Количественный анализ силибина в экстрактах, полученных с использованием субкритической воды (стр. 4 из 6)
Для веществ, которые плавятся с разложением, обычно указывается температура, при которой вещество разлагается и происходит резкое изменение его вида.
Критериями чистоты являются также цвет ЛВ и/или прозрачность жидких лекарственных форм [16].
Определенным критерием чистоты ЛС могут служить такие физические константы, как показатель преломления луча света в растворе испытуемого вещества (рефрактометрия) и удельное вращение, обусловленное способностью ряда веществ или их растворов вращать плоскость поляризации при прохождении через них гаюскополяризованного света (поляриметрия). Методы определения этих констант относятся к оптическим методам анализа и применяются также для установления подлинности и количественного анализа ЛС и их лекарственных форм.
Важным критерием доброкачественности целого ряда ЛС является содержание в них воды. Изменение этого показателя (особенно при хранении) может изменить концентрацию действующего вещества, а, следовательно, и фармакологическую активность и сделать ЛС не пригодным к применению [17].
Химические методы. К ним относятся: качественные реакции на подлинность, растворимость, определение летучих веществ и воды, определение содержания азота в органических соединениях, титриметрические методы (кислотно-основное титрование, титрование в неводных растворителях, комплек-сонометрия), нитритометрия, кислотное число, число омыления, эфирное число, йодное число и др.
Биологические методы. Биологические методы контроля качества ЛС весьма разнообразны. Среди них испытания на токсичность, стерильность, микробиологическую чистоту.
Для проведения физико-химического анализа полупродуктов, субстанций лекарственных средств и готовых лекарственных форм при проверке их качества на соответствие требованиям ФС контрольно-аналитическая лаборатория должна быть оснащена следующим минимальным набором оборудования и приборов:
1. ИК-спектрофотометр (для определения подлинности);
2. спектрофотометр для спектрометрии в видимой и УФ-области (определение подлинности, количественное определение, однородность дозирования, растворимость);
3. оборудование для тонкослойной хроматографии (ТСХ) (определение подлинности, родственных примесей);
4. хроматограф для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (определение подлинности, количественное определение, определение родственных примесей, однородности дозирования, растворимости);
5. газожидкостной хроматограф (ГЖХ) (содержание примесей, определение однородности дозирования);
6. поляриметр (определение подлинности, количественное определение);
7. потенциометр (измерение рН, количественное определение);
8. атомно-абсорбционный спектрофотометр (элементный анализ тяжелых металлов и неметаллов);
9. титратор К. Фишера (определение содержания воды);
10. дериватограф (определение потери массы при высушивании).
1.4 Основные направления поиска и создания лекарственных веществ
Создание лекарственного препарата – длительный процесс, включающий несколько основных этапов – от прогнозирования до реализации в аптеке [3, 18].
В создании новых ЛС участвуют представители многих профессий: химики, биологи, фармацевты (провизоры), фармакологи, токсиколога, врачи-клиницисты. Однако совместные усилия специалистов не всегда завершаются успешно. Из мировой фармацевтической практики следует, что из 10 тыс. вновь синтезированных органических соединений только одно может использоваться как лекарственное средство [19].
Основой прогнозирования биологической активности лекарственного вещества является установление связи между фармакологическим действием (биологической активностью) и структурой с учетом физико-химических свойств лекарственного вещества и биологических сред.
лекарственный растение экстракт силибин
2. Экспериментальная часть
Экспериментальная часть работы посвящена получению «водного» экстракта субкритической водой при температуре 100°С, упаривание его до сухого остатка и оценка растворимости полученного «сухого» экстракта в водной и спиртовой средах.
