Практикум по курсу «Биохимия» для студентов специальностей 260204 «Технология бродильных производств и виноделие» и240901 «Биотехнология» Бийск (стр. 5 из 13)

Гексацианоферрат калия (III) берут в избытке и неиспользованный в реакции его остаток определяют йодометрически в кислой среде (например, в присутствии уксусной кислоты), титруя количество образовавшегося йода тиосульфатом натрия

В качестве индикатора на молекулярный йод используют крахмал.

Содержание глюкозы рассчитывают по специальной таблице 5, которая составлена так, что в ней определенному объему тиосульфата натрия, затраченного на титрование йода, а, следовательно, избытка гексацианоферрата калия (III), соответствует то число миллиграммов глюкозы, которое прореагировало в реакции.

Таблица 5 – Зависимость содержания глюкозы от объема титранта

Объем тиосульфата натрия, мл	0,00	0,01	0,02	0,03	0,04	0,05	0,06	0,07	0,08	0,09
0,0	0,385	0,382	0,379	0,376	0,373	0,370	0,367	0,364	0,361	0,358
0,1	0,355	0,352	0,350	0,348	0,345	0,343	0,341	0,338	0,336	0,333
0,2	0,331	0,329	0,327	0,325	0,323	0,321	0,318	0,316	0,314	0,312
0,3	0,310	0,308	0,306	0,304	0,302	0,300	0,298	0,296	0,294	0,292
0,4	0,290	0,288	0,286	0,284	0,282	0,280	0,278	0,276	0,274	0,272
0,5	0,270	0,268	0,266	0,264	0,262	0,260	0,259	0,257	0,255	0,253
0,6	0,251	0,249	0,247	0,245	0,243	0,241	0,240	0,238	0,236	0,234
0,7	0,232	0,230	0,228	0,226	0,224	0,222	0,221	0,219	0,217	0,215
0,8	0,213	0,211	0,209	0,208	0,206	0,204	0,202	0,200	0,199	0,197
0,9	0,195	0,193	0,191	0,190	0,188	0,186	0,184	0,182	0,181	0,179
1,0	0,177	0,175	0,173	0,172	0,170	0,168	0,166	0,164	0,163	0,161
1,1	0,159	0,157	0,155	0,154	0,152	0,150	0,148	0,146	0,145	0,143
1,2	0,131	0,139	0,138	0,136	0,134	0,132	0,131	0,129	0,127	0,125
1,3	0,124	0,122	0,120	0,119	0,117	0,115	0,113	0,111	0,110	0,108
1,4	0,106	0,104	0,102	0,101	0,099	0,098	0,097	0,095	0,093	0,092
1,5	0,088	0,086	0,084	0,083	0,081	0,079	0,077	0,075	0,074	0,072
1,6	0,070	0,068	0,066	0,065	0,063	0,061	0,059	0,057	0,056	0,054
1,7	0,052	0,050	0,048	0,047	0,045	0,043	0,041	0,039	0,038	0,036
1,8	0,034	0,032	0,031	0,029	0,027	0,025	0,024	0,022	0,021	0,019
1,9	0,017	0,015	0,014	0,012	0,010	0,008	0,006	0,005	0,003	0,002

Материалы и реактивы: вата гигроскопическая для фильтрования растворов, вытяжка из солода, 0,1 моль/л раствор гидроксида калия, 0,45 %-ный раствор сульфата цинка, щелочной раствор гексацианоферрата калия (III) (1,65 г K₃Fe(CN)₆ и 10,6 г безводного карбоната натрия растворяют в дистиллированной воде до объема 1 л), раствор сульфата цинка в растворе хлорида натрия(10 г сульфата цинка и 50 г хлорида натрия растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 200 мл), раствор иодида калия (5 г иодида калия растворяют в 25 мл дистиллированной воды), 0,05 моль/л раствор тиосульфата, 3 %-ный раствор уксусной кислоты, 1 %-ный раствор крахмала.

Оборудование: стеклянные палочки, пробирки, колбы конические (объем 50 мл), воронки стеклянные, пипетки, капельницы, водяная баня, бюретки, штатив для пробирок, чашки, часы.

Ход работы. В две пробирки помещают по 1 мл раствора гидроксида калия. В одну из них (проба) добавляют также 0,1 мл вытяжек, а в другую (контроль) 0,1 мл дистиллированной воды. Затем вносят по
5 мл 0,45 %-ного раствора сульфата цинка и после перемешивания ставят на 2-3 минуты на кипящую водяную баню. После этого смесь фильтруют в конической колбе через ватный тампон, вложенный в воронку. Воронку и ватный тампон промывают горячей дистиллированной водой три раза по 2 мл, не наливая новой порции воды до полного оттока предыдущей. К фильтрату в каждой колбе приливают 2 мл щелочного раствора гексацианоферрата калия (III), и смеси кипятят на водяной бане в течение 15 мин. В каждую колбу добавляют по 2,6 мл раствора сульфата цинка в растворе хлорида натрия, по 0,4 мл раствора иодида калия и, после перемешивания, по 2 мл раствора уксусной кислоты и по три капли раствора крахмала. Смесь титруют 0,05 моль/л раствором тиосульфата натрия до исчезновения окраски, образовавшейся при добавлении крахмала. По затраченным на титрование пробы и контроля объемам тиосульфата натрия, используя таблицу 5, определяют массу глюкозы и вычисляют разность между массой глюкозы в контроле и пробе.

Массовую концентрацию глюкозы (мг/мл) рассчитывают по формуле:

,

где А и В – массы глюкозы, определенные по таблице, в пробе и контроле;

V – объем вытяжки, взятый для анализа.

2.3 Лабораторная работа «Определение концентрации
лактозы в молоке»

В основе метода лежит способность альдегидной группы лактозы в щелочной среде окисляться молекулярным йодом: