Квазилинейчатые спектры удается получить для ограниченного числа органических соединений. Для большинства же спектры излучения обладают слабо выраженной структурой. Получить более характеристичные спектры можно, используя синхронное сканирование. Это специфическая особенность метода молекулярной люминесцентной спектроскопии. При одновременном сканировании монохроматов возбуждение излучения и излучение с некоторым постоянным сдвигом ∆П в спектре синхронной люминесценции гипотетического соединения сигнал появится только при одновременном совпадении поглощения по длинам волн монохроматора возбуждения излучения с максимумом полосы спектра возбуждения и положения монохроматора люминесценции – с максимумом полосы спектра люминесценции.
Современная техника обработки информации позволяет получать трехмерные спектры. С использованием фотоприемников - видиконов можно измерить один такой спектр за время меньше 20 мс. Трехмерный спектр люминесценции легко может быть преобразован в двухмерный. Двухмерный спектр возбуждения люминесценции представляет собой набор горизонтальных сечений соответствующего трехмерного спектра. Двухмерные спектры напоминают отпечатки пальцев (их так часто называют), они индивидуальны для каждого соединения, их используют для быстрой идентификации органических соединений.
Еще одно интенсивно развивающееся направление в люминесцентном органическом анализе – фосфоресценция при комнатной температуре. Появление фосфоресценции при комнатной температуре связано с уменьшением скорости тушения кислородом триплетных состояний молекул сорбированных органических соединений. Это уменьшение обусловлено снижением подвижности молекул вследствие образования водородных или более прочных связей сорбат – сорбент.
Определение активности адреналина основано на его способности вызывать повышенное артериальное давление у кроликов.
Стандартный препарат. Стандартным препаратом при испытании адреналина является синтетический кристаллический адреналин, сохраняемый в запаянных ампулах оранжевого стекла в защищенном от света месте. Вскрытые ампулы должны храниться в вакуум-эксикаторе над пятиокисью фосфора.
Описание метода. Для опытов берут здоровых кроликов обоего пола, весом 2,5 – 3 кг. Опыт проводят под уретановым (1г на 1 кг веса животного) или эфирным наркозом.
У кроликов на одной стороне отпрепаровывают яремную вену, а на противоположной стороне шеи - сонную артерию. Артерию соединяют с ртутным манометром при помощи каучуковой трубки, наполненной противосвертывающим раствором. Введение препаратов производят в яремную вену через вставленную в нее канюлю или при помощи очень тонкой иглы. За 15 минут до начала испытания кролику вводят внутривенно 1 мл 0,5% раствора атропина сульфата. Введение отдельных доз раствора адреналина производят с постоянной скоростью (1 мл в 5 сек). Каждое новое введение производят через 5 мин, считая с момента возвращения к норме кривой кровяного давления после предыдущего введения. Общий объем вводимой дозы не должен превышать 1 мл. Измерение высоты подъема производят от истинной абсциссы.
Целью опыта является определение доз, вызывающих подъем кровяного давления на одну и ту же высоту при введении испытуемого и стандартного растворов.
Испытание 0,1% раствора адреналина. Препарат разводят 0,9% раствором хлорида натрия в соотношении 1 :50 для получения раствора 1 : 50000.
Стандартный препарат растворяют в 0,1 н растворе соляной кислоты в отношении 1 : 100. Полученный раствор доводят до концентрации 1 : 1000. Путем дальнейшего разведения этого раствора в 50 раз 0,9% раствором хлорида натрия достигают нужной для опыта концентрации 1 : 50000.
Определив сначала дозу раствора стандартного препарата, способную вызвать субмаксимальный для данного животного подъем кровяного давления, подбирают дозу исследуемого раствора, способную дать то же действие. Подыскав соответствующие дозы повторным введением растворов исследуемого и стандартного препаратов адреналина, убеждаются в одинаковой силе действия найденных доз растворов.
Зная содержание стандартного препарата в найденной дозе стандартного раствора, вычисляют содержание адреналина в исходном растворе испытуемого образца.
Для каждого испытания требуются средние данные, полученные при опытах не менее чем на 3-х кроликах.
Глава 3. ФАРМАКОПЕЙНЫЕ ПРЕПАРАТЫ
3.1. Solutio Adrenalini hydrochloride 0,1%
Состав: Адреналина........................................ 1 г
Натрия хлорида................................. 8 г
Хлоробутанолгидрата....................... 5 г
Натрия метабисульфата.................... 1 г
Раствора соляной кислоты................ 0,01 н до 1 л
Раствор фильтруют, разливают в асептических условиях в ампулы нейтрального оранжевого стекла по 1 мл (раствор для инъекций) или в герметически закрытые флаконы того же стекла емкостью 10 мл, заполняя их доверху.
Описание. Бесцветный прозрачный раствор.
Подлинность.
· 1 мо препарата смешивают с 4 мл воды и прибавляют 1 каплю раствора хлорида окисного железа; тотчас же появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое от прибавления 1 капли раствора аммиака переходит в вишнево-красное и затем в коричнево-красное.