2.1 Реагенты и оборудование
При выполнении измерений использовалось следующие средства измерения, оборудование и реактивы:
· Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2 класса точности
· Набор гирь Г-2-200 - ГОСТ 7328
· Экспериментальная установка для ЭСВ
· Плоды расторопши пятнистой
· Высокоэффективный жидкостный хроматограф «Biotronik» со спектрофотометрическим детектором λ=190-700нм
· Хроматографическая колонка из нержавеющей стали фирмы «Phenomenex», USA, длиной 250 мм, диаметром 4,6 мм с неподвижной фазой С18, зернением 5 мкм
· Кислота соляная - ТУ 6-09-2540-87
· Вода дистиллированная - ГОСТ 6709
· Метанол, х.ч. - ГОСТ 6995
· ГСО силибина
· Ацетонитрил «extrapure» фирмы «MERCK»
· Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч.д.а. - ТУ 6-09-5324-87
· Универсальные индикаторные бумаги рН=0-12
· Гелий газообразный - ГОСТ 9093-74
· Мерная колба вместимостью 1000 см3
· Цилиндры мерные 2-100, 2-500 – ГОСТ 1770-74
· Шприцы медицинские 1 мл, 5 мл
· Микропипетки на 200 мкл – ГОСТ 29169
· Микрошприц фирмы «Hamilton» на 100 мкл.
2.2 Условия выполнения измерений
· Температура окружающей среды(20 ± 5)°C;
· Относительная влажность(80 ± 5) %;
· Атмосферное давление(94 – 106) кПа;
· Частота переменного тока(50 ± 1) Гц;
· Напряжение в сети(220 ± 10) В.
2.3 Условия безопасного проведения работ
При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.4.021, электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, организации обучения работающих безопасности труда по ГОСТ 12.0.004. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
2.4 Методика эксперимента и схема описания установки для
экстракции водой в субкритическом состоянии
С целью постановки эксперимента по получению экстрактов плодов расторопши при температуре 100°С и давлении 0,5 МПа была сконструирована и смонтирована установка для экстракции водой в субкритическом состоянии, схема которой представлена на рисунке 1.
Рис. 1. Схема установки для экстракции субкритической водой:
1 - сосуд с водой; 2 - насос высокого давления; 3 - капилляр предварительного нагрева воды; 4 - экстрактор; 5 - термостат; 6 - охлаждаемый капилляр; 7 - манометр; 8 - регулятор давления
В данной установке дистиллированная дегазированная вода из сосуда 1 подается в насос высокого давления 2, обеспечивающий расход в системе от 0,1 до 10,0 см3/мин при давлении до 40,0 МПа. Из насоса 2 вода поступает в капилляр предварительного нагрева воды 3 и экстрактор 4, помещенные в термостат 5. Экстрактор 4 выполнен в виде колонки из нержавеющей стали длиной 250 мм и внутренним диаметром 10 мм. На выходе из экстрактора 4 установлен капилляр 6, охлаждаемый до Т = 20°С. Для контроля давления в системе установлен образцовый манометр 7 и регулятор давления 8.
2.4.1 Подготовка лекарственного растительного материала для
экстракции
На основании анализа литературных источников было установлено, что максимальное содержание биологически активных соединений находится в плодах расторопши пятнистой, причем более 95% этих соединений содержится в лузге.
Кроме того, выбор лузги семян расторопши пятнистой с зернением 0,1-0,3 мм обусловлен тем, что при этом обеспечивается хорошая проницаемость подвижной фазы в экстракторе, заполненном лузгой.
Для проведения эксперимента по экстракции была использована фракция лузги расторопши пятнистой, приготовленная из одной партии плодов растения, предоставленной ЗАО «Самаралектравы» (с. Антоновка, Самарская область).
Приготовление лузги расторопши пятнистой осуществлялось следующим образом: проводили измельчение плодов, затем отсеивали лузгу от муки семян расторопши пятнистой на почвенных ситах диаметром ячейки 0,1 – 0,5 мм.
2.4.2 Методика проведения экстракции субкритической водой
Заполнение экстракционного сосуда лузгой семян расторопши пятнистой проводили методом сухого заполнения колонны экстрактора, предварительно на одну часть колонны устанавливали фитинги и фритты. На заполнение экстракционного сосуда требовалось в среднем 11,4 г навески лузги. Затем на открытую часть колонны экстрактора также устанавливали фитинги и фритты. Экстрактор устанавливали в термостат, заполняли подвижной фазой и устанавливали требуемые для опыта температуру и давление.
Затем в течение 20-30 мин выдерживали систему в статическом режиме, после чего процесс экстракции проводили динамическим способом в течение 40-60 мин при расходе подвижной фазы 1 мл/мин, отбирая по 5мл в коллектор фракций с последующим их анализом методом обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией.
2.5 Подготовка хроматографа к работе и проведение