Штамм «с» это Г+ кокки. Однако в более молодой культуре он был представлен Г+ палочками. Также можно отметить, что штамм 19 это грамвариабельные неспоровые палочки.
В работе использовано 13 культур микроорганизмов. Были исследованы физиолого-биохимические свойства по 17 тестам. Результаты приведены в таблице 2.
Таблица 2. Физиолого-биохимические свойства микроорганизмов
| № штамма | 1 | 3 | хх | 5 | 4 | 14 | 15 | 17 | 19 | а1 | а2 | b | с |
| тест | |||||||||||||
| утилизация глюкозы | + | + | + | + | - | + | + | - | + | - | - | + | - |
| утилизация фруктозы | + | + | + | + | - | + | + | + | - | - | + | + | - |
| утилизация маннозы | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - |
| утилизация мальтозы | + | + | + | + | - | + | + | + | - | - | - | - | - |
| утилизация лактозы | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| утилизация трегалозы | + | + | + | + | - | + | + | + | - | - | - | - | - |
| утилизация маннита | + | + | + | + | - | + | + | + | + | - | - | - | - |
| наличие фосфатазы | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| наличие нитратредуктазы | + | + | + | + | - | + | + | + | + | - | + | - | - |
| образование ацетилметилкарбинола | + | + | + | + | - | + | + | + | - | - | - | - | - |
| наличие аргининдегидролазы | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | - | - |
| утилизация ксилозы | + | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | - | - |
| утилизация сахарозы | + | + | + | + | - | + | + | + | - | - | - | - | - |
| утилизация арабинозы | + | + | -+ | - | - | + | + | + | + | -+ | + | + | - |
| утилизация галактозы | +- | - | -+ | - | - | + | - | - | + | -+ | + | + | - |
| утилизация салицина | + | + | + | - | - | + | + | + | - | - | - | + | - |
| наличие уреазы | -+ | - | + | - | - | - | + | + | - | - | + | - | + |
Примечания: «+» – реакция положительная, «–» – реакция отрицательная, «-+», «+-» – цвет не полностью соответствует стандарту.
Все исследованные штаммы микроорганизмов обладают фосфатазой, аргининдегидролаза обнаружена только у одного штамма (с), утилизируют маннозу все штаммы за исключением штамма с. Утилизирует ксилозу только штамм с. Утилизация лактоза не обнаружена ни у одного из исследованных штаммов.
По итогам проведения микроскопических исследований можно предположить, что большинство из исследованных культур микроорганизмов относится к р. Bacillus.
Определение способности штаммов подвергать деградации различные ПАВ осуществляли с помощью метода лунок (Турковская, 1997).
В ходе эксперимента установлено, что выделенные штаммы характеризуются большей активностью по отношению к НПАВ (оценка не менее 4). Менее интенсивный рост отмечался в экспериментах с АПАВ и КПАВ (оценки от 2 до 5). Несмотря на это, отмечаются штаммы, имеющие высокую активность (оценка 4,5) в каждом варианте эксперимента (1,4,15, а2, а1) (см. приложение 2).
Таблица 3. Оценка активности штаммов-деструкторов ПАВ методом лунок
| № штамма | НПАВ | АПАВ | КПАВ |
| Оценка | |||
| 1 | 5 | 4 | 5 |
| 3 | 5 | 4 | 3 |
| 4 | 5 | 4 | 5 |
| 5 | 5 | 4 | 3 |
| 14 | 4 | 5 | 3 |
| 15 | 5 | 4 | 5 |
| 17 | 5 | 5 | 3 |
| 19 | 4 | - | - |
| а1 | 5 | 4 | 4 |
| а2 | 5 | 4 | 5 |
| b | 5 | 4 | 4 |
| с | 5 | 2 | 3 |
| хх | 5 | 4 | 3 |
Примечание: 5 баллов – очень хороший рост; 4 балла – хороший рост; 3 балла – рост средней интенсивности; 2 – слабый рост.
Микроорганизмы, характеризующиеся высокой активностью в присутствии ПАВ всех классов могут иметь большое значение в процессах очистки окружающей среды от загрязнения синтетическими моющими средствами.
Определение способности роста исследуемых штаммов микроорганизмов на питательном агаре (ПА) с добавлением СМС на основе АПАВ и КПАВ, а также с добавлением ПАА (НПАВ) производилось чашечным методом. Учет результатов производился через 2 суток. Результаты приведены в таблице 4.
Таблица 4. Результаты роста микроорганизмов на среде с различными ПАВ
| № штамма | Наличие роста, КОЕ/мл | ||
| КПАВ | АПАВ | НПАВ | |
| 1 | - | + | + |
| 3 | - | + | + |
| 4 | - | + | + |
| 5 | + | + | + |
| 14 | - | + | + |
| 15 | - | + | + |
| 17 | - | + | + |
| 19 | - | + | + |
| хх | - | + | + |
| а1 | + | + | + |
| а2 | + | + | + |
| b | + | + | + |
| с | + | + | + |
В ходе эксперимента рост микроорганизмов отмечался на средах с добавлением АПАВ и НПАВ. На среде с добавлением КПАВ только 5 штаммов обнаружили рост.
