Оценку результатов проводят по посеву того разведения, в котором число колоний на чашке Петри или в пробирке составляет от 30 до 300.
После выдерживания посевов в термостате подсчитывают число колоний на чашках или пробирках с плотной питательной средой, рассчитывают остаточную плотность контаминации на 100 см2 тест-поверхности и высчитывают эффективность обеззараживания, принимая количество тест-микроорганизмов, снятых с контрольных тест-объектов (тест-поверхностей), за 100 %.
Например: на 100 см2 контрольной тест-поверхности по результатам бактериологического контроля онаружено 148000 микробных клеток, а на аналогичного вида опытной тест-поверхности - 20 микробных клеток.
148000 - 100 % х=20•100:148000=2:148=0,013 %
20 - х
Эффективность обеззараживания опытной тест-поверхности составляет
100 - 0,013=99,987 %.
Критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-поверхностей из различных материалов, контаминированных тест-микроорганизмом равна не менее 99,99 %.
6.2. Обеззараживание предметов ухода за больными
и игрушек из различных материалов (кроме мягких)
В исследованиях используют тест-объекты (100 см2) и предметы ухода за больными из различных материалов: резин на основе натурального и силиконового каучука (медицинская клеенка, грелка, груша); стекла (поильник; плевательница; градусник); пластмасс (грелка, лоток; наконечник для клизм); металлов (таз, стакан для термометра); игрушки (кроме мягких) из резин и пластмасс.
Тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки из различных материалов тщательно моют водой с мылом и щеткой. Тест-объекты стерилизуют паровым или воздушным методом.
Готовят суспензию тест-микобактерий, содержащую 2,0∙109 КОЕ/мл. При наличии у средства фиксирующих свойств к суспензии добавляют 40,0% лошадиной сыворотки, инактивированной при 560С в течение 30 минут (к 6 мл 2-х млрд суспензии прибавляют 4 мл сыворотки).
С помощью одноканального механического дозатора или стеклянной пипетки на поверхность тест-объекта, предмета ухода за больными, игрушки наносят 0,5 мл суспензии тест-микроорганизма. Суспензию равномерно распределяют по поверхности (100 см2) стерильным стеклянным шпателем. Каналы и полости предмета ухода за больными, игрушек заполняют с помощью шприца. Мелкие игрушки полностью погружают в суспензию. Контаминированные тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки подсушивают при комнатной температуре до полного высыхания (60-120 минут).
Растворы ДС готовят на водопроводной воде температуры 20±2ºС. Обеззараживание осуществляют способом погружения, протирания, орошения. После подсушивания контаминированные тест-объекты, предметы ухода за больными, игрушки, в том числе имеющие каналы и полости, погружают в раствор испытуемого ДС или протирают салфеткой, смоченной им. Мелкие игрушки полностью погружают в емкость с раствором ДС, препятствуя их всплытию; крупные игрушки обеззараживают способом орошения. Норма расхода ДС способом протирания из расчета 100-150 мл/м2 при однократной обработке и 200-300 мл/м2 при двукратной; способом орошения – 150/м2 при обработке распылителем типа «Квазар» и 300 мл/м2 – при обработке распылителем типа «Автомакс» или гидропультом. При необходимости обработку способом протирания или орошения повторяют через 5-15 минут.
Для контроля эффективности обеззараживания через определенные промежутки времени после обработки (30-60-120 минут) тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки извлекают из раствора, делают смывы стерильной марлевой салфеткой (5см2), увлажненной нейтрализатором. Салфетки погружают в стерильный раствор нейтрализатора на 5 минут, затем переносят в пробирки (емкости) с бусами и стерильной питьевой водой (10 мл) и встряхивают на шейкере в течение 10 минут. Каналы и полости промывают нейтрализатором (10 мл), который собирают в стерильные пробирки (емкости) и оставляют на 10 минут для нейтрализации.
Полученную смывную жидкость и смывную жидкость из каналов вносят по 0,1 мл на скошенную поверхность плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена или «Новая» 3-5 пробирок. В контрольных опытах вместо раствора ДС используют стерильную питьевую воду.
Посевы инкубируют в термостате при температуре 37±1оС.
Результаты учитывают через 10-21 сутки инкубирования.
Эффективности ДС при обеззараживании тест-объектов, предметов ухода за больными и игрушек из различных материалов (кроме мягких), контаминированных тест-микроорганизмом должна быть не менее 100%.
6.3. Обеззараживание посуды столовой, лабораторной
и из-под выделений
Для определения туберкулоцидной активности ДС, предназначенных для обеззараживания посуды, используют в качестве тест-объектов набор столовой и чайной посуды: тарелки, стаканы, кружки из различного материала (фарфор, фаянс, алюминий, стекло, пластик, посуда, покрытая эмалью); столовые приборы: ножи, вилки, ложки из различного материала (нержавеющая сталь, алюминий, пластик), посуду одноразового использования и набор лабораторной посуды, представляющий тест-объекты из стекла и пластмасс: предметные и покровные стекла, пипетки, чашки Петри, планшеты для иммунологического анализа и другое; посуда из-под выделений (мочеприемники, подкладные судна). Перед экспериментом посуду и столовые приборы моют водой с мылом и щеткой и высушивают.
