Метод основан на образовании комплексов пуриновых оснований с солями серебра.

Материалы и реактивы: концентрированный раствор аммиака; 1 %-ный раствор АgNО₃; дрожжи (в круглодонную колбу для гидролиза помещают 1 г пекарских дрожжей, доливают 20 мл 10 %-ного раствора серной кислоты и 20 мл дистиллированной воды, колбу закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника стеклянная трубка длиной от 20 до 30 см, кипятят под тягой в течение 1 ч на асбестовой сетке при слабом нагревании, после окончания гидролиза жидкость охлаждают, доводят водой до первоначального объема и фильтруют).

Оборудование: колба, пипетки, пробирки, воронки, стеклянная трубка длиной от 25 до 30 см, газовая горелка.

Ход работы. К 1 мл гидролизата добавляют концентрированный раствор аммиака до получения щелочной среды (по лакмусу) и 0,5 мл раствора АgNО₃. Через 3…5 мин образуется рыхлый осадок серебряных солей пуриновых оснований.

7.2 Лабораторная работа «Обнаружение белков в составе
нуклеопротеидов»

Для подтверждения наличия белков в составе нуклеопротеидов проводят биуретовую реакцию. Эта реакция характерна для соединений, содержащих не менее двух пептидных связей. Такие полимеры (белки) в щелочной среде образуют с сульфатом меди окрашенные комплексные соединения, цвет которых зависит от длины полипептидной цепи. Раствор нативного белка дает сине-фиолетовое окрашивание, а продукты его гидролиза (пептиды) – красно-фиолетовое.

Материалы и реактивы: гидролизат нуклеопротеидов дрожжей; 10 %-ный раствор гидроксида натрия; 1 %-ный раствор сульфата меди.

Оборудование: пробирки, пипетки, капельница.

Ход работы. В пробирку вносят 0,5 мл гидролизата дрожжей, нейтрализуют (по лакмусу) раствором NaОН, затем добавляют 0,5 мл раствора NаОН и 2-3 капли раствора СuSО₄. Смесь перемешивают и наблюдают появление окраски, что свидетельствует о присутствии в пробе полипептидов, образующихся в результате гидролиза белковой части нуклеопротеидов.

8 СОДЕРЖАНИЕ ЛАБОРАТОРНОГО ПРАКТИКУМА
ПО БИОХИМИИ

1. Лабораторная работа № 1 (4 часа). «Техника безопасности, правила работы в биохимической лаборатории, методы определения рН среды». Правила безопасной работы в химической лаборатории, организация лаборатории, правила пользования электрооборудовани-ем, приборами. Электрометрическое определение рН. Индикаторный метод измерения рН.

2. Лабораторная работа № 2 (4 часа). «Углеводы и их обмен». Структура, свойства и функции углеводов в организме. Количественное определение углеводов в растворах (методом Бертрана, методом Хангендорна-Иенсена и др.).

3. Лабораторная работа № 3 (4 часа). «АМИНОКИСЛОТЫ, ПЕПТИДЫ, БЕЛКИ И ИХ ОБМЕН». Физико-химические свойства белков (высаливание, осаждение сернокислым аммонием, хлористым натрием, сернокислым магнием, органическими кислотами, этиловым спиртом, ацетоном). Количественное определение белка в растворе методом Матиопуло, формольным титрованием, методом Лоури. Количественное определение смеси аминокислот в растворе по Сьоренсону.

4. Лабораторная работа № 4 (4 часа). «Ферменты». Изучение действия ферментов. Свойства ферментов. Определение активности ферментов (каталазы, пероксидазы, амилазы, протеазы) в солоде ржи, проса, ячменя, овса, пшеницы, в молоке, в дрожжевой воде. Влияние рН и температуры на активность ферментов.

5. Лабораторная работа № 5 (4 часа). «Липиды и их обмен». Омыление жира и образование свободных жирных кислот. Определение числа омыления липидов (касторовое масло, подсолнечное масло, сливочное масло). Определение кислотного числа жира. Определение эфирного, йодного, перекисного чисел жира.

6. Лабораторная работа № 6 (4 часа). «Витамины». Качественные реакции на витамины А, Е, К, D. Реакция с диазореактивом на тиамин (В₁), реакция восстановления рибофлавина (В₂), реакция на пиридоксин (В₆), определение содержания фолиевой кислоты в дрожжевом экстракте. Количественное определение витамина С в морсах и соках.

7. Лабораторная работа № 7 (4 часа). «Нуклеиновые кислоты и нуклеопротеиды». Выделение нуклеопротеидов. Обнаружение углеводов, пуриновых оснований, фосфорной кислоты, белков в составе нуклеопротеидов.

8. Лабораторная работа №8 (4 часа). Защита выполненных лабораторных работ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кучеренко, Н.Е. Биохимия: практикум / Н.Е. Кучеренко
[и др.]. – К.: Высшая школа, 1988. – 128 с.

