Разделение пигментов методом бумажной хроматографии (стр. 2 из 2)

Желтые пигменты

разведение	Д
1:0	0,745
1:1	0,35
1:2	0,274
1:3	0,235
1:4	0,19
1:5	0,165
1:6	0,133

Зеленые пигменты

разведение	Д
1:0	0,38
1:1	0,18
1:2	0,12
1:3	0,1
1:4	0,095
1:5	0,08
1:6	0,065

После измерения оптической плотности был построен калибровочный график.

Эквиваленты:

Хлорофилл а – 23,3 мг

Хлорофилл в – 31,5 мг

Каротин – 2,35мг

Виолоксантин – 2,7 мг

По калибровочному графику с помощью оптической плотности элюата нашли концентрации хлорофиллов и каротиноидов. (рис1)

Затем рассчитали содержание пигментов по формуле

Х= (С1*Vэл*Vэк)Vн*Р,

где С1- концентрация пигмента в элюате, определенная по калибровочному графику согласно оптической плотности;

Vэл – объем элюта, мл; Vэк – объем экстракта из навески, мл; Vн – объем раствора, нанесенного на бумагу, мл; Р – навеска в г.

Ха = (4,5мг/л*5мл*20мл)/2мл*1г=225мг/л

Хв = (1мг/л*5мл*20мл)/2мл*1г=50мг/л

Хкар = (1,2мг/л*5мл*20мл)/2мл*1г=60мг/л

Чтобы сравнить получившиеся данные по двум способам расчета пигментов, необходимо привести к одним единицам измерения.

Ха =225мг/л/1000 = 0,225 мг/г

Хв = 50мг/л/1000 = 0,05 мг/г

Хкар = 60мг/л/1000 = 0,06 м/г

Рис1. Калибровочная кривая для зеленых пигментов (ряд1 – хлорофилл а, ряд 2 – хлорофилл в)

Рис2. Калибровочная кривая для жлтых пигментов (ряд1 – каротиноиды, ряд2 – виолоксантин)

Вывод

В данной работе были использованы 2 метода определения и количественного подсчета пигментов: спектрофотометрический и бумажная хроматография (была использована одномерная хроматограмма). При этом значения содержания пигмента хлорофилла а получилось больше в методе бумажной хроматографии (Ха = 0,225мг/г) в то время как спектрофотометрический метод определил (Fа = 0,18мг/г); значения содержания пигмента хлорофилла в оказались больше при спектрофотометрическом методе(Fв = 1,35мг/г), а при бумажной хроматографии (Хв = 0,05мг/г). Значения по каротиноидам получились меньше при спектрофотометрии (Fкар = -0,34мг/г),при бумажной же хроматографии мы получили (Хкар = 0,06мг/г).Это может быть объяснено тем фактом, что метод бумажной хроматографии более точен.

Также в данной работе был использован колориметрический метод. На основе этого метода был построен график зависимости оптической плотности от концентраций хлорофиллов а, в и каротиноидов.

Список литературы

1.Гудвин Т., Сравнительная биохимия каротиноидов, пер. с английского, М., 1954.

2.Тимирязев К.А., Солнце, жизнь и хлорофилл, Избр. Соч., т.1, М., 1948.