Схема изучения стабильности и трансформации ЛС в воде включает минимальный и оптимальный наборы взаимодополняющих факторов (Приложение 7).
4.3.1. Методы определения стабильности и трансформации включают физико-химические аналитические методики, органолептические исследования и методы биотестирования.
4.3.2. Класс опасности веществ по стабильности определяется последовательно на основании комплексной оценки (Приложение 8). В качестве лимитирующего показателя стабильности химического агента принимается тау1/2 в "модельном водоеме" или показатели биоразлагаемости. Оценка опасности продуктов трансформации - по результатам опытов с дополнительными деструктирующими факторами.
4.3.3. Гигиеническая оценка опасности вещества и нормирование его в воде зависят от класса стабильности (Приложение 8).
Для чрезвычайно стабильных веществ, способных к биоаккумуляции в трофических цепях, класс опасности по токсико-гигиеническим показателям изменяется на единицу. Например, вещество 2 класса опасности, но чрезвычайно стабильное (1 класс стабильности), относят к 1 классу опасности. При установлении величины ПДК вводится дополнительный коэффициент запаса, равный 10.
Если вещество отнесено к стабильным (2 класс стабильности),
класс опасности остается неизменным, но в величину ПДК вводится
дополнительный коэффициент запаса K = 5.
з
Для веществ 3 класса стабильности при оценке опасности на первое место выступает сравнительная оценка опасности исходного вещества и продуктов трансформации. Норматив устанавливается по более опасному компоненту. Контроль по более опасному веществу (например, продукту трансформации) целесообразно периодически дополнять контролем за содержанием исходного вещества.
Для веществ 4 класса стабильности нормативы не устанавливаются. Разрабатываются рекомендации по очистке производственных сточных вод от этих соединений. Если вещества разлагаются с образованием компонентов, свойственных составу природной воды, контроль может осуществляться по этим показателям. Если образуются новые вещества, обосновываются нормативы для продуктов трансформации.
4.4. Определение пороговых концентраций по влиянию веществ на органолептические свойства воды
Целью изучения органолептических свойств воды является
установление пороговых концентраций веществ (ПК ).
орг
Исследование органолептических свойств воды осуществляется согласно МУ [33] и в соответствии с положениями, отраженными в работах [13, 14, 63].
Физиологически инертные вспомогательные вещества, абсолютно нерастворимые и несмачивающиеся, относящиеся к 4 классу опасности (ЛД50 > 10000), не вызывающие изменений в кратковременных опытах в дозах > 500 мг/кг, могут нормироваться как взвешенные природные вещества на уровне 0,25 мг/л.
4.5. Экспериментальное установление пороговых концентраций веществ по влиянию на процессы самоочищения водных объектов
Целью экспериментального гигиенического исследования влияния
ЛС на процессы естественного самоочищения водных объектов является
обоснование пороговых концентраций вещества по общесанитарному
признаку вредности (ПК ).
сан
Исследования осуществляются согласно МУ [33] и в соответствии с положениями, отраженными в работах [9, 14].
4.6. Установление смертельных эффектов веществ
В острых опытах устанавливают среднесмертельные дозы (ЛД50) на лабораторных животных.
Острая токсичность изучается при введении в желудок, нанесении на кожу, а в дополнительных опытах - для решения специальных задач - при парентеральном введении, например внутрибрюшинном. Общепринятыми методами устанавливаются значения среднесмертельных доз [25, 27].
Токсичность при накожном нанесении изучается согласно Методическим рекомендациям 2377-81 [23].
В дополнение к ЛД50 по данным острого опыта рассчитывают параметры, дающие первое представление о способности веществ к кумуляции: среднее время гибели (ЛТ50) и индекс кумуляции [61].
При нормировании ЛС, как правило, достаточен минимальный объем острых экспериментов с целью определения идентичности исследуемого образца изученному в доклинических испытаниях препарату. В ряде случаев вместо животных можно ограничиться опытами на культуре клеток или других доступных биотестах, например дафниях, в соответствии с методическими указаниями [30] и Приложением 11.
4.7. Порог однократного действия при поступлении ЛС в организм
Определение порога однократного действия ЛС необходимо в тех случаях, когда не установлены терапевтические разовые и суточные дозы.
Цель исследования:
- определить верхний предел доз для подострого эксперимента и оптимальное время наблюдения после введения вещества;
- получить характеристику кумулятивных свойств;
- при необходимости - изучить токсикокинетику и процесс детоксикации вещества;
- рассчитать зону острого действия.