1. В ходе работы исследовано 13 культур микроорганизмов. Все культуры способны расти на средах с добавлением НПАВ и АПАВ. В эксперименте с использованием КПАВ обнаружен рост только 5‑ти культур (а1, а2, b, с, 5).
2. Наибольшей активностью исследуемые штаммы обладают по отношению к НПАВ.
3. Все исследуемые штаммы обладают фосфатазой, не утилизируют лактозу. Только штамм а2 обладает аргининдегидролазой. Большинство исследованных штаммов являются аэробными Г+ споровыми палочками. Это позволяет отнести их к роду Bacillus.
1. Абрамзон А.А. Поверхностно-активные вещества. Свойства и применение. – 2 изд. – Л., 1981. – 330 с.
2. Алексеева А.В. Коллоидная химия. – СПб: «Наука», 1998 – 290 с.
3. Аналитический обзор Комитета по природопользованию за 2005 год. / под ред. Голубева Д.В. и др. / – М.: «Сезам», 2006 – 25 с.
4. Вербина Н.М. Деградация микроорганизмами неприродных органических соединений в окружающей среде. – М.: Микробиология, 1978. – т. 7.
5. Глазовская М.А. Способность окружающей среды к самоочищению // Природа, 1979. – №3.
6. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии. – М.: ДеЛи принт, 2001. – 232 с.
7. Елинов М.Н. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1998. – 190 с.
8. Королев В.А. Очистка грунтов от загрязнений. – М.: МАИК Наука // Интерпериодика, 2001. – 365 с.
9. Никитин Д.П., Новиков Ю.В. Окружающая среда и человек: Учеб. пособие для студентов вузов. – М.: Высш. школа, 1980. – 424 с.
10. Новиков Ю.В. Экология, окружающая среда и человек: Учеб. пособие для вузов, средних школ и колледжей. – М.: Фаир-пресс, 2002. – 560 с.
11. Поликарпов Н. Действие ПАГов на микро- и макроорганизмы. Аналитический обзор. 2005 г.
12. Ротмистров М.Н., Ставская С.С. Микробиология очистки воды. – К.: Наук. думка, 1978 г. – 268 с.
13. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей р. Pseudomonas. – М.: Наука, 1986 г. – 352 с.
14. Савицкая М.Н., Холодова Ю.Д. Полиакриламид. – Киев: Техника, 1969. -188 с.
15. Ставская С.С. Биологическое разрушение АПАВ. – К.: Наук. думка, 1981 г. – 116 с.
16. Таубман А.Б., Маркина 3. H. Коллоидные поверхностно-активные вещества. / пер. с англ. / – M. – 1966 г. – 199 с.
17. Теппер Е.З. и др. Практикум по микробиологии / Шильникова В.К., Переверзева Г.И. – М.: Агропромиздат, 2004. – 233 с.
18. Турковская О.В. Биологические и технологические аспекты микробной очистки сточных вод и природных объектов от поверхностно-активных веществ и нефтепродуктов: Авт. дис. д.б.н. – Саратов, 2000. – 360 с.
19. Успехи коллоидной химии / под ред. И.В. Петрянова-Соколова, К.С. Ахмедова. – Ташкент, 1987.
20. Хотько Н.И., Дмитриев А.П. Водный фактор в передаче инфекций. / Материалы странички ПАВ. – М. – 2006 г.
21. Яковлев С.В. и др. Охрана окружающей среды: Учебник / С.В. Яковлев и др. – М.: Изд-во АСВ, 1998. – 180 с.
22. ГОСТ 17.4.4.02–84. Охрана природы. Почва. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического и гельминтологического исследования. – М.:Изд-во стандартов, 1981. – 6 с.
23. www.aquaria.com.ua/coretra.html
24. www.ecocoop.ru
Приложение
Среда М9 (г/л):
Na2HPO3 – 6,0
KH2PO4 – 3,0
NaCl – 0,5
NH4Cl – 1,0
НПАВ – 0,2–1,0
рН – 7,0–7,2
Панкреатический гидролизат рыбной муки – 24
Агар-агар – 12–14
NaCl– 4
Дистиллированная вода – 1 л
рН среды 7,3 – 7,5
Способ приготовления
38,0 г порошка размешать в 1 л дистиллированной воды, кипятить 2 мин. До полного расплавления агара, фильтровать через ватно – марлевый фильтр, разлить в стерильные флаконы и стерилизовать при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Среду охладить до температуры 45–50 °С, разлить в стерильные чашки Петри слоем 4–6 мм. После застывания среды чашки подсушить при температуре 37–38 °С в течение 40–60 мин (Теппер, 2004).