражало современников своей эффективностью.
В наше время появились новые задачи, связанные с проблемой консервации клеток крови и тканей различных органов, продуктов жизнедеятельности человека, пищевых продуктов, воды и т.д.
Консервация крови. Консервация клеток крови и тканей человека стала в нашем столетии актуальной проблемой биологии и медицины. Большое значение придается изысканию консервантов, обеспечивающих морфологическую и функциональную целость клеток после длительного консервирования.
Проблема консервирования крови и ее клеточных компонентов развивается в последние десятилетия в двух направлениях: усовершествование методов консервирования при положительных температурах (+4 °С) и разработка методов хранения клеток в замороженном состоянии. В первом направлении доминирует концепция возможно более длительного поддержания метаболизма в клетках, во втором — временной остановки обменных процессов, т.е. сохранения живых клеток в состоянии обратимого анабиоза.
Разработаны теоретические основы консервирования крови, которые способствовали созданию эффективных консервирующих растворов, позволяющих сохранять кровь при 4 °С до 3 нед в физиологически полноценном состоянии. Однако и в улучшенных консервантах уже к концу 3-й недели хранения крови при 4 °С эритроциты становятся метаболически неполноценными. В связи с этим продолжаются изыскания путей дальнейшего улучшения метаболического статуса эритроцитов при их хранении.
При всех известных методах консервирования неизбежно происходит потеря определенного количества ядросодержащих, в том числе живых, клеток.
Поиск дальнейших путей повышения эффективности методов консервации при положительных температурах предопределил интерес к изучению возможностей индуцирования наилучших для консервации условий взаимодействия клеток со средой, повышения резистентности и пр.
Литературные данные свидетельствуют, что решению этих вопросов в значительной мере может способствовать использование для консервации биологически активных веществ и ряда физических факторов. Клетки периферической крови, отличавшиеся друг от друга не только по морфологическим особенностям, но и по типу обмена, в условиях консервирования обладают различной устойчивостью к физико-химическим воздействиям окружающей среды.
Особое значение приобретает исследование мембран клеток при их консервировании. Именно плазматическая мембрана клетки играет роль биологического барьера, обусловливающего проницаемость для различных веществ и воды. Мембрана ответственна за проникновение в клетку субстратов питания из плазмы и консервирующих растворов и за выделение из клеток продуктов распада, образующихся в процессе обмена веществ. Для этого на клетки воздействуют поверхностно-активными веществами, мембранотропными агентами, взаимодействующими с липидами мембран, антиоксидантами и др.
Серия исследований, проведенных в нашей лаборатории по изучению биологического действия ЭМ на клетки, убедила нас, что разработка консервантов клеток на основе ЭМ перспективна. Такие свойства некоторых ЭМ, как высокая бактерицидная антиоксидантная активность, способность стабилизировать клеточные мембраны, повышать митотическую активность клеток, влиять на репарацию ДНК, на ферментные и обменные процессы клеток, К—Na-ионные каналы, позволили предположить возможность использования ЭМ в качестве консервантов клеток.
Первые серии экспериментов показали с достаточной степенью достоверности (0,05>Р>0,0001), что ЭМ шалфея, кориандра, базилика, непеты, полыни, эвкалипта, бархатцев в количестве 2,5∙10-5 мг/мл могут повышать число жизнеспособных клеток в культуре на 10— 20% по отношению к контролю. В дальнейшем было выявлено, что аналогичным действием обладают большинство из исследованных масел. Разведение 2,5∙105 —2,5∙10-8 мг/мл способствовало увеличению числа жизнеспособных клеток. Более низкие концентрации эфирных масел не оказывали влияния на клетки, более высокие (2,5∙10-1) подавляли рост культур (табл. 22).
Функциональная активность лимфоцитов снижалась и в контрольной, и в опытных группах по мере увеличения срока культивирования. Тем не менее отмечена статистически достоверная разница увеличения количества бластных форм клеток на 7-е сутки культивирования при консервировании их с помощью ЭМ. Следовательно, добавление в среду небольших концентраций ЭМ способствует не только выживаемости клеток, но и сохранению их функциональной активности.
Таблица 22. Жизнеспособность лимфоцитов в культуре с добавлением ЭМ
| Контроль | ЭМ полыни | ЭМ шалфея | ЭМ эвкалипта | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | |
| 47,41 Р | 57,09 | 65,55 | 60,05 | 63,34 | 68,05 | 67,6 | 51,1 | 51,2 | 57,05 |
Примечания.
1. Конечная концентрация указанного вещества — 2,5·10-6 мг/мл среды.
2. Конечная концентрация указанного вещества — 2,5·10-7 мг/мл среды.
3. Конечная концентрация указанного вещества — 2,5·10-8 мг/мл среды.
Композиции интерферон + базилик и интерферон + базилик + витамин Е (также с высокой степенью достоверности) повышали количество жизнеспособных клеток в культуре на 10-е сутки культивирования относительно контроля — 0,05<Р<0,001. В отдельных случаях количество жизнеспособных клеток в 2 раза превышало аналогичный показатель в контроле (табл. 23).