№48 Фармация (стр. 75 из 142)

Известно, что витамины, макро- и микроэлементы необходимы для реализации большинства жизненно важных функций организма, в том числе и для обеспечения нормального функционирования иммунной системы [1, 8, 12, 14, 15б 19]. Витаминам принадлежит значимая роль в обеспечении адекватного иммунного ответа, функционировании систем метаболизма ксенобиотиков, а также в формировании антиоксидантного потенциала организма, что имеет важное значение в поддержании устойчивости человека к различным инфекциям и другим неблагоприятным внешним факторам [5, 6, 7]. К сожалению, работ, посвященных изучению влияния витаминов на функции иммунной системы, не так уж много. Большая часть их касается влияния витаминов на показатели врожденного иммунитета [4]. В то же время, витаминные препараты относительно безопасны и при рациональном использовании могут дать хороший лечебный эффект. Одним из новых перспективных препаратов является Алвитил, выпускаемый фирмой Solvay Pharma (France) в виде сиропа и в виде драже. Сироп Алвитил имеет приятный вкус сливы Мирабель, созданный натуральный и содержит в своем составе необходимые для детского организма водорастворимые (С, B₁, B₂, B₅, B₆, B₁₂, РР, фолиевую кислоту, биотин) и жирорастворимые витамины А, D, Е (ретинол, кальциферол и токоферол). Препарат разрешен к применению с 2-х летнего возраста.

Цель

Целью настоящего исследования явилась оценка влияния препарата Алвитил на основные параметры иммунного статуса часто болеющих детей.

Матералы и методы

Под наблюдением находилось 30 детей в возрасте от 3 до 8 лет. Из них 15 детей составили первую группу (с применением Алвитила в комплексном лечении) и 15 - контрольную группу, включающую детей 1 группы здоровья, не принимавших витамины. В основной группе частота ОРВИ была 5 и более случаев в год (в среднем 6,6±1,2). В первой группе 7 часто болеющих ОРВИ детей перенесли острый бронхит, у 3 детей был обструктивный бронхит. 9 из 15 детей болели ОРВИ в течение года более чем 7 раз. Во время наблюдения аллергические реакции у детей отсутствовали. В период обследования дети не болели и находились на диспансерном наблюдении в консультативно-диагностической поликлинике ГУ Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова МЗ РФ. Реабилитационные мероприятия заключались в назначении рационального питания и режима дня с исключением переутомления и перевозбуждения ребенка.

Поливитаминный препарат Алвитил назначался детям в лечебной дозе по 5 мл. 1 раз в сутки курсом 21 день. Всем детям было проведено общее клиническое и иммунологическое исследование. Иммунологическое обследование проводилось до начала и по окончании приема Алвитила.

Состояние иммунного статуса оценивали по показателям клеточного, гуморального и врожденного иммунитета. Забор периферической крови осуществлялся из локтевой вены в количестве 5 мл. Выделение мононуклеарных клеток и полиморфноядерных лейкоцитов из периферической крови осуществлялось стандартным методом скоростного центрифугирования в градиентах плотности фиколла-верографина (d-1,078 и d-1,114 соответственно) [17].

Изучение популяционного состава и экспрессии активационных маркеров на поверхности лимфоцитов осуществлялось стандартным методом проточной цитофлюорометрии на цитометре FACScan ("Becton Dickinson", USA) c использованием моноклональных антител той же фирмы [9]. Для учета неспецифического окрашивания использовали Simultest Control (мышиные IgG1-FITC + IgG2a-PE, "Becton Dickinson", USA). Клетки метили анти-Hle-1 и анти-Leu-M3-антителами с целью наложения оптимального окна дискриминации (гейта) на точечном графике прямого и бокового светорассеяния, которое включало более 95% клеток с фенотипом CD45+CD14-, то есть относилось к лимфоцитам, или CD45+CD14+, то есть относилось к нейтрофилам. На поверхности нейтрофилов оценивали экспрессию CD16 (низкоаффинный Fc рецептор III типа). Анализ результатов проводили в программе Lysys II.

Продукцию фактора, угнетающего миграцию лейкоцитов (MIF), оценивали по миграционному индексу (МИ) в прямом капиллярном тесте в ответ на стимуляцию ФГА [3].

Оценку бактерицидной активности нейтрофилов проводили в реакции спонтанного и стимулированного зимозаном восстановления нейтрофилами нитросинего тетразолиевого (НСТ) [2]

Основные классы иммуноглобулинов (IgG, IgА, IgM) определяли методом радиальной иммунодиффузии по Manchini [20].

Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови оценивали методом осаждения ЦИК 4% раствором полиэтиленгликоля [9].

Статистическая обработка материала проводилась с помощью программы "Статистика".

Результаты и обсуждение

Поливитаминный препарат Алвитил хорошо переносился всеми детьми, не вызывая побочных и аллергических реакций, поэтому все 15 детей прошли полный курс лечения алвитилом в течение 21 дня. Как видно из данных, приведенных в таблице №1, назначение Алвитила приводило к выраженному улучшению показателей функции вегетативной нервной системы у детей 1 группы. После приема Алвитила отмечалась отчетливая положительная динамика всех показателей. Однако в большей степени, восстанавливались показатели двигательной активности, аппетита и окраски кожных покровов.