На посуду (площадь в 100 см2) пипеткой наносят суспензию тест-микроорганизма из расчета 0,5 мл суспензии, содержащей 2∙109 КОЕ в 1 мл. Суспензию тест-микроорганизма равномерно распределяют по поверхности посуды стеклянным шпателем. Столовые приборы для контаминации погружают в бактериальную суспензию на 1-2 мин, оставляя незараженными их ручки. Контаминированную посуду подсушивают (до полного высыхания) при комнатной температуре (60-120 мин) и относительной влажности воздуха 50-60 %.
Для разработки режимов обеззараживания посуды с остатками пищи при контаминации используют суспензию тест-микроорганизма, смешанную с овсяной, манной или другой кашей, сваренной на молоке со сливочным маслом (к 10 г каши добавляют 1 мл 2-х миллиардной микробной взвеси). Для имитации загрязнения чайной посуды используют кисель (к 10 г киселя добавляют 1 мл 2-х миллиардной микробной взвеси), лабораторной посуды -
40,0% инактивированной сыворотки, посуды из-под выделений – 20,0% эмульсию фекалий, предварительно растертую в ступке.
Обработку столовой, чайной, лабораторной посуды, столовых приборов проводят способом погружения в дезинфицирующий раствор. Растворы готовят на питьевой воде. Температура испытуемого раствора 18-20оС. При необходимости изучают эффективность растворов ДС при температуре 50оС.
Дезинфицирующий раствор должен полностью заполнять и с избытком покрыть всю посуду и приборы (из расчета не менее 2 л на 1 комплект). Время обеззараживания посуды - от 15 до 240 минут, в зависимости от вида ДС и наличия загрязнения.
Через определенные интервалы времени (например, 15, 30, 60 минут и т.д.) извлекают по одному предмету разных наименований (например, тарелка, стакан, предметное стекло, нож и т.д.) из дезинфицирующего раствора и стерильной марлевой салфеткой (5 см2), смоченной в растворе нейтрализатора, соответствующего данному ДС, тщательно протирают зараженную часть каждого предмета и погружают в 10 мл этого же нейтрализатора на 5 минут, затем салфетку переносят в пробирку со стерильной питьевой водой и бусами. Время отмыва марлевой салфетки - 10 минут при постоянном встряхивании на шейкере. После отмыва смывную жидкость по 0,1 мл высевают в 3-5 пробирки со скошенной поверхностью плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена или «Новая» (по 0,1 мл в каждую). Посевы помещают в термостат при температуре 370С. Предварительный учет результатов проводят через 10-14 суток, окончательный – через 21 сутки.
Контролем служит аналогично контаминированная посуда, которая погружается не в дезинфицирующий раствор, а в такой же объем стерильной питьевой воды.
Критерий эффективности обеззараживания посуды: гибель тест-микроорганизма не менее 100 %.
6.4. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС, предназначенных для обеззараживания изделий медицинского назначения (ИМН), включая эндоскопы
6.4.1. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС, предназначенных для обеззараживания ИМН из различных материалов
(кроме эндоскопов)
В качестве тест-изделий используют стерильные инструменты и другие ИМН, в том числе однократного применения, из различных материалов (металлов, резин, стекла, пластмасс) или имитирующие их тест-объекты. Перечень инструментов, должен включать разнообразные по форме, характеру поверхности и используемому материалу изделия (гладкие изделия простой конфигурации; изделия, имеющие замковые части, каналы и полости, имеющие насечки и напыления, изделия извитой формы; изделия, изготовленные из нескольких видов материалов и т.д.).
На рабочую поверхность тест-изделия (у замковых изделий - также в область замка, а при наличии каналов и полостей - также в канал изделия) наносят 0,1 мл суспензии, содержащей 2∙109 КОЕ/мл тест-микроорганизма, содержащей 40 % инактивированной лошадиной сыворотки. Мелкие тест-изделия для контаминации погружают в эту суспензию на 15 мин. Контаминированные тест-изделия подсушивают в термостате в течение 20-25 мин. Дезинфицирующие растворы готовят на питьевой воде комнатной температуры или подогретой до (50±1)0С.
После подсушивания контаминированные изделия погружают в раствор испытываемого средства, заполняя им все каналы и полости изделий, избегая образования воздушных пробок. Инструменты, имеющие замковые части, погружают раскрытыми, предварительно сделав ими в растворе ДС несколько рабочих движений для лучшего проникновения раствора в труднодоступные участки изделия в области замка. Толщина слоя раствора средства над изделиями должна быть не менее 1 см. Параллельно контаминированные контрольные изделия погружают в воду.