4.7.1. Порог однократного действия определяется на белых
крысах по интегральным и специфическим показателям с обязательным
определением изменений в динамике в течение суток (или нескольких
суток - в зависимости от ЛТ50). Время первого определения
устанавливается исходя из клинической картины отравления в остром
опыте, но не позднее 2 часов, затем, например, через 4 или 6 - 12
- 24 часа после затравки, а также через 2, 4 и 8 дней после нее.
Возможны и другие сроки наблюдения с учетом токсикодинамики и/или
токсикокинетики. Порог однократного действия может быть установлен
min
эмпирически или рассчитан как вероятностная величина (D 50 -
среднепороговая величина однократного действия) или дополнен
результатами токсикокинетических исследований.
4.7.2. Для специальных научных целей можно определить кинетику накопления и выявления вещества и/или его метаболитов в организме.
4.8. Токсикометрия в подострых опытах
Подострые опыты направлены на получение следующей информации:
- способность веществ к кумуляции;
- наиболее поражаемые функции, органы, системы организма, механизм токсического действия;
- пороговые дозы подострого или субхронического действия вещества на организм.
4.8.1. Для оценки кумуляции по смертельному эффекту целесообразно использовать метод Ю.С. Кагана и В.В. Станкевича, согласно которому подопытным животным в течение 4 месяцев вводится ежедневно вещество в нескольких постоянных дозах с последующим расчетом коэффициента кумуляции.
Процессы материальной кумуляции и детоксикации веществ целесообразно изучать в специальных токсикокинетических исследованиях.
4.8.2. Наибольшую информативную ценность представляет
подострый эксперимент, направленный на определение характера
(механизма) токсического действия; изучение токсикодинамики в
рамках зависимости "доза-эффект" во времени; установление
пороговой дозы подострого эксперимента (ПД ); расчет зоны
пэк
кумулятивного действия; установление класса опасности по
кумуляции; прогноз пороговой дозы хронического действия (ПД ).
хр
Условия проведения подострого опыта должны соответствовать требованиям, представленным в [33].
Набор методов должен предусматривать изучение как специфического, так и общетоксического действия по интегральным показателям. При оценке ЛС специфические эффекты связаны с механизмом фармакологического действия, "побочное действие" с гигиенических позиций рассматривается как общетоксическое, а "противопоказания" могут дать основания к дополнительному исследованию отдаленных (гонадо-, эмбриотоксичность, мутагенез) и нежелательных специфических (сенсибилизация, иммунотоксичность) эффектов.
4.8.3. В эксперименте изучается не менее 3 доз вещества. Выбор доз осуществляется на основе прогноза ПД и МНД, результатов определения порогов острого действия.
Для ЛС, принимаемых внутрь, дозы определяются исходя из суточной терапевтической дозы. При этом высшая доза для подострого эксперимента должна быть в 5 - 10 раз ниже суточной терапевтической дозы, выраженной в мг/кг. Возможен пересчет терапевтических суточных доз веществ, вводимых парентерально, исходя из полученных в доклинических испытаниях соотношений терапевтической активности при разных путях поступления.
Шаг между дозами определяется кумулятивностью вещества: 3 - 5-кратный - для 3 - 4 классов, 5 - 10-кратный - для 1 - 2 классов кумуляции. Одним из критериев способности к кумуляции служит зона терапевтического действия: чем больше зона терапевтического действия (ЛД50/ТД), тем больше выражена способность к кумуляции.
4.8.4. Исследования проводятся, как правило, на белых крысах. При выраженных (более 5 раз) различиях в видовой чувствительности по ЛД50 обязательны дополнительные исследования на наиболее чувствительном виде животных. Вид подопытных животных определяется также особенностью биологических эффектов изучаемого вещества. Например, для изучения аллергенного эффекта используются морские свинки, для выявления мутагенного эффекта - специальные линии мышей, для определения влияния на микрофлору кишечника - белые крысы и т.п.
4.8.5. Длительность опыта - не менее 30 дней. Однако опыт может быть продлен до 2 - 3 месяцев, если известно, что изучаемый препарат вызывает изменение замедленно реагирующих систем, например липидного обмена, костной системы, обмена кальция и т.п.
После снятия фоновых показателей проводятся наблюдения на 5 - 10 - 20 и 30 сутки. Если не определялся порог однократного действия, необходимо исследование в 1 сутки.
4.8.6. В подостром опыте применяются дополнительные функциональные (физическая, термическая и т.п.) или материальные (амидопириновая, гексеналовая и т.п.) нагрузки: однократно в конце опыта или через каждые 2 недели. При выборе нагрузки следует учитывать данные исследования, свидетельствующие о том, что чем более нагрузка соответствует механизму действия ЛС, тем более закономерные данные могут быть получены (Приложения 3, 4).