2. ГОСТ 7.32-2001 СИБИД. Отчет о научно-исследовательской работе. Структура и правила оформления.

3. ГОСТ 8.417-20002 ГСИ. Единицы физических величин.

4. Равич-Щербо, М.И. Физическая и коллоидная химия /
М.И. Равич-Щербо, В.В. Новиков. – М.: Высшая школа, 1975. – 255 с.

5. Кушманова, О.Д. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии / О.Д. Кушманова, Г.М. Ивченко. – М.: Медицина, 1983. – 272 с.

6. Ленинджер, А. Биохимия / А. Ленинджер. – М.: Мир, 1974. – 957 с.

7. Методы практической биохимии // Под редакцией Б. Уильямс, К. Уилсон. – М.: Мир, 1978. – 268 с.

8. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. – М.: Медицина, 1982. – 752 с.

9. Аверьянова, Е.В. Крахмал: методические указания по курсу «Методы переработки растительного сырья» / Е.В. Аверьянова,
В.П. Севодин. – Бийск: Изд-во АлтГТУ, 1999. – 33 с.

10. Викторов, Д.П. Малый практикум по физиологии растений / Д.П. Викторов. – М: Высшая школа, 1983. – 120 с.

11. Гильманов, А.П. Методы очистки и изучения ферментов растений / А.П. Гильманов, О.В. Фурсов, А.П. Францев. – Алма-Ата: Наука, 1981. – 84 с.

12. Кошелев, Ю.А. Витамины: методические указания к лабораторному практикуму по курсам «Биохимия», «Пищевая химия» /
Ю.А. Кошелев, М.Э. Ламберова. – Бийск: Изд-во АлтГТУ, 2005. – 56 с.

13. Мезенцева, Н.И. Определение активности оксидоредуктаз растений, экстрагируемых различными буферами / Н.И. Мезенцева // И.Л. КазГос ИНТИ ВК ЦНТИ. - № 2, 1995. – 4 с.

14. Мезенцева, Н.И. Применение электрофореза белков /
Н.И. Мезенцева, С.В. Лаптев, И.В. Рогова // И.Л. КазГос ИНТИ ВК ЦНТИ. - № 1, 2000. – 4 с.

15. Мезенцева, Н.И. Биохимия: методические указания к изучению дисциплины и выполнению контрольных работ для студентов всех форм обучения / Н.И. Мезенцева, Е.В. Аверьянова, С.В. Лаптев. – Бийск: Изд-во АлтГТУ, 2006. – 96 с.

16. Пустовалова, Л.М. Практикум по биохимии / Л.М. Пустовалова. – Ростов-н/Д: Феникс, 1999. – 544 с.

17. Рухлядева, А.П. Методы определения активности гидролитических ферментов / А.П. Рухлядева, Г.В. Полыгалина. – М: Легкая и пищевая промышленность, 1981. – 287 с.

18. Савронь, Е.С. Практикум по биохимии животных / Е.С. Савронь, В.И. Воронянский. – М.: Высшая школа, 1967. – 239 с.

19. Северин С.Е. Практикум по биохимии / С.Е. Северин,
Г.А. Соловьев. – М: Изд-во МГУ, 1989. – 509 с.

20. Третьяков, Н.Н. Практикум по физиологии растений /
Н.Н. Третьяков, Т.В. Карнаухова, Л.А. Паничкин. – М: Агропромиздат, 1990. – 271 с.

21. Филиппович, Ю.Б. Практикум по общей биохимии /
Ю.Б. Филиппович, Т.В. Бурова, Г.А. Севастьянова. – М: Изд-во МГУ, 1982. – 78 с.

22. Практикум по биохимии / под редакцией В.П. Комова. – М.: Дрофа, 2004. – 215 с.

24. Сельскохозяйственная биотехнология / под редакцией В.С. Шевелухи. – М.: Высшая школа, 1998. – 415 с.

25. Суханова, Г.А. Биохимия клетки / Г.А. Суханова, В.Ю. Серебров. – Томск: Изд-во ТГУ, 2000. – 184 с.

26. Лаптева, Т.А. Основы физколлоидной химии: учебно-методическое пособие для студентов факультета ветеринарной медицины / Т.А. Лаптева. – Томск: Изд-во ТСХИ, 2006. – 38 с.

27. Коряжнов, В.П., Макаров В.А. Практикум по ветеринарно-санитарной экспертизе молока и молочных продуктов / В.П. Коряжнов, В.А. Макаров. – М.: Колос, 1981. – 170 с.

28. Лаптев, С.В. Лабораторный практикум по ветеринарно-санитарной экспертизе с основами технологии и стандартизации продуктов / С.В. Лаптев, Н.И. Мезенцева. - Томск: Изд-во ТСХИ, 2008. - 146 с.