Методические указания му 1 5-09 Издание официальное Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Москва, 2009 г (стр. 5 из 13)
Температура растворов нейтрализаторов должна быть +200С, независимо от температуры окружающей среды.
Готовые растворы должны использоваться в день приготовления. Допускается хранение готовых растворов при температуре +4 0С в течение 48 часов.
Контроль полноты нейтрализации остаточного действия испытываемого ДС.
Несмотря на существующие рекомендации по применению нейтрализаторов для различных действующих веществ (ДВ), многие современные ДС содержат несколько ДВ и другие вспомогательные вещества, обладающие бактериостатическим действием, и существующие (рекомендуемые) нейтрализаторы могут не обеспечивать эффективной нейтрализации остаточного действия ДС в пробе. В этой связи, результаты оценки эффективности ДС могут быть необъективными.
Поэтому каждый случай проведения испытания ДС должен предварительно сопровождаться экспериментальным контролем эффективности нейтрализации остаточного действия ДС на микробную клетку.
Для контроля эффективности нейтрализатора и полноты нейтрализации ДС используют суспензионный метод, предусматривающий проведение исследования, основные операции которого и их назначение приведены на схеме 2 и в таблице 2.
Схема 2.
Проведение эксперимента по контролю эффективности нейтрализации действия ДС на микобактерии используемым нейтрализатором
Стерильный нейтрализатор
Рабочий раствор ДС Стерильнаядист. вода
по1 мл. по 1 мл.  |
 |
 |
 |
1 мл.
9 мл суспензиии 9 мл суспензии. 9 мл суспензии 9 мл суспензии
микобактерий на д.в микобактерий на микобактерий на микобактерий на д.в103 КОЕ/мл нейтрализаторе нейтрализаторе 103 КОЕ/мл
103 КОЕ/мл 103 КОЕ/мл  | |
 |  |
1 2 3 4  |
 |
 |
Пробирки со скошенной плотной питательной средой Левенштейна -Йенсена или «Новая»
Таблица 2- Назначение операций эксперимента по оценке эффективности нейтрализации остаточного действия ДС
| № пробы | Назначение операции исследования | Процедура выполнения операции исследования | Ожидаемый результат |
| 1. | Контроль губительного действия ДС | к 9 мл суспензии тест-штамма (103 КОЕ/мл) на д.в. + 1 мл раствора ДС | Рост микроорганизмов должен отсутствовать |
| 2. | Контроль полноты нейтрализации ДС | к 9 мл суспензии тест-штамма (103 КОЕ/мл) на нейтрализаторе + 1 мл раствора дезсредства | Примерно одинаковое количество колоний в посевах проб (по 0,1 мл) на плотной питательной среде |
| 3. | Контроль отсутствия антимикробного эффекта у нейтрализатора | к 9 мл суспензии тест-штамма (103 КОЕ/мл) на нейтрализаторе + 1 мл раствора нейтрализатора | |
| 4. | Референс - контроль количества микобактерий | к 9 мл суспензии тест-штамма (103 КОЕ/мл) на д.в. + 1 мл д.в. | |
| Примечание: спустя 5 минут после постановки опыта, из каждой из четырех проб производят посев смеси по 0,1 мл, как минимум, на 3 пробирки со скошенной питательной средой, которые инкубируют в термостате при 370С, по истечении 14-21 суток учитывают результаты исследований. | |||
5. Методы исследований и оценки туберкулоцидной активности дезинфицирующих средств и их субстанций in vitro
5.1. Суспензионный метод
Суспензионный метод оценки туберкулоцидной активности ДС и их субстанций используют для получения первичной информации о концентрационных и временных параметрах эффективного (отсутствие жизнеспособных микобактерий) туберкулоцидного действия ДС. Методология выполнения эксперимента по оценке туберкулоцидной активности ДС суспензионным методом приведена на схеме рисунка 3.
Как видно из схемы 3, для проведения опыта по оценке туберкулоцидных свойств дезинфицирующего средства суспензионным методом необходимо приготовить:
- рабочую суспензию штамма тест-микобактерий с концентрацией не менее 1∙109 КОЕ/мл (это обеспечивает возможность создания в смеси дезинфектанта с суспензией (обоснованной и применяемой для этого метода оценки ДС) концентрации микроорганизмов порядка 1∙108 КОЕ/мл;
- пробирки со стерильной дистиллированной водой для проведения контроля реальной биологической концентрации (БК) тест-микроорганизма в суспензии, используемой в опыте;
- пробирки или флакон с раствором ДС в испытываемой концентрации в количестве, необходимом для обеспечения отбора всех проб;
- необходимое количество пробирок (в зависимости от количества проб, отбираемых для определения времени, обеспечивающего полную гибель тест-микроба), содержащих по 9 мл нейтрализатора, проверенного предварительно на эффективность нейтрализации остаточного действия испытываемого ДС (см. п. 5);
- чашки Петри со стерильной плотной питательной средой или пробирки со скошенной стерильной плотной питательной средой в количестве, необходимом для посева пробы контроля исходной суспензии и проб контроля эффективности действия ДС на тест-микроб.
Схема 3.
Проведение эксперимента по оценке туберкулоцидной активности ДС суспензионным методом
Методика проведения самого опыта включает, как видно из схемы, последовательное выполнение следующих операций:
- тщательное перемешивание хранимой в пробирке или во флаконе рабочей суспензии тест-микроорганизма путем встряхивания ее в течение 2-3 минут;
- помещение испытываемого рабочего раствора ДС в водяную баню с заданной температурой; если задачей эксперимента не предусмотрено изучения влияния воздействия температуры на эффективность средства, то оценка эффективности раствора испытываемого средства осуществляется при температуре 18-200С;
- проведение контроля реальной на момент проведения опыта биологической концентрации (БК) тест-микроорганизма в суспензии (см. п. 4.3.);
- внесение в испытываемый дезинфицирующий раствор рабочей суспензии тест-микроорганизма с обеспечением соотношения ДС и суспензии тест-микроорганизма 9:1;
- перемешивание смеси и отсчет по секундомеру времени начала воздействия ДС на тест-микроорганизм;
- по окончании каждой заданной экспозиции проведение отбора пробы в количестве 3 мл, которую по 1 мл вносят в 3 пробирки, содержащих по 9 мл стерильного раствора нейтрализатора остаточного действия дезинфекционного средства на тест-микроорганизм;