Таблица 1. Оценка клинической эффективности применения Алвитила у часто и длительно болеющих детей.

^х - различия статистически достоверны с показателями контрольной группы; ^х - р<0.05, ^хх - p<0.02, ^ххх - p<0.01, ^хххх - p<0.001

Данные по влиянию Алвитила на иммунологические параметры приведены в таблице №2. Проведенный анализ результатов обследования ДЧБ детей показал, что наиболее значимые изменения в иммунологических параметрах отмечались в показателях, характеризующих популяционный состав и функциональную активность лимфоцитов, и в меньшей степени затрагивали нейтрофилы. Так, в периферической крови ДЧБ детей достоверно снижался уровень Т-лимфоцитов и Th по сравнению с показателями здоровых детей (p<0.001, в обоих случаях). Параллельно у ДЧБ детей отмечалось угнетение функциональной активности Т-лимфоцитов по данным продукции МИФ в ответ на стимуляцию клеток ФГА по сравнению с таковой у здоровых детей (p<0.01). В то же время, в периферической крови ДЧБ детей достоверно повышался уровень CD16+ NK (p<0.02) и отмечалась выраженная тенденция к повышению содержания CD56+ лимфоцитов по сравнению с показателями детей контрольной группы (p>0.05).

Таблица 2. Влияние Алвитила на показатели иммунного статуса длительно и часто болеющих детей в возрасте 3-8 лет.

^х - различия статистически достоверны с показателями контрольной группы; ^х - р<0.05, ^хх - p<0.02, ^ххх - p<0.01, ^хххх - p<0.001
^у - различия статистически достоверны с показателями до назначения "Алвитила"; ^y - р<0.05, ^yy - p<0.02, ^yyy - p<0.01, ^yyyy - p<0.001.

СD16+ и CD56+ лимфоциты являются различными популяциями естественных киллеров и осуществляют разные функции. К-киллеры (CD16+) принимают участие, в основном, в реакции антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ). Молекула CD16 является Fc -рецептором третьего типа, которые распознают Fc-фрагменты иммуноглобулина G и обеспечивают распознавание клеток, покрытых антителами. Основной функцией К-киллеров является осуществление противоинфекционной защиты, причем ЕК лизируют инфицированные вирусом клетки без предварительной сенсибилизации, непосредственно связываясь с мишенями за счет лектиновых рецепторов, а также за счет Fc-фрагментов IgG антител [16]. Наиболее существенный вклад NK клетки вносят в предупреждение ранней прогрессирующей вирусной инфекции [11, 13, 14]. CD56+ ЕК не проявляют выраженной цитотоксической активности, но их функциональная активность может усиливаться под влиянием цитокинов Th1 типа. Цитотоксическая активность этого типа ЕК зависит от перфоринового механизма. Кроме того, они продуцируют ТФР , обладающего иммуносупрессивным и иммунорегулирующим действием [16].

У часто болеющих детей отмечалось также увеличение содержания В-лимфоцитов (p<0.02).

Важную информацию о состоянии иммунной системы дает анализ экспрессии активационных маркеров на поверхности ИКК. Следует отметить, что у ДЧБ детей показатели ранней активации лимфоцитов (CD25+, CD4+CD25+) практически не отличались от таковых в контрольной группе (p>0.05, в обоих случаях). В то же время, общее количество лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR АГ, у ДЧБ детей было достоверно выше, чем в контроле (p<0.02). Однако содержание Т-лимфоцитов, экспрессирующих молекулы главного комплекса гистосовместимости 2 класса (CD3+HLA-DR+), у этих детей было существенно сниженным по сравнению с показателями здоровых детей (p<0.001). Эти данные соответствовали описанному выше снижению показателей клеточного иммунитета у ДЧБ детей. Известно, что HLA-DR АГ экспрессируются лимфоцитами на более поздних стадиях активации, и их экспрессия тесно связана с процессами презентации антигена [16]. Можно предположить, что изменения экспрессии HLA-DR АГ на поверхности лимфоцитов периферической крови ДЧБ детей происходят, в основном за счет популяции В-лимфоцитов. Полученные данные, вероятнее всего, свидетельствуют об активации В-лимфоцитов. Это предположение подтверждается результатами оценки их функциональной активности. Для группы ДЧБ детей было характерно повышение уровня сывороточного IgG (p<0.01) и ЦИК (p<0.01).

Функциональные параметры нейтрофилов, в отличие от показателей лимфоцитов, у ДЧБ детей мало отличались от параметров здоровых детей. Так, спонтанная и индуцированная зимозаном НСТ-активность нейтрофилов была сравнима с показателями контрольной группы (p>0.05, в обоих случаях). Изменение НСТ-активности нейтрофилов тесно связано с активацией так называемого респираторного взрыва и синтезом активных форм кислорода, которые обеспечивают кислородозависимые механизмы противоинфекционной защиты [14]. Однако у ДЧБ детей наблюдалось нерезкое, но достоверное снижение экспрессии Fc рецептора III типа (CD16), что, возможно, отражает нарушение кислородонезависимых механизмов защиты, например, АЗКЦ или поглотительной активности клеток.