· К 1 мл препарата прибавляют 2 мл 1% раствора йодата калия, 1 мл разведенной фосфорной кислоты и смесь нагревают в течение 1 минуты при 60°С; появляется стойкое, интенсивное красно-фиолетовое окрашивание.
· К 1 мл препарата прибавляют 5 мл буферного раствора (рН = 3,6) и 2 мл 0,1 н. раствора йода, оставляют на 5 мин, после чего смешивают с 3 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия. Рствор сохраняет темно-красное окрашивание (отличие от НА)
рН 3,0 – 3,5
Тяжелые металлы 10 мл препарата не должны содержать тяжелые металлы.
Хранение. Список Б. В прохладном, защищенном от света месте.
Высшая разовая доза под кожу 1 мл
Высшая суточная доза под кожу 5 мл
Примечание. Для инъекций применяют раствор адреналина гидрохлорида 0,1% в ампулах (Solutio Adrenalini hydrochloridi 0,1% pro injektionibus)
3.2. Noradrenalini hydrotartas.
Норадреналина гидротартрат
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса. Легко изменяется под действием света и кислорода воздуха.
Растворимость. Легко растворим в воде, мало растворим в спирте, практически нерастворим в эфире и хлороформе.
Подлинность.
· 5 мл препарата растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1 каплю раствора хлорида окисного железа; появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое от прибавления одной капли раствора аммиака переходит в вишнево-красное, а затем в оранжево-красное.
· 1 мл 0,1% раствора препарата разводят гидротартратным буферным раствором с рН = 3,56 до объема 10 мл и прибавляют 2 мл 0,1 н раствора тиосульфата натрия. Раствор должен быть бесцветным или слабо-розовым (отличие от адреналина, вызывающего интенсивное красное окрашивание). Повторяют определение с 10 мл буферного раствора с рН = 6,5; образуется красно-фиолетовое окрашивание.
Раствор препарата (1 : 100) дает желтый осадок при прибавлении 0,5 мл раствора едкого натра.
Температура плавления 100 - 106° (плав мутный, препарат предварительно не высушивают).
Удельное вращение от -10° до -12° в пересчете на сухое вещество (2% водный раствор).
Удельный показатель поглощения. Е1%1 см при длине волны 279 нм от 769084 (0,005% водный раствор)
Кислотность рН = 3,5 – 5,0 (1% водный раствор)
Вода 0,05 г препарата (точная навеска) титруют реактивом К.Фишера. Содержание воды должно быть 4,5 – 6,0%.
Сульфатная зола из 0,2 г препарата должна быть невесомой.
Хранение. Список Б. В запаянных ампулах или в хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света.
3.3. Solutio Noradrenolini hydrotartratis 0,2% pro injektionibus.
Раствор норадреналина гидротартрата 0,2% для инъекций
Состав: Норадреналина гидротартрата ................ 1 г
Натрия метабисульфита.......................... 1 г
Натрия хлорида....................................... 8 г
Воды для инъекций.................................. до 1 л
Раствор фильтруют, разливают в ампулы нейтрального оранжевого стекла по 1 мл и стерилизуют текучим паром при 100° в течение 15 мин.
Описание. Бесцветная прозрачная жидкость
Подлинность. Препарат дает первую и вторую реакцию подлинности, указанные для «Noradrenalini hydrotartas».
рН = 3,0 – 4,5
Хранение. Список Б. В прохладном защищенном от света месте.
3.4. Ephedrine hydrochloridum
Эфедрина гидрохлорид
Описание. Бесцветные игольчатые кристаллы или белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса.
Растворимость. Легко растворим в воде, растворим в 95% спирте, практически нерастворим в эфире.
Подлинность
· 0,01 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляют 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра; появляется синее окрашивание. При взбалтывании этого раствора с 1 мл эфира, эфирный слой окрашивается в фиолетово-красный цвет, водный слой сохраняет синее окрашивание.
· 0,05 г препарата растворяют в 1 мл воды, прабавляют кристаллик феррицианида калия и нагревают до кипения; появляется запах бензальдегида.
· 0,01 г препарата дает с 0,5 мл разведенной азотной кислоты и 0,5 мл раствора нитрата серебра, образуется белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.
Температура плавления 216 - 220°
Удельное вращение от -33° до 36° (5% водный раствор).
Кислотность 0,2 г препарата растворяют в 5 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды, прибавляют 1 каплю раствора метилового красного; появившееся красное окрашивание должно переходить в желтое от прибавления не более 0,15 мл 0,05Н раствора едкого натра.
Соли аммония 0,3 г препарата помещают в пробирку, приливают 2 мл воды и 1 мл раствора натра. В верхнюю часть пробирки вкладывают тонким слоем небольшое количество ваты. Сверху пробирки помещают смоченную водой красную лакмусовую бумагу. Пробирку помещают на пять минут в водяную баню с t = 0,5°. Не должен выделяться аммиак, который определяют по запаху и посинению красной лакмусовой бумаги.