«использование ит в исследованиях биофизических свойств клеток крови» (стр. 4 из 5)
При изучении кинетики генерации Н2О2 нейтрофилами при действии растительных лектинов было выявлено два различных эффекта влияния экстракции холестерина из мембраны на скорость генерации Н2О2. Обработка нейтрофилов MβCD увеличивала скорость окисления скополетина при действии таких лектинов, как САВА, PHA-L, PHA-E, UDA, WGA и Con A (рисунок 3.4A) – т.е. для большинства тестируемых лектинов наблюдался эффект праймирования НАДФН-оксидазной системы обработанных MbCD нейтрофилов. Однако, экстракция холестерина MβCD уменьшала скорость SBA- и SNA-индуцированной генерации пероксида водорода нейтрофилами (рисунок 3.4Б).
Итак, увеличение лаг-периода и увеличение скорости лектин-индуцированной продукции Н2О2 нейтрофилами после обработки циклодекстринами свидетельствуют о нарушении динамики сборки НАДФН-оксидазного комплекса в плазматической мембране обедненной холестерином. Не исключено, что ключевую роль в этих процессах играет специфическая кластеризация мембранных гликорецепторов, необходимая для эффективной агрегации клеток [4].
 |  |
Рисунок 3.4 – Кинетические кривые интенсивности флуоресценции скополетина в суспензии контрольных (1) и PHA-L- (A) и SNA-активированных (Б) нейтрофилов в отсутствие (2) и в присутствии MβCD (3). Нейтрофилы инкубировали в течение 10 мин при 37°С в присутствии MβCD (10 мМ) до внесения лектинов (50 мкг/мл). Измерения проводили при 37°С
3.2 Влияние MβCD на лектин-индуцированную агрегацию нейтрофилов
Турбидометрический метод изучения агрегации, предложенный Борном и О'Брайеном, является в настоящее время наиболее распространенным при исследовании агрегации нейтрофилов. Он основан на регистрации изменений светопропускания суспензии нейтрофилов в буфере.
Для подтверждения участия специфической кластеризации мембранных гликорецепторов в процессе сборки НАДФН-оскидазы было исследовано влияние MbCD на агрегацию нейтрофилов при действии лектина WGA. Специализированное программное обеспечение использованного агрегометра Agr Version 2.01, к сожалению, не обладает необходимыми возможностями для обработки полученных данных, однако позволяет выводить данные в формате ASCII, которые, опять же, в таком виде могут быть импортированы в Origin (см. ранее).
В качестве примера рисунке 3.5 представлена типичная кинетика WGA-индуцированной агрегации нейтрофилов, полученная при помощи – при добавлении к нейтрофилам лектина WGA наблюдается увеличение светопропускания суспензии клеток (рисунок 3.5А, кривая 1), что свидетельствует об образовании клеточных агрегатов. Методом световой микроскопии показано, что в образцах клеточных суспензий, зафиксированных при максимальной степени агрегации после добавления WGA, практически все клетки находились в агрегированном состоянии (рисунок 3.5В). После обработки клеток MbCD степень WGA-индуцированной агрегации нейтрофилов снижается по сравнению с контролем (рисунок 3.5А, кривая 2). На фотографиях суспензий видно, что обработка клеток MbCD при WGA-индуцированной агрегации приводила к уменьшению размеров агрегатов нейтрофилов и увеличению доли единичных, не находящихся в агрегатах клеток (рисунок 3.5Г).
 А |
| |
| |
